检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2007年第1期37卷 1-6页

作者：赵晓宇姚利晓孙安国傅志强刘金明蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心上海200232

应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童... 详细信息

应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的蛋白斑点进行质谱和生物信息学分析的结果表明,它们代表了16种蛋白;对这些蛋白进行生物学功能预测的结果表明,它们可能与寄生虫的生物合成、能量代谢、信号传导和细胞构成等相关。

关键词：日本血吸虫童虫蛋白质组质谱

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日本血吸虫新基因SjPP的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果

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中国农业科学 2006年第8期39卷 1659-1666页

作者：姚利晓林矫矫傅志强朱传刚李浩陆珂刘金明石耀军沈阳蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心上海200232

目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研... 详细信息

目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。结果(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即mfs-1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY902477)长1311bp,编码302个氨基酸,理论分子量为34.7kD,等电点为5.51;其氨基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threoninespecificproteinphosphatase,简称PP)的保守序列LRGNHE,并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC,与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPⅤ等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性,分别达72%、70%和70%。(3)成功构建核酸疫苗pCMV-Script/SjPP,免疫BALB/c小鼠诱导产生肝组织减卵率为23.91%,粪便减卵率为31.91%。结论(1)获得日本血吸虫新的抗原基因SjPP。(2)含SjPP基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。

关键词：日本血吸虫东方田鼠丝/苏氨酸蛋白磷酸酶核酸疫苗免疫保护

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日本血吸虫SjPP基因原核表达蛋白的酶活性

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中国兽医科学 2008年第7期38卷 555-558页

作者：姚利晓王欣之傅志强陶丽红林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心

分别以磷酸苏氨酸多肽（K-R-pT-I—R—R）和4-硝基苯基磷基二钠盐（pNPP）为底物，研究原核表达的日本血吸虫丝／苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性，检测二价金属阳离子（Mn^2＋、Ni^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋）、温度、pH值对rSjPP酶... 详细信息

分别以磷酸苏氨酸多肽（K-R-pT-I—R—R）和4-硝基苯基磷基二钠盐（pNPP）为底物，研究原核表达的日本血吸虫丝／苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性，检测二价金属阳离子（Mn^2＋、Ni^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋）、温度、pH值对rSjPP酶活性的影响。结果显示，rSjPP重组蛋白可以有效地水解磷酸苏氨酸多肽，具有丝／苏氨酸蛋白磷酸酶活性。rSjPP酶活性的最适温度为60℃，最适pH值为8．0。1～4mmol／L Ni^2＋对rSjPP酶活力有促进作用，但Mn^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋等阳离子对rSjPP的酶活力影响不大。

关键词：日本血吸虫丝/苏氨酸蛋白磷酸酶酶活性影响因子

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早熟艾美耳球虫上海株的分离鉴定及生物学特性观察

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中国预防兽医学报 2010年第7期32卷 529-533页

作者：陈兆国米荣升于慧珠郝言明胡义彬黄燕李正锋李艳林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心上海200241

为分离和鉴定早熟艾美尔球虫(Eimeria praecox),观察其主要生物学特性,本研究采用单卵囊感染技术分离单一虫株,通过卵囊形态学、PCR技术和18SrRNA基因检测,对其进行性状观察、虫种鉴定和系统发生关系分析。在获得的5株单一虫株中,对其... 详细信息

为分离和鉴定早熟艾美尔球虫(Eimeria praecox),观察其主要生物学特性,本研究采用单卵囊感染技术分离单一虫株,通过卵囊形态学、PCR技术和18SrRNA基因检测,对其进行性状观察、虫种鉴定和系统发生关系分析。在获得的5株单一虫株中,对其中一株的卵囊形态、寄生部位、最短孢子化时间和最短潜在期进行观察。结果表明:该株球虫具有E. praecox的主要生物学特征;分离自肠道的卵囊明显小于分离自粪便的卵囊;最短潜在期为81h;经PCR鉴定为E. praecox,命名为E. praecox上海株。测序结果显示,其18SrRNA基因序列长1747bp,与GenBank登录的相关基因序列同源性为99.4%;该虫株对雏鸡呈轻度致病性。该虫株的分离和鉴定为丰富我国鸡球虫虫种资源,开展球虫病防治研究提供了依据。

关键词：早熟艾美尔球虫分离鉴定生物学性状 18S rRNA基因

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噬菌体展示日本血吸虫SSj14单抗的模拟抗原表位及其免疫保护性研究

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生物工程学报 2006年第1期22卷 119-124页

作者：王欣之傅志强黄劭鹏朱国强蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心上海200232 扬州大学兽医学院扬州225009

为获得日本血吸虫保护性单抗SSj14的模拟抗原表位,研究其对日本血吸虫的免疫保护作用。用纯化的SSj14单抗筛选噬菌体随机12肽库,对33个克隆进行ELISA验证,获得30个阳性克隆,DNA序列分析表明这30个克隆分属11个多肽序列,分析比较发现这... 详细信息

为获得日本血吸虫保护性单抗SSj14的模拟抗原表位,研究其对日本血吸虫的免疫保护作用。用纯化的SSj14单抗筛选噬菌体随机12肽库,对33个克隆进行ELISA验证,获得30个阳性克隆,DNA序列分析表明这30个克隆分属11个多肽序列,分析比较发现这些多肽具有“H_NQ_X_S_PF_X_X_L_A_T”的相似基序。进而选取3个阳性单克隆及混合阳性噬菌体克隆进行Western_blotting实验,证明都有良好的抗原性。用它们免疫BALBc鼠,并攻击血吸虫尾蚴,观察免疫鼠抗血吸虫感染的保护效果和IL_12的变化,结果表明:筛选获得的噬菌体阳性克隆具有良好的免疫原性,能诱导免疫鼠产生高滴度的抗血吸虫的特异性抗体;和对照组鼠相比,免疫小鼠,分别获得13.84%～52.83%的减虫率,34.17%～65.47%的肝脏减卵率以及28.89%～73.78%的粪便减卵率;三次免疫之后,和对照组相比,免疫小鼠体内IL_12水平均有升高。为发展日本血吸虫疫苗提供了新思路、新途径。

关键词：日本血吸虫噬菌体展示 SSj14单抗模拟抗原白细胞介素12

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日本血吸虫Sj28GST重组抗原的摇瓶发酵条件研究

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中国血吸虫病防治杂志 2009年第1期21卷 23-26页

作者：沈阳林矫矫姚利晓刘金明中国农业科学院上海兽医研究所、上海动物生物技术研究中心、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

目的探索应用重组***1摇瓶生产日本血吸虫Sj28GST重组抗原的最适工艺条件。方法用2YT培养基进行发酵,观察培养温度、种子液接种量、诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、IPTG诱导时间等培养条件。结果培养温度为37℃,种子液接种量... 详细信息

目的探索应用重组***1摇瓶生产日本血吸虫Sj28GST重组抗原的最适工艺条件。方法用2YT培养基进行发酵,观察培养温度、种子液接种量、诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、IPTG诱导时间等培养条件。结果培养温度为37℃,种子液接种量为10%,转速为200 r/m in,用0.8 mmol/L IPTG在开始发酵4 h后进行诱导,为最佳发酵条件。在此条件下,振荡培养17 h后,细菌密度达到吸光度(A600)值2.5,重组日本血吸虫Sj28GST产量达到21.6mg/L发酵液。结论成功探索了日本血吸虫Sj28GST重组抗原的摇瓶发酵条件。

关键词：日本血吸虫 Sj28GST 摇瓶发酵重组E.coliTB1

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日本血吸虫SjPP基因重组杆状病毒的构建和在昆虫细胞中的表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第2期26卷 124-127页

作者：姚利晓陶丽红杨冠珍吴祥甫蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心上海200232 中国科学院上海生命科学研究院上海生化细胞所上海200231 西南大学柑桔研究所重庆400712

目的在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白。方法提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化入大肠埃希菌DH10... 详细信息

目的在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白。方法提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化入大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组杆粒Bacmid-SjPP,用阳离子脂质体法转染粉纹夜蛾(TN5B1-4)细胞。利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。结果构建了含日本血吸虫SjPP基因的重组杆粒Bacmid-SjPP,转染TN5B1-4细胞后,获得有感染力的重组杆状病毒,并在TN5B1-4细胞中成功表达SjPP蛋白。该重组蛋白可被抗SjPP蛋白的兔血清识别。结论成功构建SjPP基因重组杆状病毒,并在TN5B1-4细胞中表达,该蛋白具有良好的抗原性。

关键词：日本血吸虫 SjPP Bac-to-Bac杆状病毒表达系统

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转基因羊对体表吸血蜱的生物学特性影响

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中国动物传染病学报 2015年第1期23卷 60-63页

作者：周勇志曹杰赵雅琳张厚双周金林中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 青岛森淼生物技术研究所青岛266061

本文对转基因动物养殖基地的3种不同的转基因山羊(转人β-干扰素、人抗凝血酶Ⅲ和乙肝表面抗原基因)与野生型山羊体表吸血蜱的生物学特性进行比较研究,分析了蜱的种类、感染率、感染强度、饱血雌蜱的产卵量和幼蜱孵化率,以及第二代蜱实... 详细信息

本文对转基因动物养殖基地的3种不同的转基因山羊(转人β-干扰素、人抗凝血酶Ⅲ和乙肝表面抗原基因)与野生型山羊体表吸血蜱的生物学特性进行比较研究,分析了蜱的种类、感染率、感染强度、饱血雌蜱的产卵量和幼蜱孵化率,以及第二代蜱实验条件下生长发育数据,从而探索转基因羊对环境生物的安全评估。结果发现,与野生型羊群比较,转基因羊群对体表吸血蜱的侵袭能力和吸血后各项生长发育的生物学特征无显著影响。

关键词：转基因羊蜱生物学特性

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微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2008年第8期38卷 670-675页

作者：于慧珠陈兆国岳城米荣升夏延富新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心上海200232 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-... 详细信息

提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫动物后检测血清抗体。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列的同源性为98.66%。目的基因在大肠杆菌中以可溶形式高效表达。表达的重组蛋白占菌体可溶性总蛋白的57.5%,纯化的重组蛋白纯度达95.2%。重组蛋白可被兔抗微小隐孢子虫血清特异性识别,用重组蛋白免疫3次后,兔血清特异性抗体达到较高水平。表明,该重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。

关键词：微小隐孢子虫 CP15/60基因克隆原核表达抗原性

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隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备

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中国预防兽医学报 2010年第8期32卷 622-626页

作者：于慧珠岳城陈兆国米荣升夏延富中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心上海200232 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检... 详细信息

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。

关键词：隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白 CP41 克隆原核表达

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