检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2006年第8期39卷 1659-1666页

作者：姚利晓林矫矫傅志强朱传刚李浩陆珂刘金明石耀军沈阳蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心上海200232

目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研... 详细信息

目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。结果(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即mfs-1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY902477)长1311bp,编码302个氨基酸,理论分子量为34.7kD,等电点为5.51;其氨基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threoninespecificproteinphosphatase,简称PP)的保守序列LRGNHE,并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC,与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPⅤ等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性,分别达72%、70%和70%。(3)成功构建核酸疫苗pCMV-Script/SjPP,免疫BALB/c小鼠诱导产生肝组织减卵率为23.91%,粪便减卵率为31.91%。结论(1)获得日本血吸虫新的抗原基因SjPP。(2)含SjPP基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。

关键词：日本血吸虫东方田鼠丝/苏氨酸蛋白磷酸酶核酸疫苗免疫保护

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日本血吸虫新基因Sjnanos的克隆、表达及免疫保护效果评估

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中国人兽共患病学报 2010年第7期26卷 631-637页

作者：王艳郭凡吉彭金彪李晔洪炀陈实傅志强石耀军林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241

目的扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果。方法从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析。将该基因亚克隆入原核表... 详细信息

目的扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果。方法从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析。将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(***)BL21,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清特异性抗体效价,蛋白印迹分析检测其抗原性,以看家基因NADH为内参,应用荧光定量PCR技术分析该基因在血吸虫各个阶段的表达状况。结果同源性分析表明,该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的开放阅读框(ORF)为525bp,编码174个氨基酸,理论相对分子量为19.9,PI为8.2。荧光定量PCR技术分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d、42d虫体均有表达,但在18d和13d虫体的表达量明显高于其他天数的虫体,在雄虫的表达量高于雌虫。成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-Sjnanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western-blot分析表明重组蛋白具有较好的免疫原性,动物免疫保护试验获得了31.4%的减虫率和53.8%的肝脏减卵率。结论获得日本血吸虫新的抗原基因Sjnanos,该基因的重组蛋白在小鼠中诱导了部分免疫保护作用。

关键词：日本血吸虫 nanos基因抗原性免疫保护

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柔嫩艾美耳球虫早熟株选育及相关生物学特性

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复旦学报（自然科学版） 2008年第3期47卷 380-386页

作者：韩静芳黄兵董辉俞纯方韩红玉赵其平姜连连王鑫中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 西南大学动物科技学院重庆400715

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)早熟株与母株之间基本生物学特性的差异,运用Jeffers创立的艾美耳属球虫早熟株选育方法对***进行了连续26代的早熟选育,并通过对早熟株与母株的孢子化卵囊大小、繁殖能力以及致病性等指标进行测... 详细信息

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)早熟株与母株之间基本生物学特性的差异,运用Jeffers创立的艾美耳属球虫早熟株选育方法对***进行了连续26代的早熟选育,并通过对早熟株与母株的孢子化卵囊大小、繁殖能力以及致病性等指标进行测定,分析***早熟株与母株之间基本生物学特性的差异.经过早熟选育后,其潜在期由母株的141 h缩短至118 h;早熟株的孢子化卵囊大小比母株的明显减小(P<0.05);繁殖能力与母株的相当(P>0.05);在致病性方面,4个剂量组的早熟株平均增重与对照组相比差异不显著(P>0.05),而母株组与对照组相比平均增重显著下降(P<0.05或P<0.01);4个剂量的早熟株组死亡率均为0,而母株组分别为0,25%,25%及31.3%;感染剂量越大,早熟株与母株间病变记分差异越显著.经选育的***早熟株具有潜在期缩短,致病性较母株弱以及繁殖力与母株相当等特点.

关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株生物学特性

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东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

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中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 592-596,617页

作者：孙焕刘金明孙帅宋震宇石耀军陆珂李浩金亚美林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因,探索其分子机理,我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织/器官裂解物共培养,比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果,之后,以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针,以亲和淘... 详细信息

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因,探索其分子机理,我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织/器官裂解物共培养,比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果,之后,以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44d)噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选后,随机挑取92个噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析,获得了19个有效EST序列,其中15条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,4个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。对19个有效EST编码蛋白的功能预测结果显示,其中6个为卵壳蛋白(Eggshell protein)相关基因,10个EST及其编码蛋白的功能与血吸虫基因表达调控及蛋白质加工修饰相关。研究结果提示,东方田鼠直接或间接地影响血吸虫基因表达,进而影响血吸虫的发育,可能是东方田鼠具有抗血吸虫特性的一个重要分子机理。

关键词：日本血吸虫东方田鼠筛选噬菌体展示cDNA文库

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弓形虫上海株的棒状体蛋白ROP2的克隆表达及纯化

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生物技术通报 2010年第1期26卷 180-183页

作者：蒋蔚王权陈永军聂福旭中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

根据已发表基因序列(GenBank登录号为Z36906)设计引物,以弓形虫(Toxoplasma gondii)上海本地株的基因组DNA为模板,扩增编码ROP2(rhpotry protein2)蛋白的基因片段,定向克隆至表达质粒pET32a(+),重组质粒经限制性酶切鉴定后测序,结果表... 详细信息

根据已发表基因序列(GenBank登录号为Z36906)设计引物,以弓形虫(Toxoplasma gondii)上海本地株的基因组DNA为模板,扩增编码ROP2(rhpotry protein2)蛋白的基因片段,定向克隆至表达质粒pET32a(+),重组质粒经限制性酶切鉴定后测序,结果表明插入片段长度为1044bp,与GenBank上登录的序列相比,同源性为96%-100%,其中与弓形虫RH株的rop2基因同源性为100%。重组原核表达质粒pET32a-rop2转化至大肠杆菌BL21(DE3),经诱导可表达分子量约60.9kD的融合蛋白,能被感染弓形虫RH株的绵羊阳性血清识别。

关键词：弓形虫本地株 ROP2蛋白克隆表达

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动物血吸虫病防制的主要进展、问题和今后工作重点

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中国农业大学学报 1998年第S2期3卷 82-86页

作者：林矫矫施福恢钱承贵蔡幼民沈纬中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

1 我国动物血吸虫病流行现状日本血吸虫病曾在我国南方12个省、市、自治区的400个县(市、区)流行,据统计全国曾有钉螺面积140亿m^2,病人1000万,病畜百万头以上。解放后,在党和各级政府的领导下和血防工作者的辛勤劳动下,我国血防工作取... 详细信息

1 我国动物血吸虫病流行现状日本血吸虫病曾在我国南方12个省、市、自治区的400个县(市、区)流行,据统计全国曾有钉螺面积140亿m^2,病人1000万,病畜百万头以上。解放后,在党和各级政府的领导下和血防工作者的辛勤劳动下,我国血防工作取得了举世瞩目的成就,至今已有227个县(市、区)达到消灭血吸虫病标准,55个县达到基本消灭标准,占总疫区县数的70%。

关键词：家畜血吸虫病动物血吸虫病血防工作主要进展基本消灭日本血吸虫病工作重点日本血吸虫中国大陆株抗血吸虫病防制

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五种抗球虫药对肉鸽球虫病的防治研究

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中国家禽 2012年第12期34卷 26-29页

作者：赵其平朱顺海韩红玉姜连连李婷孔春林黄兵董辉中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为筛选有效的抗鸽球虫药物,选用地克珠利(1 mg/kg)、磺胺喹恶啉钠(300 mg/kg)、磺胺氯吡嗪钠(300 mg/kg)、托曲珠利(25 mg/kg)、白头翁散(500 mg/kg)等5种抗鸡球虫药物进行了本试验,试验重复3次,每次分为用药感染组和不用药感染组,人工... 详细信息

为筛选有效的抗鸽球虫药物,选用地克珠利(1 mg/kg)、磺胺喹恶啉钠(300 mg/kg)、磺胺氯吡嗪钠(300 mg/kg)、托曲珠利(25 mg/kg)、白头翁散(500 mg/kg)等5种抗鸡球虫药物进行了本试验,试验重复3次,每次分为用药感染组和不用药感染组,人工感染主要含有拉氏艾美耳球虫和鸽艾美耳球虫的混合孢子化卵囊,剂量为15×104个,以相对卵囊减少率作为抗球虫效果的指标。结果显示磺胺喹恶啉钠、磺胺氯吡嗪钠效果最好,相对卵囊减少率分别为99.9%和99.5%;其次是托曲珠利、白头翁散,相对卵囊减少率分别为96.7%和92.0%;地克珠利效果最差,相对卵囊减少率仅为75.6%。

关键词：鸽球虫艾美耳球虫球虫病抗球虫药物

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日本血吸虫SjPP基因原核表达蛋白的酶活性

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中国兽医科学 2008年第7期38卷 555-558页

作者：姚利晓王欣之傅志强陶丽红林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心

分别以磷酸苏氨酸多肽（K-R-pT-I—R—R）和4-硝基苯基磷基二钠盐（pNPP）为底物，研究原核表达的日本血吸虫丝／苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性，检测二价金属阳离子（Mn^2＋、Ni^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋）、温度、pH值对rSjPP酶... 详细信息

分别以磷酸苏氨酸多肽（K-R-pT-I—R—R）和4-硝基苯基磷基二钠盐（pNPP）为底物，研究原核表达的日本血吸虫丝／苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性，检测二价金属阳离子（Mn^2＋、Ni^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋）、温度、pH值对rSjPP酶活性的影响。结果显示，rSjPP重组蛋白可以有效地水解磷酸苏氨酸多肽，具有丝／苏氨酸蛋白磷酸酶活性。rSjPP酶活性的最适温度为60℃，最适pH值为8．0。1～4mmol／L Ni^2＋对rSjPP酶活力有促进作用，但Mn^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋等阳离子对rSjPP的酶活力影响不大。

关键词：日本血吸虫丝/苏氨酸蛋白磷酸酶酶活性影响因子

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柔嫩艾美耳球虫(***)马杜拉霉素抗药株和敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 113-117页

作者：姜连连黄兵韩红玉赵其平董辉陈兆国中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有4个蛋白质斑点,利用MALDI-TOF-TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得3个明确... 详细信息

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有4个蛋白质斑点,利用MALDI-TOF-TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得3个明确的肽质量指纹图谱,通过在NCBInr数据库中检索分析,确定了其中1种蛋白质为球虫子孢子表面抗原TA4。另外2种蛋白质与疟原虫的Pfj1和线粒体转运蛋白受体Tom40具有很高的同源性,上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株的分之标志物提供了研究方向。

关键词：柔嫩艾美耳球虫抗药性马杜拉霉素蛋白质组

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柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导

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中国兽医学报 2004年第2期24卷 138-140页

作者：韩红玉赵其平陈兆国黄兵中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。... 详细信息

采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。

关键词：鸡球虫病柔嫩艾美耳球虫地克珠利马杜拉霉素抗药性

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