为克隆、表达日本血吸虫假想蛋白SJCHGC068068编码基因(暂命名为Sj06868)并观察重组抗原的免疫预防效果。应用PCR技术从日本血吸虫7 d童虫、14 d童虫mRNA反转录制备的cDNA中克隆到Sj06868基因的46-438 bp DNA片段,BLASTn分析未发现其他...
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为克隆、表达日本血吸虫假想蛋白SJCHGC068068编码基因(暂命名为Sj06868)并观察重组抗原的免疫预防效果。应用PCR技术从日本血吸虫7 d童虫、14 d童虫mRNA反转录制备的cDNA中克隆到Sj06868基因的46-438 bp DNA片段,BLASTn分析未发现其他物种中的同源性序列,也未发现其保守序列和相关功能结构域。以pET32a为表达载体、Sj06868基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得高效表达,表达产物rSj068068分子量为36 kDa,能被感染血吸虫14 d兔血清识别。将纯化的重组抗原与佐剂ESSAI ISA 206 CELL混合后免疫BALB/c小鼠,与佐剂对照组和PBS对照组相比,分别获得了31.63%、29.19%减虫率以及55.63%、56.27%肝脏虫卵减少率。用ELISA检测各组血清中抗rSj068068特异性抗体结果显示,免疫组在攻击感染前、佐剂对照组和PBS对照组在感染后均产生了较高水平的特异性抗体。本研究结果说明,Sj068068是日本血吸虫特有的童虫期高表达基因,rSj068068在抗血吸虫疫苗和血吸虫感染的诊断方面均有潜在应用价值。
链球菌蛋白G(streptococcal protein G,SPG)具有与多种动物IgG结合的特性。本研究对链球菌蛋白G进行生物学分析,设计重组蛋白G的基因序列,构建重组蛋白G的原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,得到带有GST标签的融合蛋白,通过GST亲和...
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链球菌蛋白G(streptococcal protein G,SPG)具有与多种动物IgG结合的特性。本研究对链球菌蛋白G进行生物学分析,设计重组蛋白G的基因序列,构建重组蛋白G的原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,得到带有GST标签的融合蛋白,通过GST亲和层析纯化蛋白。Western blot结果显示,重组蛋白具备与IgG结合的能力。ELISA测定重组蛋白与牛、山羊、兔、鼠4个物种IgG的亲和力,显示重组蛋白G的亲和力普遍高于商品化链球菌蛋白G。本研究成功重构并表达、纯化了链球菌重组蛋白G,得到其与4个物种抗体IgG的亲和力常数,有助于SPG在其他相关研究中的应用。
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