检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物与感染 2008年第3期3卷 147-153页

作者：郑海红孙志朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241 华南农业大学兽医学院广州510642

目的本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架2(ORF2)表达载体的可行性,以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行解剖。方法以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进... 详细信息

目的本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架2(ORF2)表达载体的可行性,以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行解剖。方法以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,分别在pAPRRS的ORF1和ORF2间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2ORF2,且对拯救病毒vPCV进行了病毒学及分子生物学鉴定。结果vPCV的sg mRNA2.1利用了PRRSV mRNA2的转录调控序列(TRS),形成由PRRSVGP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgm RNA2.1。外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS而产生3条新亚基因组,其中sgm RNA2.2和sgm RNA2.3采用PCV2上的序列来取代PRRSVRNA2本身的TRS;另一条sgm RNA2.4则为非经典型亚基因组,其TRS在PRRSV相应的AUG下游。结论2株PRRSV-PCV2重组病毒可以稳定传代,为进一步研发PRRSV遗传标疫苗奠定了基础;插入片段上一些类似TRS序列的引入及插入片段(718bp)过长导致PRRSV ORF2TRS本身和其两翼序列的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的最主要原因;PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子,这为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸道综合征病毒猪圆环病毒Ⅱ型载体表达转录调控序列

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆的构建

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微生物与感染 2007年第4期2卷 219-227页

作者：吕健孙志张建武刘维全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232 中国农业大学生物学院北京100094

目的确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能、高致病性蓝耳病发病机制,以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础。方法根据PRRSV基因组序列设计特异性... 详细信息

目的确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能、高致病性蓝耳病发病机制,以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础。方法根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分5段扩增了高致病性PRRSV JX143株的全长cDNA,将各cDNA片段克隆到pBlueScriptⅡSK(+)载体中,进而利用重叠区中的单酶切位点将其连接成JX143株的全长cDNA克隆pJX143和含有遗传标记MluⅠ限制性内切酶的基因组全长cDNA克隆pJX143-M。结果全长cDNA克隆经体外合成RNA后转染MA-104细胞,均获得稳定的拯救病毒。通过比较亲本病毒与拯救病毒的病毒滴度、多步生长曲线和利用拯救病毒vJX143进行动物回归试验,结果发现病毒学及生物学特性没有显著差异。结论PRRSV的JX143株病毒确实是引起"猪高热综合征"的主要病原;建立了首个高致病性PRRSV的感染性cDNA克隆,证明拯救病毒与亲本病毒生物学特性相同。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆高致病性动物回归试验

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PRRSV-PCV重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究

PRRSV-PCV重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：郑海红孙志朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室华南农业大学兽医学院

本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性 cDNA 克隆作为外源基因表达载体的可行性,以及利用重组病毒对 PRRSV 复制转录过程进行解剖。以北美株 PRRSV 感染性克隆 pAPRRS 为平台进行反向遗传操作,分别在 pARRSV

关键词：

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：郑海红孙志朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室华南农业大学兽医学院

殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚.本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位... 详细信息

殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚.本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位置,结果发现PRRSV mRNA分子的转录可使用经典(canonical)及非经典(noncanonical)TRS-B进行.通过对PRRSV感染性克隆pAPRRS进行定点基因突变及其所致拯救病毒的鉴定,以此确定TRS-L和TRS-B突变对亚基因组转录及病毒感染性的影响.结果表明:(1)同时突变TRS-L最后两个CC的全长突变体pLeaderD对MARC-145细胞无感染性,且未产生sgmRNA7转录本;而只突变最后一个C的pLeaderR能拯救出突变病毒,但突变位点在突变病毒系列传代中发生回复突变,由此证明TRS-L 3'的一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有一定修复功能.(2)突变TRS123 3'最后两个碱基的pM7Da或突变TRS9 3'最后两个碱基的pM7Db均能拯救出病毒,而共同含有TRS9和TRS123 3'最后两个碱基突变的pM7DabR不能拯救出病毒,对拯救的突变病毒进行鉴定发现,TRS123突变的拯救病毒在一系列传代中突变碱基回复,而TRS9突变的拯救病毒传代过程中稳定遗传;突变体pM7S3(含有TRS123的三个碱基突变)和pM7Db虽能拯救出活病毒,但突变都使相应的sgmRNA7转录量至零,且vM7S3滴度偏低.由此证明了TRS9和TRS123都可单独承担PRRSV sgmRNA7的转录调控及其3'一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有修复功能;PRRSV的N蛋白主要来源于sgmRNA7.1的翻译.(3)所有突变病毒的亚基因组中leader-body结合位点碱基均来源于TRS-B,为负链RNA不连续转录模型理论提供直接证据。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 TRS PRRSV 感染性克隆弱毒株碱基突变突变体突变位点亚基因组功能解析

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PRRSV-PCV重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究

PRRSV-PCV重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：郑海红孙志朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室华南农业大学兽医学院

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为外源基因表达载体的可行性以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行分析。以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,在pAPRRs的ORF1和ORF2间插入猪圆环病毒(PCV2)... 详细信息

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为外源基因表达载体的可行性以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行分析。以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,在pAPRRs的ORF1和ORF2间插入猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架(ORF),构建了全长嵌合cDNA免隆pCPV,随后进行了病毒拯救及对拯救病毒vCPV复制转录分析。结果发现:vCPV的sgmRNA2.1盗用了PRRSV sgmRNA2的转录调控序列(TRS),形成由PRRSV GP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgmRNA2.1。令人吃惊的是,外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS而产生三条新亚基因组,其中sgmRNA2.2、sgmRNA2.3和sgmRNA2.4采用PCV中序列作为启动子;另一条sgmRNA2.5则为非经典型亚基因组,其TRS与PRRSV ORF2的起始密码子(AUG)间隔19,37、97个碱基,在AUG下游.本研究结果表明:1两株重组PRRSV-PCV2病毒可以稳定传代,为进一步研发PRRSV遗传标识疫苗奠定了基础;2)插入片断上一些TRS样序列引入及插入过长片断(718bp)导致PRRSV本身TRS的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性最主要原因;3)PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子,为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础。

关键词： PRRSV 转录调控序列(TRS) 猪圆环病毒表达载体

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PRRSV-PCV重组病毒遗传不稳定性研究

PRRSV-PCV重组病毒遗传不稳定性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：郑海红孙志王金勇朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室华南农业大学兽医学院

以北美株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆(pCBC)为平台进行反向遗传操作,分别在pCBC的ORF2和ORF3间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2的ORF2,依次获得三个嵌合克隆(pCPV,p6PC,p7PC)。转染PRRSV易感细胞MARC-145后得到三个重... 详细信息

以北美株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆(pCBC)为平台进行反向遗传操作,分别在pCBC的ORF2和ORF3间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2的ORF2,依次获得三个嵌合克隆(pCPV,p6PC,p7PC)。转染PRRSV易感细胞MARC-145后得到三个重组病毒,重组病毒在体外培养的共性:遗传不稳定性。继而以重组病毒vCPV为例,利用RT-PCR技术在转录水平对重组病毒的遗传不稳定性进行了分析。结果发现:vCPV的SgmRNA2.1利用了PRRSV基因组2的TRS,但随着病毒的传代SgmRNA2.1中的PCV序列处在不断删减中;SgmRNA2.2和SgmRNA2.3采用PCV上的序列作为TRS,来取代PRRSV ORF2本身的TRS;SgmRNA2.4为非典型亚基因组,其TRS与PRRSV ORF2的起始密码子间隔37个碱基,在起始密码子下游。由此推测:插入片断上一些类似TRS序列的引入及插入过长片断(718bp)导致PRRSV ORF2的TRS本身和两翼序列的R NA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的最主要原因。

关键词：重组病毒 TRS RNA PRRSV-PCV 感染性克隆基因组 ORF PCV 稳定性研究

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：郑海红孙志朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232 华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232 华南农业大学兽医学院广东广州 510642

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位置,结果发现PRRSV mRNA分子的转录可使用经典(canonical)及非经典(noncanonical)TRS-B进行。通过对PRRSV感染性克隆pAPRRS进行定点基因突变及其所致拯救病毒的鉴定,以此确定TRS-L和TRS-B突变对亚基因组转录及病毒感染性的影响。结果表明： (1)同时突变TRS-L最后两个CC的全长突变体pLeaderD对MARC-145细胞无感染性,且未产生sgmRNA7转录本;而只突变最后一个C的pLcaderR能拯救出突变病毒,但突变位点在突变病毒系列传代中发生回复突变,由此证明TRS-L 3的一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有一定修复功能。 (2)突变TRS123 3'最后两个碱基的pM7Da或突变TRS9 3'最后两个碱基的pM7Db均能拯救出病毒,而共同含有TRS9和TRS123 3'最后两个碱基突变的pM7DabR不能拯救出病毒,对拯救的突变病毒进行鉴定发现,TRS123突变的拯救病毒在一系列传代中突变碱基回复,而TRS9突变的拯救病毒传代过程中稳定遗传;突变体pM7S3(含有TRS123的三个碱基突变)和pM7Db虽能拯救出活病毒,但突变都使相应的sgmRNA7转录量至零,且vM7S3滴度偏低。由此证明了TRS9和TRS123都可单独承担PRRSV sgmRNA7的转录调控及其3'一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有修复功能;PRRSV的N蛋白主要来源于sgmRNA7.1的翻译。 (3)所有突变病毒的亚基因组中leader-body结合位点碱基均来TRS-B,为负链RNA不连续转录模型理论提供直接证据。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征 RT-PCR技术转录调控因子序列分析病毒鉴定

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：郑海红孙志朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室华南农业大学兽医学院

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位置,结果发现PRRSV mRNA分子的转录可使用经典(canonical)及非经典(noncanonical)TRS-B进行。通过对PRRSV感染性克隆pAPRRS进行定点基因突变及其所致拯救病毒的鉴定,以此确定TRS-L和TRS-B突变对亚基因组转录及病毒感染性的影响。结果表明:(1)同时突变TRS-L最后两个CC的全长突变体pLeaderD对MARC-145细胞无感染性,且未产生sgmRNA7转录本;而只突变最后一个C的pLeaderR能拯救出突变病毒,但突变位点在突变病毒系列传代中发生回复突变,由此证明TRS-L3’的一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有一定修复功能(。2)突变TRS1233’最后两个碱基的pM7Da或突变TRS93’最后两个碱基的pM7Db均能拯救出病毒,而共同含有TRS9和TRS1233’最后两个碱基突变的pM7DabR不能拯救出病毒,对拯救的突变病毒进行鉴定发现,TRS123突变的拯救病毒在一系列传代中突变碱基回复,而TRS9突变的拯救病毒传代过程中稳定遗传;突变体pM7S3(含有TRS123的三个碱基突变)和pM7Db虽能拯救出活病毒,但突变都使相应的sgmRNA7转录量至零,且vM7S3滴度偏低。由此证明了TRS9和TRS123都可单独承担PRRSVsgmRNA7的转录调控及其3’一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有修复功能;PRRSV的N蛋白主要来源于sgmRNA7.1的翻译。(3)所有突变病毒的亚基因组中leader–body结合位点碱基均来源于TRS-B,为负链RNA不连续转录模型理论提供直接证据。

关键词： TRS 亚基因组猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 PRRSV 感染性克隆功能解析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆5’非翻译区序列缺失突变分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆5’非翻译区序列缺失突变分析

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：高飞姚火春王金勇余丹丹袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海 200232 南京农业大学动物医学院江苏南京 210095 中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海 200232

对单股正链RNA病毒的研究发现：基因组5’非翻译区(5’UTR)在病毒的复制，转录，翻译过程中发挥了至关重要的作用。对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)5'UTR的研究意义重大。因此本研究在PRRSV感染性克隆pCBC2的基础上，通过突变... 详细信息

对单股正链RNA病毒的研究发现：基因组5’非翻译区(5’UTR)在病毒的复制，转录，翻译过程中发挥了至关重要的作用。对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)5'UTR的研究意义重大。因此本研究在PRRSV感染性克隆pCBC2的基础上，通过突变PCR获得了病毒基因组5’UTR系列缺失的全长突变体克隆：pCBCM1，pCBCM3，pCBCM5，7，9，45，69，100，随后将上述突变体体外转录成RNA之后转染MARC-145细胞，进行病毒感染性、复制和转录分析，以鉴定特定的缺失区的调控功能。结果显示：病毒5’UTR起始的第1个碱基是保持病毒感染性非必需的核苷酸;前45个碱基对病毒基因组的复制是非必需的。Northern Blot结果显示pCBCM1亚基因组mRNA可以进行高效率的转录，而其余突变体的亚基因组转录受到严重抑制。由此证明，PRRSV 5’UTR的完整性对病毒意义重大，碱基的少量以及大部分缺失会对病毒产生极大的影响。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征感染性克隆体外转录反向遗传系统病毒感染

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)转录调控序列(TRS)鉴定及其功能解析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)转录调控序列(TRS)鉴定及其功...

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：郑海红孙志王金勇朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海 200232 华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海 200232 华南农业大学兽医学院广东广州 510642

利用RT-PCR技术确定了PRRSV北美株各TRS-B位置及各sgmRNA Leader-Body junction序列。继而以PRRSV北美株感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作，以点突变PCR对所确定的形成sgmRNA7的TRS-B进行突变，构建一系列全长突变体，解析TRS-B... 详细信息

利用RT-PCR技术确定了PRRSV北美株各TRS-B位置及各sgmRNA Leader-Body junction序列。继而以PRRSV北美株感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作，以点突变PCR对所确定的形成sgmRNA7的TRS-B进行突变，构建一系列全长突变体，解析TRS-B突变对病毒感染性及亚基因组转录的影响。结果发现：TRS-B 3’碱基的突变使sgmRNA7转录减弱，且一起突变RNA7.1的TRS-B 3’最末端两个碱基的全长突变体失去了对细胞的感染性。证明了TRS-B 3’最末端两个碱基对sgmRNA7转录至关重要，且RNK7.1的TRS-B对病毒的感染性是必需的。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染基因组转录反向遗传操作

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