检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 592-596,617页

作者：孙焕刘金明孙帅宋震宇石耀军陆珂李浩金亚美林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因,探索其分子机理,我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织/器官裂解物共培养,比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果,之后,以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针,以亲和淘... 详细信息

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因,探索其分子机理,我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织/器官裂解物共培养,比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果,之后,以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44d)噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选后,随机挑取92个噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析,获得了19个有效EST序列,其中15条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,4个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。对19个有效EST编码蛋白的功能预测结果显示,其中6个为卵壳蛋白(Eggshell protein)相关基因,10个EST及其编码蛋白的功能与血吸虫基因表达调控及蛋白质加工修饰相关。研究结果提示,东方田鼠直接或间接地影响血吸虫基因表达,进而影响血吸虫的发育,可能是东方田鼠具有抗血吸虫特性的一个重要分子机理。

关键词：日本血吸虫东方田鼠筛选噬菌体展示cDNA文库

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日本血吸虫PHB1的克隆、表达及其免疫保护效果评估

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中国动物传染病学报 2022年第3期30卷 138-145页

作者：张旻杨珊珊张燕周思含黄明月洪炀林矫矫傅志强河南科技大学动物科技学院洛阳471023 中国农业科学院上海兽医研究所国家动物血吸虫病参考实验室上海200241

为了探讨日本血吸虫抗增殖蛋白1(SjPHB1)的免疫保护潜力,应用PCR技术扩增SjPHB1基因,克隆至pMD19-T克隆载体,对其进行测序及生物信息学分析;然后构建pET32a(+)-SjPHB1重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,对重组菌进行鉴定... 详细信息

为了探讨日本血吸虫抗增殖蛋白1(SjPHB1)的免疫保护潜力,应用PCR技术扩增SjPHB1基因,克隆至pMD19-T克隆载体,对其进行测序及生物信息学分析;然后构建pET32a(+)-SjPHB1重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,对重组菌进行鉴定、诱导表达,并纯化重组蛋白;再利用Western blot检测重组蛋白的反应原性;最后以小鼠为动物模型,评估重组蛋白抗日本血吸虫病的免疫保护效果。结果显示:SjPHB1基因ORF序列为825 bp,编码274个氨基酸,具有2个优势辅助T细胞抗原表位和6个优势B细胞抗原表位;rSjPHB1以包涵体的形式表达,分子量约为47 kDa,能被anti-His的小鼠血清、人工感染日本血吸虫的小鼠阳性血清特异性识别,表明获得正确表达;该重组蛋白能被免疫小鼠血清识别,具有良好的反应原性;rSjPHB1刺激小鼠产生了较高水平的特异性IgG抗体,但未诱导产生显著的减虫率和肝脏减卵率。本研究结果为进一步探讨SjPHB1基因的生物学特性提供了基础。

关键词：日本血吸虫抗增殖蛋白1 克隆表达免疫保护效果

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日本血吸虫新基因Sjnanos的克隆、表达及免疫保护效果评估

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中国人兽共患病学报 2010年第7期26卷 631-637页

作者：王艳郭凡吉彭金彪李晔洪炀陈实傅志强石耀军林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241

目的扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果。方法从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析。将该基因亚克隆入原核表... 详细信息

目的扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果。方法从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析。将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(***)BL21,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清特异性抗体效价,蛋白印迹分析检测其抗原性,以看家基因NADH为内参,应用荧光定量PCR技术分析该基因在血吸虫各个阶段的表达状况。结果同源性分析表明,该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的开放阅读框(ORF)为525bp,编码174个氨基酸,理论相对分子量为19.9,PI为8.2。荧光定量PCR技术分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d、42d虫体均有表达,但在18d和13d虫体的表达量明显高于其他天数的虫体,在雄虫的表达量高于雌虫。成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-Sjnanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western-blot分析表明重组蛋白具有较好的免疫原性,动物免疫保护试验获得了31.4%的减虫率和53.8%的肝脏减卵率。结论获得日本血吸虫新的抗原基因Sjnanos,该基因的重组蛋白在小鼠中诱导了部分免疫保护作用。

关键词：日本血吸虫 nanos基因抗原性免疫保护

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日本血吸虫信号转导蛋白Sjwnt10a基因的克隆及其在童虫和成虫中mRNA表达量的变化

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中国兽医科学 2007年第2期37卷 93-97页

作者：陶丽红姚丽晓苑纯秀傅志强冯新港刘金明石耀军蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点实验室上海200232

利用RACE技术从19日龄的日本血吸虫童虫中扩增了1个Wnt家族基因,并对其进行了生物信息学分析。同源性分析表明,该基因为日本血吸虫新基因,完整开放阅读框(ORF)长1896 bp,编码631个氨基酸,理论分子质量为73.3 ku。该基因编码的氨基酸序... 详细信息

利用RACE技术从19日龄的日本血吸虫童虫中扩增了1个Wnt家族基因,并对其进行了生物信息学分析。同源性分析表明,该基因为日本血吸虫新基因,完整开放阅读框(ORF)长1896 bp,编码631个氨基酸,理论分子质量为73.3 ku。该基因编码的氨基酸序列具有Wnt家族蛋白的典型特征,与人、鼠Wnt10a的氨基酸序列同源性均为26%,推测为血吸虫的Wnt10a基因,命名为Sjwnt10a(Gen BanK登录号DQ643829)。利用实时荧光定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达情况,结果显示该基因在19日龄的日本血吸虫童虫中表达量最高,在14日龄童虫和44日龄雄虫中也有表达,但分别仅为19日龄童虫表达量的8.8%和5.0%,而在31日龄成虫和44日龄雌虫中没有检测到该基因。结果提示,童虫差异表达的Sjwnt10a基因可能对童虫的生长、发育至关重要。

关键词：日本血吸虫信号转导 Sjwnt10a基因差异表达

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日本血吸虫小RNA let-7对虫体生殖发育影响的研究

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中国预防兽医学报 2017年第5期39卷 384-387页

作者：冯金涛韩愉乔洪宾张欣李浩陆珂林矫矫刘金明金亚美中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

为检测日本血吸虫小RNA let-7(Sja-let-7)对虫体生殖发育的影响,本研究在日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠后的11 d^42 d,将Sja-let-7的同系物(Sja-let-7 mimics)注射入宿主体内对血吸虫Sja-let-7的表达进行干扰,结果显示Sja-let-7 mimics... 详细信息

为检测日本血吸虫小RNA let-7(Sja-let-7)对虫体生殖发育的影响,本研究在日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠后的11 d^42 d,将Sja-let-7的同系物(Sja-let-7 mimics)注射入宿主体内对血吸虫Sja-let-7的表达进行干扰,结果显示Sja-let-7 mimics干扰组小鼠肝脏虫卵孵化率显著升高;小鼠肝脏肉芽肿病变减轻十分明显,病灶周围炎性细胞浸润半径变小,空泡变性较对照组轻微,周围正常组织完整性也优于对照组。扫描电镜和透射电镜未观察到虫体的明显变化。利用荧光定量PCR检测Sja-let-7的候选靶基因干扰虫体的表达情况,结果表明Sja-let-7 mimics对大部分候选基因存在不同程度的抑制作用。本研究为后续深入研究小RNA Sja-let-7的功能奠定了基础。

关键词：日本血吸虫 Sja-let-7 虫卵孵化率 real time-PCR 候选靶基因

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东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

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中国预防兽医学报 2008年第1期30卷 5-9页

作者：贾人初孙毅刘金明傅志强苑纯秀石耀军陆珂孙焕李浩林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础。用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ... 详细信息

本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础。用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ和HindⅢ酶切,使其两端分别带EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端。用Mini Column纯化、收集300bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库。经测定,库容量为1.3×107PFU/mL,扩增后文库滴度为1.8×1011PFU/mL。对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91.7%,阳性克隆片段大小分布在200bp～1000bp,其中有95.5%的插入片段大于300bp。用日本血吸虫童虫可溶性抗原对文库进行了初筛,得到了21个ESTs,将这些阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中大部分克隆诱导的童虫死亡率比阴性噬菌体对照高出2%～13%。

关键词：东方田鼠肝脏 T7噬菌体展示 cDNA文库

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牛日本血吸虫重组二价表位抗原间接ELISA检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2012年第12期42卷 1273-1277页

作者：陆珂李浩石耀军周伟芳陈实朱传刚傅志强杨健美洪炀苑纯秀林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫病重点开放实验室上海200241

为了建立一种更为敏感、特异的牛血吸虫病诊断方法,表达和纯化了日本血吸虫二价表位抗原(pGEX-BSjGCP-BSj23),将重组蛋白以10mg/L浓度包被酶标板,以1∶40 000稀释酶标兔抗牛IgG,建立了检测牛血吸虫病的间接ELISA方法。以SEA抗原作为对照... 详细信息

为了建立一种更为敏感、特异的牛血吸虫病诊断方法,表达和纯化了日本血吸虫二价表位抗原(pGEX-BSjGCP-BSj23),将重组蛋白以10mg/L浓度包被酶标板,以1∶40 000稀释酶标兔抗牛IgG,建立了检测牛血吸虫病的间接ELISA方法。以SEA抗原作为对照,进行敏感性试验和特异性试验。结果显示,以重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23作为诊断抗原,建立的间接ELISA的特异性明显高于SEA,敏感性与SEA相当。检测现场水牛血清样品,结果阴性符合率为100%,阳性符合率为90.97%。结果表明,建立的ELISA检测方法对牛血吸虫病的诊断具有良好的特异性和敏感性。

关键词：日本血吸虫二价表位抗原间接酶联免疫吸附试验

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利用RNAi和表达谱芯片分析日本血吸虫Sj34.9基因的功能

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中国血吸虫病防治杂志 2012年第2期24卷 127-131,145页

作者：刘萍萍石艳丽杨云霞刘金明林矫矫金亚美中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的分析日本血吸虫新基因Sj34.9的功能,为进一步研究该基因提供依据。方法采用RNA干扰(RNAi)技术对Sj34.9基因在血吸虫体内的表达进行干扰,利用血吸虫寡聚核苷酸表达谱芯片分析Sj34.9基因表达沉默后血吸虫基因的表达情况。结果 Sj34.9... 详细信息

目的分析日本血吸虫新基因Sj34.9的功能,为进一步研究该基因提供依据。方法采用RNA干扰(RNAi)技术对Sj34.9基因在血吸虫体内的表达进行干扰,利用血吸虫寡聚核苷酸表达谱芯片分析Sj34.9基因表达沉默后血吸虫基因的表达情况。结果 Sj34.9基因RNAi组与对照组相比,显著差异表达的基因共378个,其中上调基因202个,下调基因176个;通路分析显示,表达差异基因主要与信号转导、信号分子间相互作用及各类物质代谢有关;基因本体论分类结果显示,多数基因与分子间结合、膜构成、细胞过程和机体生长发育及代谢相关。结论 Sj34.9基因可能对日本血吸虫的形成、生长、发育、调节、代谢等具有重要作用。

关键词：日本血吸虫 RNA干扰(RNAi) 表达谱芯片基因表达

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用日本血吸虫重组抗原诊断牛血吸虫病的研究

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中国兽医科学 2008年第6期38卷 489-493页

作者：周伟芳林矫矫朱传刚石耀军刘金明中国农业科学院上海兽医研究所国家防治血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

为寻找可替代虫卵抗原(SEA)用于家畜血吸虫病血清学诊断的重组抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较了日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水区多肽重组蛋白LHD-Sj23和日本血吸虫SEA检测牛血吸虫病的敏感性和特异性。结果显示,SEA和LHD-Sj23作为... 详细信息

为寻找可替代虫卵抗原(SEA)用于家畜血吸虫病血清学诊断的重组抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较了日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水区多肽重组蛋白LHD-Sj23和日本血吸虫SEA检测牛血吸虫病的敏感性和特异性。结果显示,SEA和LHD-Sj23作为诊断抗原对189例血吸虫病牛和92例健康牛的阳性检出率分别为87.8%和90.5%,阳性符合率分别为93.5%和92.4%。两种抗原之间敏感性和特异性均无显著性差异(P>0.05)。提示,LHD-Sj23重组抗原可替代SEA用于家畜血吸虫病的血清学诊断。

关键词：牛血吸虫病重组抗原血清学诊断

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日本血吸虫童虫裂解物对东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的筛选及阳性克隆分析

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生物工程学报 2008年第5期24卷 733-739页

作者：贾人初孙毅刘金明傅志强苑纯秀石耀军陆珂孙焕李浩金亚美林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 上海师范大学生命与环境科学学院上海200234

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,... 详细信息

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,获得了19条有效EST序列。其中13个条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,6个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。将19个EST序列的阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中4号(GenBank Accession No.:EW968294)、13号(GenBank Accession No.:EW968303)、14号(GenBank Accession No.:EW968304)、15号(GenBank Accession No.:EW968305)、18号(GenBank Accession No.:EW968308)克隆均诱导了显著的杀虫效果。综合生物信息学分析结果及体外杀伤试验结果,编码CASP8和FADD类似性细胞程序性死亡调节蛋白、α-2-HS-糖蛋白、M4蛋白、具有R3H结构域的一种mRNA结合蛋白以及三种未知蛋白的编码基因(14、15、18号克隆)可能是东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因。为进一步研究东方田鼠抗血吸虫机理奠定了基础。

关键词：日本血吸虫东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库抗性基因

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