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中国兽医寄生虫病 2008年第5期16卷 24-30页

作者：石耀军陆珂王兰平李浩朱春霞刘金明刘竹清曾少才康赛娥中国农业科学院上海兽医研究所／国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200232 湖南省兽医总站长沙410007 湖南省沅江市畜牧局沅江413100 湖南省岳阳县畜牧水产局岳阳414100

目的分析1993~2007年两个洲垸型血吸虫病流行病学观测点调查数据,评估各种防治措施实施的效果,为策划和调整防治对策提供科学依据。方法根据＂观测点方案＂要求开展人、畜血吸虫病疫情、螺情、野粪等调查,统计分析各项指标。结果2个洲... 详细信息

目的分析1993~2007年两个洲垸型血吸虫病流行病学观测点调查数据,评估各种防治措施实施的效果,为策划和调整防治对策提供科学依据。方法根据＂观测点方案＂要求开展人、畜血吸虫病疫情、螺情、野粪等调查,统计分析各项指标。结果2个洲垸型观测点耕牛血吸虫病感染率分别由设点时（1993年）的28.5%和11.99%下降至2007年的6.13%和2.83%,人群血吸虫病血检阳性率仍在高水平上徘徊,垸内残存螺点极少且找不到感染性钉螺,垸外螺情变化不大。结论调查表明洲垸型地区仍是我国血吸虫病流行最严重的地区,垸外钉螺面积大,密度高,难以实施有效的药物灭螺,耕牛常年在湖洲上放牧感染血吸虫病并传播病原,这类地区是以畜源性为主的血吸虫病流行区,只有加强对放牧家畜的管理,才能有效地控制血吸虫病疫情。

关键词：血吸虫病洲垸型流行病学调查动态分析

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大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达纯化及多克隆抗体制备

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中国动物传染病学报 2024年

作者：何宇婷郭晴晴岳永程贾静韩艳辉周岩卢丽丹唐文强洪炀傅志强中国农业科学院上海兽医研究所国家动物血吸虫病参考实验室中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室(中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所) 贵州省疾病预防控制中心西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所海南热带病研究中心(国家热带病研究中心海南分中心)

片形吸虫病主要是由大片形吸虫（Fasciolagigantica）和肝片形吸虫（Fasciolahepatica）寄生在草食性哺乳动物或人肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。片形吸虫中存在的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR)是其氧化还原系统中一个含硒的多... 详细信息

片形吸虫病主要是由大片形吸虫（Fasciolagigantica）和肝片形吸虫（Fasciolahepatica）寄生在草食性哺乳动物或人肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。片形吸虫中存在的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR)是其氧化还原系统中一个含硒的多功能酶。本研究对大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（FgTGR）进行了克隆、表达及纯化，并制备其多克隆抗体。通过PCR方法扩增了含开放阅读框（ORF）的FgTGR序列与含硒蛋白序列的FgTGR序列（FgTGRsec），分别构建了克隆质粒pMD19T-FgTGR和表达质粒pET28a(+)-FgTGRsec。将pET28a(+)-FgTGRsec单独转入BL21（DE3）感受态细胞后进行诱导表达，此外，将pET28a(+)-FgTGRsec与pSUABC质粒共同转入BL21（DE3）感受态细胞后进行表达，并对表达后的这两种重组蛋白分别进行纯化。以纯化的重组FgTGR蛋白（rFgTGR）作为免疫抗原对BALB/c小鼠进行皮下免疫，制备多克隆抗体。FgTGR基因的ORF为1920bp，编码639个氨基酸，理论分子量约为70 kDa，FgTGRsec基因片段为1968 bp，编码656个氨基酸，表达的重组蛋白理论分子量约为72 kDa，两者在大肠杆菌中表达的重组蛋白在蛋白电泳结果中均符合预测大小。成功制备了针对rFgTGR的多克隆抗体，将该抗体1:400稀释后作为蛋白免疫印迹实验的一抗，可成功地检测到rFgTGRsec条带。本研究成功表达了含硒蛋白和不含硒蛋白的重组FgTGR蛋白，制备了针对FgTGR蛋白的多克隆抗体，为FgTGR的酶动力学研究及其抑制物的筛选提供了基础。

关键词：大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶表达纯化多克隆抗体

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日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

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上海市寄生虫学会2012学术年会

作者：洪炀李祥瑞林矫矫李学珍傅志强石耀军陆珂杨健美朱传刚苑纯秀李浩中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241 南京农业大学动物医学院南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241 南京农业大学动物医学院南京210095

克隆、表达日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因(Sj TOM34),并对其生物特性进行初步研究.应用RT-PCR方法从42d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因,并进行生物信息学分析.应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育...

克隆、表达日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因(Sj TOM34),并对其生物特性进行初步研究.应用RT-PCR方法从42d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因,并进行生物信息学分析.应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达状况.构建了SjTOM34基因重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,Western blotting分析了重组抗原的免疫原性及该蛋白在不同发育阶段虫体中的表达情况,利用免疫组化方法观察了该蛋白在虫体内的分布情况.获得了SjTOM34的基因序列,其开放阅读框(ORF)为1083bp.

关键词：

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18日龄日本血吸虫酵母双杂交cDNA文库的构建

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寄生虫与医学昆虫学报 2009年第4期16卷 208-212页

作者：李勉金亚美刘金明程国锋石耀军张龙现蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 河南农业大学牧医工程学院郑州450002

为揭示血吸虫生长发育机理，深入研究血吸虫与宿主、血吸虫雌雄虫之间蛋白质的相互关系，本研究选取血吸虫进入终末宿主体内18天时的虫体（发育成熟初期），采用Clontech Matchmaker技术成功构建日本血吸虫的酵母双杂交cDNA文库。该文... 详细信息

为揭示血吸虫生长发育机理，深入研究血吸虫与宿主、血吸虫雌雄虫之间蛋白质的相互关系，本研究选取血吸虫进入终末宿主体内18天时的虫体（发育成熟初期），采用Clontech Matchmaker技术成功构建日本血吸虫的酵母双杂交cDNA文库。该文库具有基因多样性和足够大的库容量，库容量为2．5×10^6pfu／mL，插入的双链cDNA片段的长度在0．25～2．0kb之间，文库重组比率为97．9％，具有良好的代表性。该文库的构建为筛选相互作用蛋白并进一步阐明其生理意义提供了基础。

关键词：日本血吸虫酵母双杂交 cDNA文库雌虫雄虫

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日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

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2012年全国农学博士后学术论坛

作者：洪炀李祥瑞林矫矫李学珍傅志强石耀军陆珂杨健美朱传刚苑纯秀李浩中国农业科学院上海兽医研究所，农业部动物寄生虫学重点开放实验室，国家防治动物血吸虫病专业实验室，上海 200241 南京农业大学动物医学院，南京 210095 中国农业科学院上海兽医研究所，农业部动物寄生虫学重点开放实验室，国家防治动物血吸虫病专业实验室，上海 200241 南京农业大学动物医学院，南京 210095

背景：线粒体的外膜转运酶通过主动运输的方式将这些线粒体前体蛋白运输到线粒体内，在线粒体前体蛋白进入线粒体的过程中发挥着重要的作用。日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因（SjTOM34）可能对其生长发育具有重要作用。方法：应用RT-... 详细信息

背景：线粒体的外膜转运酶通过主动运输的方式将这些线粒体前体蛋白运输到线粒体内，在线粒体前体蛋白进入线粒体的过程中发挥着重要的作用。日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因（SjTOM34）可能对其生长发育具有重要作用。方法：应用RT-PCR方法从42d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因，并进行生物信息学分析。应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达状况。构建了SjTOM34基因重组原核表达质粒，并在大肠杆菌中进行表达，Western blotting分析了重组抗原的免疫原性及该蛋白在不同发育阶段虫体中的表达情况，利用免疫组化方法观察了该蛋白在虫体内的分布情况。结果：获得了SjTOM34的基因序列，其开放阅读框（ORF）为1083bp。该基因在所检测的不同发育阶段童虫和成虫中均有表达，其中在35d虫体中的表达量略高于其他时期的虫体。成功构建了重组的原核表达质粒并且在大肠杆菌中获得表达，重组蛋白在上清和沉淀中都有存在，并且具有较好的免疫原性，在所检测的各时期虫体中均可检测到该蛋白的存在，并且主要分布在虫体的实质组织中。结论与意义：获得了日本血吸虫SjTOM34基因，初步明确了该基因在日本血吸虫童虫和成虫中的表达情况，及在成虫中的分布，为进一步研究该基因的生物学功能及作用机制奠定了基础。

关键词：日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因基因克隆作用机制

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我国家畜血吸虫病防治和研究进展

我国家畜血吸虫病防治和研究进展

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：林矫矫胡述光刘金明中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室湖南省人民政府参事室

一、我国血吸虫病的流行概况及对社会经济的影响日本血吸虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病。1905年美籍医生Logan在湖南常德广德医院一18岁渔民中发现我国首例血吸虫病病例。但据湖南长沙马王堆出土的西汉女尸和湖北江陵凤凰山出... 详细信息

一、我国血吸虫病的流行概况及对社会经济的影响日本血吸虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病。1905年美籍医生Logan在湖南常德广德医院一18岁渔民中发现我国首例血吸虫病病例。但据湖南长沙马王堆出土的西汉女尸和湖北江陵凤凰山出土的西汉男尸的尸体检查结果表明,血吸虫病在我国至少已流行2100多年。建国初期,日本血吸虫病曾在我国江苏、浙江、安徽、江西、湖南、湖北、四川、云南、福建、广东、广西和上海等

关键词：防治工作农业血防基因工程疫苗钉螺面积中间宿主传染源控制日本血吸虫病基因工程苗流行特点牛血吸虫病防治策略

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东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血吸虫病免疫效果观察

东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血吸虫病免疫效果观察

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：宋震宇刘金明何金桃孙帅石耀军李浩陆珂林矫矫岳城新疆农业大学动物医学学院中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室

我们在前期研究中利用东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,获得10个阳性克隆。本文选择其中的8个噬菌体克隆单独或联合免疫BALB/c小鼠,观察对日本血吸虫病的免疫预防效果,以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因。... 详细信息

我们在前期研究中利用东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,获得10个阳性克隆。本文选择其中的8个噬菌体克隆单独或联合免疫BALB/c小鼠,观察对日本血吸虫病的免疫预防效果,以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因。和空白对照组相比,展示血吸虫锌指蛋白的1号噬菌体克隆免疫组在两次实验中分别获得了32.10%和32.16%的减虫率、61.14%和26.47%的肝脏减卵率,虫体合抱率分别由92.59%、57.39%下降到69.09%、41.03%;其它噬菌体克隆单独免疫或联合免疫组在第一次实验中均获得了8.02%～32.72%的减虫率和40.19%～69.53%的减卵率,但在第二次实验中未能得到验证。研究结果提示,日本血吸虫环状锌指蛋白(1号克隆)编码基因在疫苗方面具有重要研究价值。

关键词：日本血吸虫噬菌体展示抗原免疫小鼠

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湖沼型林业血防工程区钉螺细胞色素氧化酶I基因差异分析

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中国血吸虫病防治杂志 2012年第2期24卷 186-188,192页

作者：徐玉梅张世清朱传刚皖南医学院人体寄生虫学教研室芜湖241002 安徽省血吸虫病防治研究所中国农业科学院上海兽医研究所动物寄生虫病重点实验室

目的分析安徽省湖沼型血吸虫病流行区林业血防工程区钉螺细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)基因的差异性,探讨林业血防工程中不同生态环境对钉螺生态的影响。方法采集长江安徽段上游安庆、中游铜陵、下游无为等3地林业血防工程区和草滩对照点钉螺... 详细信息

目的分析安徽省湖沼型血吸虫病流行区林业血防工程区钉螺细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)基因的差异性,探讨林业血防工程中不同生态环境对钉螺生态的影响。方法采集长江安徽段上游安庆、中游铜陵、下游无为等3地林业血防工程区和草滩对照点钉螺,提取DNA,PCR扩增COⅠ基因并测序。采用blast对COⅠ基因比较相似性。采用微小钉螺、双脐螺COⅠ基因序列作为外群参照序列,Kimura双参数法计算遗传距离,MEGA 3.1软件非加权组平均法(UPGMA)和邻近法(NJ)构建系统发生树。结果 PCR扩增获得的COⅠ基因约为700 bp(含两端引物)。各地林业工程区之间,各林业工程区与其草滩对照点之间的COⅠ基因相似性均较高,均≥98%;安庆、铜陵、无为等3地林业工程区之间遗传距离为0.003～0.012,3地林业工程区与草滩对照点的遗传距离分别为0.003、0.019、0.007。2种方法构建的进化树拓扑结构基本一致。进化树分2大分支,双脐螺独立成一大支,其他的成一大支(在这大支中微小钉螺又成一支),3地的林业工程区与对照草滩钉螺基因差异比较小。结论长江安徽段上、中、下游林业血防工程区钉螺COⅠ基因在不同的生态环境下可能已存在一定程度的遗传分化,但分化程度较低。

关键词：钉螺林业血防生态环境细胞色素C氧化酶Ⅰ

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洲岛型地区牛血吸虫病流行动态调查与分析

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中国兽医寄生虫病 2008年第4期16卷 20-23页

作者：石耀军陆珂高式伟孙荣林李浩刘金明中国农业科学院上海兽医研究所／国家防治动物血吸虫病专业实验室 200232 江苏省动物疫病预防控制中心 210036 江苏省镇江市丹徒区畜牧兽医站 212003

目的准确掌握洲岛型地区牛血吸虫病流行动态规律,分析评估防治措施的效果,探索这类地区控制血吸虫病流行的技术和措施。方法以洲岛型地区江苏省丹徒区世业镇为观测点,通过牛血吸虫病感染率、感染强度、主要传染源及螺情调查,统计分析各... 详细信息

目的准确掌握洲岛型地区牛血吸虫病流行动态规律,分析评估防治措施的效果,探索这类地区控制血吸虫病流行的技术和措施。方法以洲岛型地区江苏省丹徒区世业镇为观测点,通过牛血吸虫病感染率、感染强度、主要传染源及螺情调查,统计分析各种调查数据。结果经连续15年的调查观测,牛血吸虫病感染率、感染强度、野粪阳性率及螺情均呈无规律变化。结论由于世业乡地处长江中心,随着水位涨落,上游钉螺附着于漂浮物带到江滩草洲,繁殖孳生,灭螺困难,传染源难以控制,疫情时高时低,可通过以机耕代牛耕,发展水禽控制传染源,达到控制血吸虫病疫情的目的。

关键词：洲岛型牛血吸虫病动态调查分析

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日本血吸虫童虫裂解物对东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的筛选及阳性克隆分析

日本血吸虫童虫裂解物对东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的筛选...

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：贾人初孙毅刘金明傅志强苑纯秀石耀军陆珂孙焕李浩金亚美林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海师范大学生命与环境科学学院

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,... 详细信息

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,获得了19条EST序列。其中13个条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,6个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。将19个EST序列的阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中4号(Genebank登陆号:EW968294)、13号(Genbank登陆号:EW968303)、14号(Genebank登陆号:EW968304)、15号(Genebank登陆号:EW968305)、18号(Genbank登陆号:EW968308)克隆均诱导了显著的杀虫效果。综合生物信息学分析结果及体外杀伤试验结果,编码CASP8和FADD类似性细胞程序性死亡调节蛋白、α-2-HS-糖蛋白、M4蛋白、具有R3H结构域的一种mRNA结合蛋白以及三种未知蛋白的编码基因(14、15、18号克隆)可能是东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因。本研究为进一步研究东方田鼠抗血吸虫机理奠定了基础。

关键词：日本血吸虫东方田鼠,肝脏,噬菌体展示cDNA文库,抗性基因

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