检索结果-内蒙古大学图书馆

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因,探索其分子机理,我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织,器官裂解物共培养,比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果,之后,以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44d)噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选后,随机挑取92个噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析,获得了19个有效EST序列,其中15条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,4个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。对19个有效EST编码蛋白的功能预测结果显示,其中6个为卵壳蛋白(Eggshell protein)相关基因,10个EST及其编码蛋白的功能与血吸虫基因表达调控及蛋白质加工修饰相关。研究结果提示,东方田鼠直接或间接地影响血吸虫基因表达,进而影响血吸虫的发育,可能是东方田鼠具有抗血吸虫特性的一个重要分子机理。

关键词：日本血吸虫东方田鼠筛选噬菌体展示cDNA文库

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日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶编码基因的表达及诊断应用

日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶编码基因的表达及诊断应用

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：孙帅刘金明宋震宇王素娟邢荣鹤石耀军李浩陆珂林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室

目的克隆和表达日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶(Sj32),探索该重组抗原在动物血吸虫病诊断方面的应用潜能。方法用PCR法从Sj32前体编码基因中克隆编码成熟体的基因片段,以pET-28(a)为表达载体,用大肠埃希菌表达,制备重组抗原(rSj32);应用E... 详细信息

目的克隆和表达日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶(Sj32),探索该重组抗原在动物血吸虫病诊断方面的应用潜能。方法用PCR法从Sj32前体编码基因中克隆编码成熟体的基因片段,以pET-28(a)为表达载体,用大肠埃希菌表达,制备重组抗原(rSj32);应用ELISA方法检测待检血清,并比较rSj32、日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)以及重组诊断诊断抗原rSj23对人工感染兔、小鼠及水牛血吸虫病的检测效果。结果成功表达了Sj32成熟体,表达产物rSj32的分子量为41 kDa,可用His柱纯化,得率约为68.8 mg/l培养物。用rSj32检测人工感染兔、小鼠和水牛血清以及对照兔、小鼠和水牛血清,特异性分别为100.0%、96.7%和96.9%,敏感性分别为88.9%、85%和71.8%,该抗原对牛血清的敏感性略低于SEA和rSj23,其余检测结果三者相比无显著差异。结论rSj32在诊断动物血吸虫病方面具有研究和应用价值。

关键词：日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶重组抗原酶联免疫吸附试验诊断

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家畜日本血吸虫病PCR诊断方法建立

家畜日本血吸虫病PCR诊断方法建立

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：张欣刘金明冯金涛金亚美李浩陆珂刘军涛何川川朱传刚林矫矫程国锋中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

血吸虫病是一种不可忽视的人兽共患病,其危害性仅次于疟疾,在76个国家和地区流行,估计有近2.1亿人感染。患病家畜是我国血吸虫病的重要传染源。现今对家畜血吸虫病诊断主要采用病原学诊断方法(粪便毛蚴孵化法)和免疫学诊断技术(检测血... 详细信息

血吸虫病是一种不可忽视的人兽共患病,其危害性仅次于疟疾,在76个国家和地区流行,估计有近2.1亿人感染。患病家畜是我国血吸虫病的重要传染源。现今对家畜血吸虫病诊断主要采用病原学诊断方法(粪便毛蚴孵化法)和免疫学诊断技术(检测血吸虫特异抗体)。随着我国血防成就的取得,家畜血吸虫感染率和感染度越来越低,病原学诊断方法因漏检率高而难以及时发现病畜、准确了解疫情,而免疫学方法因和其它吸虫病具有交叉反应亦难以达到目的。前期,一些学者开展了应用PCR技术检测实验动物体内血吸虫循环DNA并应用于人体血吸虫病诊断的研究,取得了不错效果。本研究通过查阅国内外相关文献,选取具有诊断价值的血吸虫基因。根据这些基因设计引物,并用这些引物检测兔阳性血清以筛选合适的引物用于后续试验。最终从日本血吸虫线粒体细胞色素C氧化酶1(CO1)、线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶1、G55A上高度重复的逆转录子SJR2中选择SJR2作为目的基因,检测羊、牛血液中日本血吸虫的循环DNA。运用巢式PCR进行两轮扩增检测,扩增片段分别为428bp,231bp。实验过程中用到的血液样品用两种方式采集,分别为:血滤纸(全血)、血清。实验结果显示,从阳性血滤纸中提取DNA进行检测,在感染3d之后就可检测出;而从血清中提取DNA进行检测,则在感染7d之后才可检出。实验证明,选取合适的基因,运用PCR的方法来检测血液中的循环DNA对于家畜日本血吸虫病的早期检测是一种十分有潜力的诊断方法。

关键词：日本血吸虫病 PCR 诊断

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日本血吸虫感染家畜的IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

日本血吸虫感染家畜的IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：冯金涛刘金明韩愉袁炜李浩陆珂金亚美林矫矫程国锋中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,我们用从感染日本血吸虫的绵羊、黄牛、水牛血清中纯化的IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44 d)噬菌体展示cDNA文库。每种动物IgG进行二轮筛选,经六轮筛选后,随机挑取11 0个阳性噬菌体克隆... 详细信息

为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,我们用从感染日本血吸虫的绵羊、黄牛、水牛血清中纯化的IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44 d)噬菌体展示cDNA文库。每种动物IgG进行二轮筛选,经六轮筛选后,随机挑取11 0个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析,获得了54个有效EST序列,其中42条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,12个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,以噬菌体展示载体的10B衣壳蛋白开放阅读框(ORF)为依据,对上述42个与GenBank数据库资料同源的EST进行对码分析,结果21个EST序列能和噬菌体展示载体阅读框对码,为有效展示序列。其中血吸虫MRP1(Multidrug Resistance Protein 1)序列在所有测序结果中有20个重复。本文筛选结果为今后开展诊断抗原基因的克隆、表达和诊断效果评估创造了条件。

关键词：日本血吸虫 Protein G 绵羊血清黄牛血清水牛血清筛选噬菌体展示cDNA文库 MRP1

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诊断家畜日本血吸虫病胶体金免疫层析试纸条的研制

诊断家畜日本血吸虫病胶体金免疫层析试纸条的研制

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会

作者：许瑞赵登云陆珂李浩洪炀林矫矫朱传刚中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室

目的家畜是日本血吸虫病的主要保虫宿主,而可感染的家畜种类众多。为适应基层家畜血吸虫病筛查需要,研制针对多种动物的胶体金免疫层析试纸条(GICA法)。方法根据链球菌蛋白G(SPG)具有与多种动物的Ig G结合特性,设计重组蛋白G(r SPG)的... 详细信息

目的家畜是日本血吸虫病的主要保虫宿主,而可感染的家畜种类众多。为适应基层家畜血吸虫病筛查需要,研制针对多种动物的胶体金免疫层析试纸条(GICA法)。方法根据链球菌蛋白G(SPG)具有与多种动物的Ig G结合特性,设计重组蛋白G(r SPG)的基因序列,构建r SPG的原核表达质粒,亲和层析纯化重组蛋白,ELISA测定r SPG与不物种Ig G的亲和力。将r SPG进行胶体金标记,探索蛋白标记的最佳p H值和标记量,制备金标垫,分别用SEA和r SPG作为检测线和质控线,确定其最佳划线浓度与血清检测的最佳稀释度。用组装好的试纸条检测标准阴、阳性BALB/c鼠与新西兰大白兔血清,以及粪检阴、阳性的山羊血清、水牛血清,评估其敏感性和特异性;检测前后盘吸虫病牛血清、捻转血矛线虫病羊血清、东毕吸虫病羊血清评价其交叉反应性。用GICA法和ELISA法分别对不同感染强度的水牛血清进行检测。对人工感染的水牛阴、阳性血纸和从疫区采集的水牛血纸分别用GICA法和ELISA法进行检测,评估实际检测效果。结果获得了可溶性表达的r SPG,与四个物种Ig G亲和力与商品化链球菌蛋白G一致。胶体金标记r SPG的最佳p H值为5.0、最佳标记量为10μg/ml;检测线和质控线的最佳划线浓度均为0.5 mg/m L;血清检测最佳稀释度为1:20。研制的试纸条可用于日本血吸虫感染小鼠、新西兰大白兔、水牛、山羊血清抗体检测,检测感染小鼠与兔血清的敏感性、特异型均为100.0%。检测山羊、水牛血清的敏感性为100.0%,与ELISA法相同;检测山羊、水牛特异性为88.64%和94.23%,高于ELISA法的75.0%和84.62%。与前后盘吸虫、捻转血矛线虫、东毕吸虫感染血清交叉反应率分别为14.29%、16.67%、33.33%,低于ELISA法。在感染强度<20条/头时,GICA法的敏感性为75.0%,低于ELISA法的100.0%。在感染强度>20条/头时,GICA法和ELISA法的敏感性均为100.0%。对水牛血纸进评估时,对于实验室人工感染水牛血纸GICA法和ELISA法的敏感性和特异性均为100.0%,并且对疫区采集的水牛血纸进行检测时两种方法之间无统计学差异。结论成功表达了重组链球菌蛋白G,并研制出能检测多种家畜血吸虫病的胶体金免疫层析试纸条,其检测家畜血吸虫感染的灵敏度和特异度均较高。

关键词：人工感染胶体金免疫层析试纸条日本血吸虫病 SPG ELISA 感染强度羊血清

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诊断家畜日本血吸虫病胶体金免疫层析试纸条的研制

诊断家畜日本血吸虫病胶体金免疫层析试纸条的研制

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：许瑞赵登云陆珂李浩洪炀林矫矫朱传刚中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室

目的家畜是日本血吸虫病的主要保虫宿主,而可感染的家畜种类众多。为适应基层家畜血吸虫病筛查需要,研制针对多种动物的胶体金免疫层析试纸条(GICA法)。方法根据链球菌蛋白G(SPG)具有与多种动物的IgG结合特性,设计重组蛋白G(r SPG)的基... 详细信息

目的家畜是日本血吸虫病的主要保虫宿主,而可感染的家畜种类众多。为适应基层家畜血吸虫病筛查需要,研制针对多种动物的胶体金免疫层析试纸条(GICA法)。方法根据链球菌蛋白G(SPG)具有与多种动物的IgG结合特性,设计重组蛋白G(r SPG)的基因序列,构建r SPG的原核表达质粒,亲和层析纯化重组蛋白,ELISA测定r SPG与不物种Ig G的亲和力。将r SPG进行胶体金标记,探索蛋白标记的最佳p H值和标记量,制备金标垫,分别用SEA和r SPG作为检测线和质控线,确定其最佳划线浓度与血清检测的最佳稀释度。用组装好的试纸条检测标准阴、阳性BALB/c鼠与新西兰大白兔血清,以及粪检阴、阳性的山羊血清、水牛血清,评估其敏感性和特异性;检测前后盘吸虫病牛血清、捻转血矛线虫病羊血清、东毕吸虫病羊血清评价其交叉反应性。用GICA法和ELISA法分别对不同感染强度的水牛血清进行检测。对人工感染的水牛阴、阳性血纸和从疫区采集的水牛血纸分别用GICA法和ELISA法进行检测,评估实际检测效果。结果获得了可溶性表达的r SPG,与四个物种Ig G亲和力与商品化链球菌蛋白G一致。胶体金标记r SPG的最佳p H值为5.0、最佳标记量为10μg/ml;检测线和质控线的最佳划线浓度均为0.5 mg/mL;血清检测最佳稀释度为1:20。研制的试纸条可用于日本血吸虫感染小鼠、新西兰大白兔、水牛、山羊血清抗体检测,检测感染小鼠与兔血清的敏感性、特异型均为100.0%。检测山羊、水牛血清的敏感性为100.0%,与ELISA法相同;检测山羊、水牛特异性为88.64%和94.23%,高于ELISA法的75.0%和84.62%。与前后盘吸虫、捻转血矛线虫、东毕吸虫感染血清交叉反应率分别为14.29%、16.67%、33.33%,低于ELISA法。在感染强度<20条/头时,GICA法的敏感性为75.0%,低于ELISA法的100.0%。在感染强度>20条/头时,GICA法和ELISA法的敏感性均为100.0%。对水牛血纸进评估时,对于实验室人工感染水牛血纸GICA法和ELISA法的敏感性和特异性均为100.0%,并且对疫区采集的水牛血纸进行检测时两种方法之间无统计学差异。结论成功表达了重组链球菌蛋白G,并研制出能检测多种家畜血吸虫病的胶体金免疫层析试纸条,其检测家畜血吸虫感染的灵敏度和特异度均较高。

关键词：日本血吸虫病诊断 GICA SPG

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猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白的原核表达、纯化和鉴定

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医学动物防制 2018年第7期34卷 671-675页

作者：江嘉欣王钊哲许瑞吴思敏李嘉静蔡爱群林矫矫洪炀陆珂李浩陈兆国石耀军朱传刚中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241 韶关学院英东生命科学学院

目的对猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)Cap蛋白的主要B细胞抗原表位进行分析,构建Cap表达多表位的原核表达系统,并对表达的目的蛋白进行分析,为猪圆环病毒诊断试剂开发奠定基础。方法设计并合成PCV2Cap基因,与PET-28a(+)载体连接后... 详细信息

目的对猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)Cap蛋白的主要B细胞抗原表位进行分析,构建Cap表达多表位的原核表达系统,并对表达的目的蛋白进行分析,为猪圆环病毒诊断试剂开发奠定基础。方法设计并合成PCV2Cap基因,与PET-28a(+)载体连接后并转入大肠杆菌BL21(DE3)中构建重组质粒PET-28(a)-Cap,对重组质粒进行诱导表达获得重组蛋白,通过His亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果重组质粒在大肠杆菌中成功表达,蛋白质分子量约为17.4 k Da,与预期相符;Western blot结果显示,重组蛋白可以与猪圆环病毒阳性血清发生特异性结合。结论PCV2 Cap蛋白的表达纯化为圆环病毒血清抗体诊断方法的建立,进而为养殖场有效监控猪圆环病毒的免疫保护情况奠定基础。

关键词：猪圆环病毒 Cap蛋白表达纯化

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两个山丘型疫区牛血吸虫病疫情动态纵向观察

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中国血吸虫病防治杂志 2012年第6期24卷 650-653页

作者：石耀军李浩陆珂董国栋毛光琼郭莉马坤高建新杨俊凯傅志强朱传刚杨健美金亚美苑纯秀程国锋冯新港林矫矫刘金明中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 云南省动物疫病预防控制中心四川省动物疫病预防控制中心云南省巍山县动物疫病预防控制中心四川省丹棱县动物疫病预防控制中心

目的了解山丘型血吸虫病疫区牛血吸虫病流行动态,为正确评估防治效果、制订防控对策提供参考依据。方法选择两个有代表性的山丘型疫区仁美和大仓作为观察点,采用毛蚴孵化法检查牛血吸虫感染情况,比较不同年龄牛感染率;入户调查家畜放牧... 详细信息

目的了解山丘型血吸虫病疫区牛血吸虫病流行动态,为正确评估防治效果、制订防控对策提供参考依据。方法选择两个有代表性的山丘型疫区仁美和大仓作为观察点,采用毛蚴孵化法检查牛血吸虫感染情况,比较不同年龄牛感染率;入户调查家畜放牧行为,每年4、9月调查野粪和钉螺分布及感染率。结果与1993年比较,2007年仁美和大仓观察点牛血吸虫感染率分别下降98.4%和93.8%;感染度亦呈下降态势,至2007年基本以低感染度为主。1995年以后仁美观察点野粪阳性率为0,大仓点至2007年处于较低徘徊状态;活螺密度和阳性螺密度呈下降趋势。结论山丘型血吸虫病流行区由于自然环境特殊,疫区往往呈点状或带状分布,加大查治病和扩大化疗力度可迅速降低血吸虫病疫情。要彻底阻断血吸虫病传播还必须加强钉螺孳生环境改造和家畜血吸虫病传染源管理。

关键词：血吸虫病牛纵向观察山丘型疫区

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胶体金免疫层析条诊断家畜日本血吸虫病的现场应用

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中国动物传染病学报 2009年第4期17卷 67-70页

作者：彭运潮邓灶福欧阳叙向石耀军谭胜国沈萍湖南生物机电职业技术学院长沙410127 中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为评估快速胶体金免疫层析条(colloidal gold imunochromatography assay,GICA)诊断现场家畜日本血吸虫病的价值,以GICA法对来自湖南血吸虫病流行区和非流行区的山羊、水牛、黄牛血清进行检测,并和间接血凝法(indirect haemagglutinatio... 详细信息

为评估快速胶体金免疫层析条(colloidal gold imunochromatography assay,GICA)诊断现场家畜日本血吸虫病的价值,以GICA法对来自湖南血吸虫病流行区和非流行区的山羊、水牛、黄牛血清进行检测,并和间接血凝法(indirect haemagglutination test,IHA)及粪便孵化法的诊断结果进行比较。结果显示,GICA对流行区284只山羊、172头水牛和145头黄牛血清检测,阳性率分别为10.21%、8.14%、8.28%;对非流行区的30只山羊、25头水牛、17头黄牛检测,假阳性率分别为10%、12%和11.76%。GICA和IHA的诊断结果相比,阳性符合率分别为93.8%、100%、100%,阴性符合率分别为99.7%、98.9%、98.7%;GICA与粪便孵化法的诊断结果相比,阳性符合率均为100%,阴性符合率分别为94.6%、96.9%、94.3%。可见,GICA法快速、简便,可以代替现行的IHA和粪便孵化检查法,用于疫区家畜血吸虫病的筛查。

关键词：胶体金免疫层析条家畜日本血吸虫病诊断

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