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作者：苑纯秀林矫矫陆珂冯新港傅志强刘金明蔡幼民 200232上海市石龙路345弄3号

本发明提供了日本血吸虫(中国大陆株)36D4基因的基因序列筛选方法和克隆。本发明应用抑制性消减杂交技术,以日本血吸虫成虫为实验组,虫卵为驱动组,构建了成虫消减质粒文库,由该文库挑选克隆定制cDNA微阵列,经杂交分析,获得一批在成...

标准号: CN1940070

本发明提供了日本血吸虫(中国大陆株)36D4基因的基因序列筛选方法和克隆。本发明应用抑制性消减杂交技术,以日本血吸虫成虫为实验组,虫卵为驱动组,构建了成虫消减质粒文库,由该文库挑选克隆定制cDNA微阵列,经杂交分析,获得一批在成虫和虫卵间差异表达的cDNA克隆。

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日本血吸虫1ZD11基因的克隆

日本血吸虫1ZD11基因的克隆

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作者：苑纯秀林矫矫陆珂冯新港傅志强刘金明蔡幼民 200232上海市石龙路345弄3号

本发明提供了日本血吸虫(中国大陆株)1ZD11基因的基因序列筛选方法和克隆。本发明应用抑制性杂交技术,以日本血吸虫尾蚴为实验组,成虫为驱动组,构建了尾蚴消减质粒文库,由该文库挑选克隆定制cDNA微陈列,经杂交分析,获得一批在尾蚴和...

标准号: CN1940071

本发明提供了日本血吸虫(中国大陆株)1ZD11基因的基因序列筛选方法和克隆。本发明应用抑制性杂交技术,以日本血吸虫尾蚴为实验组,成虫为驱动组,构建了尾蚴消减质粒文库,由该文库挑选克隆定制cDNA微陈列,经杂交分析,获得一批在尾蚴和成虫间差异表达的cDNA克隆。

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硝唑尼特干混悬剂主要活性代谢物在狗体内的药物动力学研究

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中国兽医杂志 2009年第6期45卷 75-76页

作者：刘元元薛飞群张丽芳邹思湘中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫病学重点开放实验室上海徐汇200241 南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

硝唑尼特(nitazoxanide,简称NTZ),为硝基噻唑酰胺类化合物,是一种有效的、广谱的抗动物与人体寄生虫、细菌和真菌感染的药物。1984年报道用作抗人体无钩绦虫(Taenia saginata)和微小膜壳绦虫(Hymenolepis nana)感染,单剂量即可起效。大... 详细信息

硝唑尼特(nitazoxanide,简称NTZ),为硝基噻唑酰胺类化合物,是一种有效的、广谱的抗动物与人体寄生虫、细菌和真菌感染的药物。1984年报道用作抗人体无钩绦虫(Taenia saginata)和微小膜壳绦虫(Hymenolepis nana)感染,单剂量即可起效。大量临床试验研究表明,NTZ可用治疗多种寄生虫感染,如阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、溶组织内阿米巴、犬复孔绦虫(Hymenolepis nana)和豌豆形带绦虫(Taenia pisiformis)等,以及抗皮肤真菌感染。我们进行此项研究旨在了解该药在动物体内的动态变化规律和特点,为新药设计、临床试验、改进剂型和给药方案的制定提供理论依据。[第一段]

关键词：药物动力学动物体内活性代谢物干混悬剂微小膜壳绦虫酰胺类化合物真菌感染动态变化规律

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长角血蜱新基因HL05全长序列的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 380-386页

作者：张丽艳刘光远田占成谢俊仁龚真莉刘建刚中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

以兔抗长角血蜱饥饿雌蜱全蜱蛋白阳性血清为探针,对长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选,获得一个阳性克隆HL05。经5′-RACE技术得到HL05基因的全长序列。HL05基因全长1 053bp,开放阅读框长540bp,编码179个氨基酸,预计蛋白分子... 详细信息

以兔抗长角血蜱饥饿雌蜱全蜱蛋白阳性血清为探针,对长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选,获得一个阳性克隆HL05。经5′-RACE技术得到HL05基因的全长序列。HL05基因全长1 053bp,开放阅读框长540bp,编码179个氨基酸,预计蛋白分子质量为20.01ku。序列同源性分析表明,该基因为长角血蜱新基因。对推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,表明HL05蛋白为分泌型蛋白,无跨膜区,具有较高的抗原指数。将该基因亚克隆后连接到原核表达载体pGEX-4T-1上,转入BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导后得到大小为46ku左右的重组蛋白,与预期大小一致。Western-blot结果显示兔抗长角血蜱成蜱全虫抗体能够识别该重组蛋白。

关键词：长角血蜱 HL05新基因全长序列分析原核表达

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长角血蜱MESK基因的克隆及其生物学特性分析

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中国兽医科学 2013年第8期43卷 806-811页

作者：赵波刘光远罗金张萍田占成谢俊仁田美媛王芳芳袁小松中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了... 详细信息

为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了表达。48h后对细胞进行裂解,用兔抗长角血蜱阳性血清与表达出的重组蛋白进行反应,以检测重组蛋白的免疫活性。结果显示,MESK基因全长为1 426bp,包括1个1 185bp的开放阅读框。该基因含有5个N-糖基化位点、5个豆蔻酰化位点、9个酪氨酸蛋白Ⅱ激酶磷酸化位点、1个酪氨酸蛋白激酶位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、1个蛋白磷酸激酶C磷酸化位点。SDS-PAGE分析及Western-blot分析表明,表达出的重组蛋白的分子质量约为71ku,且以与兔抗长角血蜱阳性血清反应,免疫原性良好。结果表明,MESK基因可以作为一种重要的分子标记参与蜱分类的研究,在作为候选抗蜱疫苗的研究中具有重要的开发价值。

关键词：长角血蜱 MESK基因生物信息学克隆真核表达

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RP-HPLC法测定狗血浆中硝唑尼特代谢产物的浓度

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安徽农业科学 2006年第14期34卷 3365-3366页

作者：刘元元张丽芳薛飞群邹思湘南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232

建立了检测狗血浆中硝唑尼特主要代谢物替唑尼特浓度的高效液相色谱法,并用于药代动力学研究。该法采用Scienhome Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol/L磷酸盐缓冲液(pH值为2.5()505∶0)为流动相,流速为1.0 m... 详细信息

建立了检测狗血浆中硝唑尼特主要代谢物替唑尼特浓度的高效液相色谱法,并用于药代动力学研究。该法采用Scienhome Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol/L磷酸盐缓冲液(pH值为2.5()505∶0)为流动相,流速为1.0 ml/min;紫外检测波长为360 nm;柱箱温度为30℃;进样量为30 lμ。结果表明:在0.1～12.5μg/ml的浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数为0.999 6(n=5;)最低检测浓度为0.02μg/ml;日内RSD<4.9%(n=6);日间RSD<5.7%(n=6);回收率为99.63%～112.7%。该法具有快速、简便、灵敏的特点,适用于硝唑尼特的药代动力学研究。

关键词：硝唑尼特替唑尼特狗血浆反相高效液相色谱法

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长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 551-556页

作者：罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达... 详细信息

根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达纯化后,进行Western-blot试验鉴定其生物学活性。结果,长角血蜱4D8基因的氨基酸序列与青海血蜱、肩突硬蜱的同源性分别为90%、81%。表达的重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白。Western-blot试验证明,该重组蛋白能很好地识别兔抗长角血蜱全蜱阳性血清。结果表明,4D8基因作为一种重要的分子标记基因在蜱的流行病学调查方面有着重要的价值,同时作为潜在的候选抗原基因在疫苗的研究方面也有重要意义。

关键词：长角血蜱 4D8基因克隆原核表达

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长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建与分析

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中国兽医科学 2009年第8期39卷 659-664页

作者：刘建刚刘光远田占成谢俊仁龚真莉张丽艳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为构建长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,获得长角血蜱雄性成蜱在半饱血状态下的特异表达基因,用抑制消减杂交方法构建以pGEM-T Easy为载体的长角血蜱半饱血雄蜱全蜱cDNA文库,测序并进行生物信息学分析。以新合成的长角血蜱饥饿和半饱... 详细信息

为构建长角血蜱雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,获得长角血蜱雄性成蜱在半饱血状态下的特异表达基因,用抑制消减杂交方法构建以pGEM-T Easy为载体的长角血蜱半饱血雄蜱全蜱cDNA文库,测序并进行生物信息学分析。以新合成的长角血蜱饥饿和半饱血雄蜱cDNA第一链为模板,用RT-PCR方法对从文库中挑选的5个表达序列标签(EST)进行鉴定。初步获得18个EST,BlastX分析显示,所得cDNA编码的功能性蛋白主要包括信号传导、组织形态形成、转录调节和糖类代谢等相关蛋白。RT-PCR鉴定结果显示,随机挑选的5个新EST中有3个在半饱血状态下差异表达。结果表明,成功地构建了长角血蜱雄性全蜱抑制消减杂交文库,获得了有潜在生物学功能的EST。

关键词：长角血蜱抑制消减杂交(SSH) cDNA文库

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猪繁殖与呼吸综合征病毒HN-HW株全基因组分子特征分析

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中国兽医科学 2011年第8期41卷 771-777页

作者：马米玲郝雪峰关贵全刘志杰李有全刘爱红中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

利用RT-PCR方法扩增得到猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)HN-HW分离株全长基因组的17个片段。拼接后发现该毒株基因组全长为15 334nt(包括poly A尾巴),与国内外14株美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于85.3%～99.4%之间,而与欧洲型PRRS... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增得到猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)HN-HW分离株全长基因组的17个片段。拼接后发现该毒株基因组全长为15 334nt(包括poly A尾巴),与国内外14株美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于85.3%～99.4%之间,而与欧洲型PRRSV Lelystad Virus(M96262)和SD01-08(DQ489331)分离株全序列相似性仅为59.7%和59.9%。序列分析表明,该毒株包括189nt的5′UTR,14 981nt的蛋白编码区和150nt的3′UTR及14nt的poly(A)尾巴。同美洲标准株ATCC VR-2332相比,Nsp2存在30个氨基酸的缺失。本研究结果补充了PRRSV毒株的基因组信息数据,为深入研究该毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 HN-HW株全基因组特征

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中药指纹图谱的检测方法

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广东药学 2004年第6期14卷 10-12页

作者：张丽芳薛飞群中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部寄生虫病学重点开放实验室上海200232

随着中药分析检测技术的不断发展 ,中药指纹图谱技术已成为中药质量控制的重要手段之一 ,也是中药现代化关键问题之一。本文简述了各种中药指纹图谱检测方法及特点。

关键词：中药指纹图谱检测方法色谱法光谱法

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