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豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)的多抗制备、组织分布及活性研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第5期38卷 595-601页

作者：王莉杰王立群刘婷丽张少华刘光学李艳萍梁盼红骆学农中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

目的研究豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(Cpserpin)的组织分布及其对丝氨酸蛋白酶的抑制效果。方法利用原核表达的重组Cpserpin (rCpserpin)免疫家兔,采用间接ELISA检测免疫后血清的效价,取免疫兔血清,制备抗体并纯化后,采用Western blot... 详细信息

目的研究豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(Cpserpin)的组织分布及其对丝氨酸蛋白酶的抑制效果。方法利用原核表达的重组Cpserpin (rCpserpin)免疫家兔,采用间接ELISA检测免疫后血清的效价,取免疫兔血清,制备抗体并纯化后,采用Western blotting对多克隆抗体进行特异性分析,通过免疫组化试验分别观察rCpserpin在豆状带绦虫成虫和幼虫中的组织分布。构建重组质粒pPIC9K-Cpserpin,线性化后转化至毕赤酵母KM71感受态细胞,用G418筛选的高拷贝菌株进行诱导表达并纯化rCpserpin,采用发色底物法检测不同浓度(6、9、 18、 21μg/ml) rCpserpin对0.5μg/mlα-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶等3种丝氨酸蛋白酶活性的抑制效果。结果间接ELISA检测结果显示,免疫血清多抗IgG抗体的效价达1∶51 200。Western blotting分析结果显示,纯化后的多克隆抗体可与rCpserpin和兔豆状囊尾蚴虫体可溶性抗原产生特异性反应。免疫组化试验结果显示,Cpserpin在囊尾蚴阶段表达量很低,但在成节和孕节中高度表达,广泛分布于虫体体壁和虫卵中。酵母表达的rCpserpin随浓度增加对α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶的抑制效果分别增强,在21μg/ml浓度时,对3种丝氨酸蛋白酶的抑制率最高,分别为(50.5±2.5)%、(71.5±1.5)%和(77.4±1.5)%(均P <0.05)。结论 rCpserpin多克隆抗体具有特异性,在豆状囊尾蚴成节和孕节中高表达,且其对α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶有较强的抑制作用。

关键词：豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂组织分布酶活性

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液质联用法测定血浆中罗红霉素的内标法与外标法的比较

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分析试验室 2009年第B12期28卷 66-69页

作者：张丽芳薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫病学重点实验室、中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留检测重点开放实验室上海200241

建立一种准确可靠的测定血浆中罗红霉素的液质联用方法。通过比较两种定量方法(内标法和外标法)的校正曲线的线性、方法的准确度和精密度等参数最终确定选用内标法更能获得可靠的测定结果。

关键词：罗红霉素液质联用法内标外标校正曲线

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日本血吸虫童虫裂解物对东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的筛选及阳性克隆分析

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生物工程学报 2008年第5期24卷 733-739页

作者：贾人初孙毅刘金明傅志强苑纯秀石耀军陆珂孙焕李浩金亚美林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 上海师范大学生命与环境科学学院上海200234

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,... 详细信息

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,获得了19条有效EST序列。其中13个条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,6个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。将19个EST序列的阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中4号(GenBank Accession No.:EW968294)、13号(GenBank Accession No.:EW968303)、14号(GenBank Accession No.:EW968304)、15号(GenBank Accession No.:EW968305)、18号(GenBank Accession No.:EW968308)克隆均诱导了显著的杀虫效果。综合生物信息学分析结果及体外杀伤试验结果,编码CASP8和FADD类似性细胞程序性死亡调节蛋白、α-2-HS-糖蛋白、M4蛋白、具有R3H结构域的一种mRNA结合蛋白以及三种未知蛋白的编码基因(14、15、18号克隆)可能是东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因。为进一步研究东方田鼠抗血吸虫机理奠定了基础。

关键词：日本血吸虫东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库抗性基因

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阳性水牛、黄牛IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

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中国动物传染病学报 2016年第2期24卷 62-67页

作者：冯金涛韩愉袁炜张欣许瑞李浩陆珂金亚美林矫矫程国锋刘金明中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,从感染日本血吸虫的水牛、黄牛血清中纯化IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44日龄)噬菌体展示c DNA文库。经每种动物IgG三轮(总计六轮)筛选后,随机挑取53个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生... 详细信息

为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,从感染日本血吸虫的水牛、黄牛血清中纯化IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44日龄)噬菌体展示c DNA文库。经每种动物IgG三轮(总计六轮)筛选后,随机挑取53个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析。获得了9个EST序列,其中7个EST序列与已知基因或表达序列标签同源,2个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,以噬菌体展示载体的10B衣壳蛋白开放阅读框(open reading frame,ORF)为依据,对上述7个与Gen Bank数据库资料同源的EST进行对码分析,结果 7个EST序列能和噬菌体展示载体阅读框对码,为有效展示序列。其中3个EST具有较高的重复度,在51个有效克隆中,25个为HSP70 homolog基因,15个为Keratin9基因有重复,6个为Ornithine--oxo-acid transaminase基因。研究结果显示,HSP70 homolog基因、Keratin9基因和Ornithine--oxo-acid transaminase基因作为诊断家畜血吸虫病候选抗原基因,值得进一步开展克隆、表达和诊断效果评估方面的研究。

关键词：日本血吸虫水牛黄牛筛选噬菌体展示c DNA文库

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东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫噬菌体展示抗原的免疫预防效果

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中国血吸虫病防治杂志 2010年第5期22卷 431-436页

作者：王素娟刘金明邢荣鹤李晔郭凡吉王艳石耀军陆珂林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的寻找东方田鼠抗日本血吸虫抗性靶基因。方法选取利用东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示文库获得的4个阳性噬菌体克隆免疫小鼠,评估观察其对小鼠日本血吸虫病的免疫预防效果。结果与噬菌体对照组、佐剂对照组和PBS对... 详细信息

目的寻找东方田鼠抗日本血吸虫抗性靶基因。方法选取利用东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示文库获得的4个阳性噬菌体克隆免疫小鼠,评估观察其对小鼠日本血吸虫病的免疫预防效果。结果与噬菌体对照组、佐剂对照组和PBS对照组相比,1号克隆免疫组分别获得了28.23%、31.12%、29.86%的减虫率和51.73%、48.02%、55.58%的肝脏减卵率;4号克隆免疫组分别获得了24.28%、27.32%、26.00%的减虫率和45.52%、41.13%、49.86%的肝脏减卵率。结论 1号克隆展示的SJCHGC06713蛋白以及4号克隆展示的SJCHGC068068蛋白作为抗血吸虫疫苗值得进一步研究。

关键词：日本血吸虫噬菌体展示抗原免疫东方田鼠

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柔嫩艾美耳球虫两种表面抗原基因的原核表达与鉴定

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动物医学进展 2017年第7期38卷 17-22页

作者：陈会亚费陈忠杨帆帆王霄旸薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室/农业部动物寄生虫病学重点开放实验室上海200241

为进一步研究柔嫩艾美耳球虫表面抗原蛋白,应用RT-PCR从柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子总RNA扩增表面抗原基因SAG19(Q70CD0)和SAGfm(U6L233),与pGEM-T easy载体连接,扩增目的片段后分别双酶切扩增产物与pET-28a(+),连接转化至BL21后,诱导表... 详细信息

为进一步研究柔嫩艾美耳球虫表面抗原蛋白,应用RT-PCR从柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子总RNA扩增表面抗原基因SAG19(Q70CD0)和SAGfm(U6L233),与pGEM-T easy载体连接,扩增目的片段后分别双酶切扩增产物与pET-28a(+),连接转化至BL21后,诱导表达,分别获得两种重组蛋白。SDSPAGE结果表明,两种重组蛋白的分子质量均为32ku,为包涵体蛋白形式。分别以感染柔嫩艾美耳球虫的鸡血清和重组蛋白免疫新西兰大白兔获得的多克隆抗体作为一抗,经Western blot分析,结果表明重组蛋白具有良好的免疫原性和抗原性。通过对这两种表面抗原基因的研究,为基因工程疫苗的研究提供一定的理论依据。

关键词：柔嫩艾美耳球虫表面抗原原核表达

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噬菌体展示技术筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白分子受体

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第3期23卷 279-284页

作者：何金桃石艳丽刘萍萍刘金明石耀军林矫矫金亚美中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 东北农业大学动物医学学院

目的筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用分子。方法利用噬菌体展示技术,以融合表达的抱雌沟蛋白为靶标,采用亲和淘洗方法筛选日本血吸虫44d成虫噬菌体展示cDNA文库。结果得到70条有效表达序列标签,对其进行聚类分析、同源性搜索与功能预... 详细信息

目的筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用分子。方法利用噬菌体展示技术,以融合表达的抱雌沟蛋白为靶标,采用亲和淘洗方法筛选日本血吸虫44d成虫噬菌体展示cDNA文库。结果得到70条有效表达序列标签,对其进行聚类分析、同源性搜索与功能预测等生物信息学分析,获得5个与血吸虫抱雌沟蛋白有相互作用的蛋白或多肽。结论采用筛选噬菌体展示文库的方法成功获得抱雌沟蛋白相互作用分子。

关键词：日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选噬菌体展示文库

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寄生性蠕虫组织蛋白酶F研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第5期31卷 406-409页

作者：曲自刚付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所.家畜疫病病原生物学国家重点实验室.农业部兽医公共卫生重点开放实验室.甘肃省动物寄生虫病重点实验室.兰州730046

组织蛋白酶F(cathepsin F)是半胱氨酸蛋白酶家族木瓜蛋白酶亚家族的重要成员。寄生性蠕虫组织蛋白酶F可水解半胱氨酸蛋白酶特异性底物,降解血红蛋白等宿主蛋白作为营养物质,参与虫体入侵,且具有免疫反应性,可作为寄生虫病免疫诊断、疫... 详细信息

组织蛋白酶F(cathepsin F)是半胱氨酸蛋白酶家族木瓜蛋白酶亚家族的重要成员。寄生性蠕虫组织蛋白酶F可水解半胱氨酸蛋白酶特异性底物,降解血红蛋白等宿主蛋白作为营养物质,参与虫体入侵,且具有免疫反应性,可作为寄生虫病免疫诊断、疫苗研制和抗寄生虫药物筛选的潜在靶点,对寄生虫病防治具有重要意义。本文综述了组织蛋白酶F的结构特征、作用机制及寄生性蠕虫组织蛋白酶F的研究进展。

关键词：寄生性蠕虫组织蛋白酶F 酶活性免疫反应性

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日本血吸虫中国大陆株SjPP基因及其克隆、表达和应用

日本血吸虫中国大陆株SjPP基因及其克隆、表达和应用

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作者：林矫矫姚利晓傅志强刘金明朱传刚冯新港苑纯秀蔡幼民 200232上海市徐汇区石龙路345弄3号

本发明涉及日本血吸虫中国大陆株SjPP基因的基因序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的日本血吸虫中国大陆株SjPP基因具有序列1所示的核苷酸序列和相应的序列2的氨基酸序列。本发明应用实验室繁殖的洞庭湖种群东方田鼠阳性血清和酶...

标准号: CN1563382

本发明涉及日本血吸虫中国大陆株SjPP基因的基因序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的日本血吸虫中国大陆株SjPP基因具有序列1所示的核苷酸序列和相应的序列2的氨基酸序列。本发明应用实验室繁殖的洞庭湖种群东方田鼠阳性血清和酶联葡球菌A蛋白免疫筛选日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库,经过初筛和3轮复筛获得5个阳性克隆。应用5′RACE技术对其中一克隆的cDNA片段进行5′端延伸扩增,并利用blast进行基因序列的同源性分析,结果表明该基因为一血吸虫新基因。本发明还公开了SjPP在大肠杆菌中的表达方法。本发明SjPP基因可用于制备防治日本血吸虫病重组蛋白疫苗和DNA疫苗。

关键词：

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多房棘球蚴感染与宿主相互作用的免疫学机制研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 401-405页

作者：娄忠子李宏民闫鸿斌倪兴维贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

通过感染过程中宿主的固有免疫和获得性免疫的作用,多房棘球蚴可调节一系列虫体与宿主的相互作用效应,这些效应有助于虫体在宿主肝脏内的增殖和成熟,从而完成其生活史;对中间宿主来说,则可限制寄生所导致的病理变化的发展。本文主要针... 详细信息

通过感染过程中宿主的固有免疫和获得性免疫的作用,多房棘球蚴可调节一系列虫体与宿主的相互作用效应,这些效应有助于虫体在宿主肝脏内的增殖和成熟,从而完成其生活史;对中间宿主来说,则可限制寄生所导致的病理变化的发展。本文主要针对多房棘球蚴免疫相关分子在提高寄生虫生存能力等方面与宿主间的免疫应答研究进行综述。

关键词：多房棘球蚴免疫相关分子宿主-虫体相互作用

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