检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2023年第12期39卷 4784-4795页

作者：王凌云郝荣增杨洋李亚军卢炳州毛玉涵张越龚真莉刘艳红齐萌茹毅郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300

为利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovarian,CHO)细胞表达系统制备重组猪干扰素-γ(recombinant porcine interferon gamma,rPoIFN-γ),并分析其体外抗病毒活性,本研究首先构建rPoIFN-γ真核表达质粒pc DNA3.1-PoIFN-γ,转染悬浮培养的CHO细胞,进行上清分泌表达,利用亲和层析纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;通过CCK-8实验分析rPoIFN-γ对细胞的毒性,用VSV/PK-15系统检测其抗病毒活性效价;最后分析rPoIFN-γ对塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的抗病毒活性及其对细胞内干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)和细胞因子的诱导作用。结果显示,本研究利用CHO悬浮细胞表达系统成功制备了纯化的rPoIFN-γ,该rPoIFN-γ对细胞无毒性,VSV/PK-15系统检测其活性效价为5.59×10^(7) U/mg;此外,rPoIFN-γ可诱导细胞内多种ISGs和细胞因子的表达,并显著抑制SVA的复制。总之,本研究成功利用CHO表达系统制备了高活性的rPoIFN-γ,并在体外完成其对SVA的抗病毒作用分析,为rPoIFN-γ的功能及抗病毒制剂的研究提供了实验材料和基础。

关键词：猪干扰素-γ 塞内卡病毒A 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞蛋白表达与纯化抗病毒活性

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一株牛口咽液分离口蹄疫病毒的特性分析

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微生物学报 2025年

作者：蔡梦婷袁红王利豪杨竞纯王涛包慧芳杨宇轩孙普李坤黄书伦郭海洋李平花卢曾军何继军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室 WOAH/国家口蹄疫参考实验室华中农业大学动物医学院甘肃省病原生物学基础学科研究中心

【目的】旨在分离、鉴定一株牛源口咽液中的口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus， FMDV)，分析其抗原蛋白氨基酸变异及增殖特性。【方法】采用RT-PCR及基因测序技术鉴定FMDV阳性牛口咽液样本，通过细胞接种从阳性样本中分离病毒... 详细信息

【目的】旨在分离、鉴定一株牛源口咽液中的口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus， FMDV)，分析其抗原蛋白氨基酸变异及增殖特性。【方法】采用RT-PCR及基因测序技术鉴定FMDV阳性牛口咽液样本，通过细胞接种从阳性样本中分离病毒，并利用间接免疫荧光法对分离病毒进行鉴定。通过PCR分段扩增及序列测定获得分离FMDV的全基因组，进一步通过序列比对分析分离FMDV的抗原蛋白氨基酸变异，通过蚀斑形成试验和一步生长曲线评价分离FMDV的增殖特性。【结果】成功从牛口咽液中分离、鉴定出一株FMDV，命名为O/FMDV/OP/2022/B。该病毒属于O型Ind2001谱系，其抗原蛋白VP1、VP2和VP3的氨基酸残基发生变异。在BHK-21细胞上，O/FMDV/OP/2022/B毒株形成的蚀斑显著小于疫苗毒株O/FMDV/HN/93的蚀斑，且其一步生长曲线明显低于O/FMDV/HN/93。【结论】本研究从牛口咽液中分离出一株FMDV，发现其抗原蛋白氨基酸发生变异，且增殖能力显著低于疫苗毒株O/FMDV/HN/93。该研究有助于从病毒学角度深入理解FMDV持续感染牛口咽组织的机制，并为口蹄疫的防控提供参考依据。

关键词：口蹄疫病毒持续性感染氨基酸突变病毒增殖

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口蹄疫病毒Asia1型猪源中和抗体的筛选与抗原表位鉴定

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畜牧兽医学报 2024年第11期55卷 5211-5221页

作者：董开恒黄书伦李凤娟李坤刘果张强包慧芳李洪炫卢曾军张小丽甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院国家口蹄疫参考实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)仍然在我国周边国家存在,对我国畜牧业造成长期威胁。本研究旨在利用单个B细胞抗体技术研制Asia1型FMDV的中和性单克隆抗体,以此为工具,鉴定Asia1型FMDV的保护性抗原位点。以FMDV Asia1/JS/05为诱饵抗原,通过流... 详细信息

Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)仍然在我国周边国家存在,对我国畜牧业造成长期威胁。本研究旨在利用单个B细胞抗体技术研制Asia1型FMDV的中和性单克隆抗体,以此为工具,鉴定Asia1型FMDV的保护性抗原位点。以FMDV Asia1/JS/05为诱饵抗原,通过流式细胞术分选免疫猪PBMCs中的抗原特异性B细胞,通过巢式PCR扩增单个B细胞IgG抗体重链与轻链可变区基因序列,分别构建IgG抗体重链与轻链表达质粒,将其共转染CHO-S细胞进行抗体表达;通过间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)、病毒中和试验(VNT)验证抗体反应性和中和活性,利用免疫印迹、中和抗体逃逸突变株筛选鉴定中和抗体所识别的抗原表位类型和抗原表位关键氨基酸。结果显示:获得了5株反应性良好的Asia1型FMDV特异性抗体,其中PD3和PD7为中和抗体,两株中和抗体识别相同表位,关键氨基酸为VP2蛋白72位残基(D)。本研究首次获得Asia1型FMDV特异性猪源中和抗体,鉴定VP272D是中和表位的关键氨基酸,进一步丰富了Asia1型FMDV抗原位点信息,为FMDV Asia1型分子疫苗和新诊断检测技术研究的奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 Asia1型猪源单克隆抗体抗原表位

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宿主蛋白HERC4影响口蹄疫病毒复制的作用研究

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中国兽医科学 2025年第4期55卷 435-440页

作者：郑东东冯涛郝荣增杨彪晏子龙齐晓兰郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白... 详细信息

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白表达质粒,制备了HERC4基因过表达细胞,随后在HERC4基因敲除细胞和过表达细胞中,分别利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量和病毒滴度测定方法检测了HERC4蛋白对FMDV复制的影响,结果表明,HERC4蛋白对FMDV复制有影响,敲除可以抑制病毒复制,过表达可以促进病毒复制。该研究结果为后续开展HERC4蛋白调控FMDV复制机制研究奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒宿主蛋白HERC4 基因敲除基因过表达

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LULL1基因敲除或过表达PK-15细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响

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中国兽医科学 2025年

作者：王一卓范许许朱兆宇裴丹诗何路李熙忠任青峰郑海学朱紫祥李伟伟蒋大伟河南农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃农业大学生命科学技术学院

旨在探究宿主因子LULL1对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响，为阐明病毒-宿主相互作用机制提供新的见解。首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了LULL1基因敲除细胞系PK-15-LULL1-KO，之后用CCK8试剂盒检测细胞活力，发现LULL1敲除对细胞... 详细信息

旨在探究宿主因子LULL1对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响，为阐明病毒-宿主相互作用机制提供新的见解。首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了LULL1基因敲除细胞系PK-15-LULL1-KO，之后用CCK8试剂盒检测细胞活力，发现LULL1敲除对细胞活力无明显影响.为比较PK-15-LULL1-KO与野生型PK-15细胞对FMDV复制的影响，通过实时荧光定量PCR检测FMDV mRNA的转录水平，通过Western-blot检测FMDV非结构蛋白2C的表达，通过TCID50技术检测上清中病毒滴度变化，结果表明敲除LULL1基因能显著抑制FMDV的复制。为进一步探究LULL1的表型功能，利用慢病毒包装系统构建了LULL1基因过表达PK-15细胞系，与野生型PK-15细胞相比，LULL1过表达能显著促进FMDV的复制。本研究成功构建了LULL1基因敲除和过表达细胞系，将为进一步阐明LULL1促进FMDV复制及调控FMDV复制机制提供理论依据。

关键词：口蹄疫病毒 LULL1 细胞系非结构蛋白2C

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非洲猪瘟病毒及其免疫调控分子机制

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中国兽医杂志 2023年第5期59卷 1-7页

作者：张坤鹏杨发誉张丹阳郑海学朱紫祥中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室口蹄疫国家参考实验室甘肃兰州730046 兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730000

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种以高热和出血为特征的急性传染病,世界动物卫生组织(WOAH)将其列为法定报告动物疾病,我国也将其列为一类动物疫病。由于ASFV的环境稳定性以及能借助中间宿主软蜱和不易感宿主野猪进行传... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种以高热和出血为特征的急性传染病,世界动物卫生组织(WOAH)将其列为法定报告动物疾病,我国也将其列为一类动物疫病。由于ASFV的环境稳定性以及能借助中间宿主软蜱和不易感宿主野猪进行传播的能力,使其防控具有一定难度。另外,由于缺乏对ASFV庞大的基因组和对应的编码蛋白的了解,其免疫学和疫苗学相关研究也具有一定的挑战。在缺乏具有稳定保护效力的安全疫苗情况下,ASF防控仍以扑杀和生物安全措施为主,这使得在应对ASF的过程中消耗了大量的人力、物力和财力。虽然我国2018年首次暴发ASF疫情后在较短的时间内即控制住了疫情进一步传播,但目前ASF依旧威胁着包括我国在内的全世界养猪行业的发展。本文对ASF的疾病特征、病原学特征和疫苗研发,以及ASFV所引起的天然免疫反应、适应性免疫反应等方面的研究进展进行概述,以期为ASFV的免疫学相关研究和ASF的疫苗研发提供一定的启示。

关键词：非洲猪瘟病毒天然免疫炎症反应细胞凋亡细胞自噬非洲猪瘟疫苗

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5'UTR缺失重组塞内卡病毒的构建与生物学特性分析

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农业生物技术学报 2025年

作者：张岩杨帆曹伟军杜晓莉郑海学包世俊甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心西北民族大学生命科学与工程学院

塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)是属于塞内卡病毒属的小RNA病毒。感染该病毒后可引发原发性猪(Sus scrofa)的水疱病，在临床上很难与口蹄疫、猪水泡病和水疱性口炎区分。本研究成功从临床中分离鉴定了1株SVA变异毒株，发现其5'UT... 详细信息

塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)是属于塞内卡病毒属的小RNA病毒。感染该病毒后可引发原发性猪(Sus scrofa)的水疱病，在临床上很难与口蹄疫、猪水泡病和水疱性口炎区分。本研究成功从临床中分离鉴定了1株SVA变异毒株，发现其5'UTR存在13个核苷酸(nucleotide,nt)缺失。为了研究该缺失对SVA生物学特性的影响，本研究利用反向遗传技术，以SVA CH/FJ/2017毒株的全长cDNA感染性克隆为基础，对其基因组5'UTR序列进行定向缺失，将重组质粒转染BHK-21细胞，拯救出1株5'UTR基因缺失的塞内卡病毒rSVA-5UTRM，利用间接免疫荧光试验和Western blot对重组毒株进行鉴定；并将重组病毒在BHK-21细胞上连续传代，进行遗传稳定性分析；然后通过蚀斑试验和病毒生长曲线比较重组病毒与亲本毒株在BHK-21细胞上的增殖特性。结果显示，重组病毒能够与SVA抗体及SVA VP2抗体发生特异性反应，表明重组毒株拯救成功；遗传稳定性分析结果显示，5'UTR基因缺失的重组病毒传代至20代，缺失基因仍稳定存在，表明重组毒株具有良好的遗传稳定性；生物学特性分析结果表明，重组毒株与亲本毒株SVA CH/FJ/2017在BHK-21细胞上的复制特性相近，且具有较高的病毒滴度，说明5'UTR中13 nt的核苷酸缺失并不影响病毒在BHK-21细胞上的复制。本研究成功拯救出5'UTR缺失的重组SVA毒株，研究了缺失区段的功能，为阐明SVA非编码功能提供了新的科学数据。

关键词：塞内卡病毒 5'UTR 缺失重组病毒生物学特性

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CISD2敲除细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响

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中国兽医科学 2025年

作者：陈治彤张伟蔡建涛吕岳芹刘泓屹曹伟军顾有方郑海学杨帆安徽科技学院动物科学学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在初步探究细胞铁硫蛋白2（CISD2）对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。运用CRISPR/Cas9基因编辑方法成功构建CISD2基因敲除的猪肾细胞系（PK-15），通过测序与Western-blot鉴定CISD2基因的敲除，采用间接免疫荧光试验、Western-b... 详细信息

本研究旨在初步探究细胞铁硫蛋白2（CISD2）对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。运用CRISPR/Cas9基因编辑方法成功构建CISD2基因敲除的猪肾细胞系（PK-15），通过测序与Western-blot鉴定CISD2基因的敲除，采用间接免疫荧光试验、Western-blot、RT-qPCR等方法比较FMDV在CISD2基因敲除细胞系和野生型细胞中的复制差异，统计分析CISD2对FMDV复制的影响。结果显示，测序及Western-blot证实CISD2基因敲除单克隆细胞系构建成功，间接免疫荧光试验、Western-blot、RT-qPCR等方法均显示FMDV在CISD2基因敲除细胞中的复制水平显著高于野生型细胞。本研究成功利用CRISPR/Cas9系统构建了CISD2基因敲除细胞系，并发现在该细胞中能显著促进口蹄疫病毒复制。上述结果为进一步探究CISD2的功能及其在调控FMDV等病毒感染机制方面提供了材料和数据支撑。

关键词：口蹄疫病毒 CRISPR/Cas9 CISD2基因细胞系

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Tollip敲除猪肾细胞系的构建

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1810-1818页

作者：王家丽杨帆邵文华黄梦瑶曹伟军蒲秀瑛张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730000 兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

旨在探究Toll作用蛋白(toll-interacting protein, Tollip)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)增殖的影响,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tollip基因缺失的猪肾细胞系(porcine kidney cell line, PK-15),并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果,然后利用CCK-8试剂盒测定Tollip缺失后细胞活力变化,确认敲除细胞与野生细胞无显著差异,用FMDV感染敲除细胞后,采用Western blot、间接免疫荧光、实时荧光定量和病毒滴度测定等方法测定病毒在敲除细胞系中复制情况。结果显示:感染FMDV后,敲除细胞与野生细胞相比,显著促进了病毒的复制。综上,在PK-15细胞上,成功构建Tollip缺失细胞系,且试验表明Tollip的缺失有助于FMDV的复制。研究结果为后续Tollip功能研究及抗病毒机制研究提供理论依据。

关键词： CRISPR/Cas9 Tollip基因细胞系口蹄疫病毒

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RAB20基因敲除PK-15细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响

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中国兽医科学 2025年

作者：蔡建涛张伟陈治彤刘泓屹吕岳芹曹伟军冷非凡杨帆郑海学兰州理工大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建RAB20基因敲除的PK-15细胞系，为RAB20蛋白功能研究提供生物材料，同时初步探究RAB20蛋白对口蹄疫病毒（FMDV）增殖的影响。首先，根据RAB20基因序列设计合成2对sgRNA，分别构建于载体质粒pX... 详细信息

本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建RAB20基因敲除的PK-15细胞系，为RAB20蛋白功能研究提供生物材料，同时初步探究RAB20蛋白对口蹄疫病毒（FMDV）增殖的影响。首先，根据RAB20基因序列设计合成2对sgRNA，分别构建于载体质粒pX459中，将重组质粒转染PK-15细胞，用嘌呤霉素筛选，并经有限稀释法进行亚克隆。接着，对单克隆细胞测序及Western-blot以鉴定RAB20基因的敲除，并利用CCK-8测定RAB20敲除对细胞活力的影响。然后，用FMDV感染RAB20敲除细胞和野生型细胞，利用Western-blot、实时荧光定量PCR、间接免疫荧光试验和病毒滴度测定等方法比较FMDV在敲除细胞系与野生型细胞中的复制差异。结果显示：成功构建了RAB20基因敲除的PK-15细胞系，且与野生型细胞相比，FMDV在RAB20敲除细胞中的复制水平显著提升，表明RAB20对FMDV的复制具有抑制作用。该结果为进一步研究RAB20功能及其调控病毒复制的机制提供了细胞模型与数据支持。

关键词： CRISPR/Cas9 RAB20基因细胞系口蹄疫病毒

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