检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年

作者：刘泓屹张伟蔡建涛古涛鸣王良锋陈治彤曹伟军郑海学杨帆张桂红华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在探究TRIM7对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响，首先，针对猪源TRIM7基因外显子设计两条单向导RNA（single guide RNA，sgRNA），分别构建至载体PX459中，将成功构建的sgRNA重组质粒转染PK-15细胞，经嘌呤霉素筛选、有限稀释法... 详细信息

本研究旨在探究TRIM7对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响，首先，针对猪源TRIM7基因外显子设计两条单向导RNA（single guide RNA，sgRNA），分别构建至载体PX459中，将成功构建的sgRNA重组质粒转染PK-15细胞，经嘌呤霉素筛选、有限稀释法亚克隆挑取单克隆细胞，经测序及Western-blot 分析鉴定TRIM7基因的敲除情况，获得敲除TRIM7基因的PK-15细胞系。将TRIM7基因敲除细胞和对照细胞中分别感染FMDV，用Western-blot、RT-qPCR和TCID50测定等方法综合评价敲除TRIM7基因后对FMDV复制的影响。同时，在PK-15细胞上过表达TRIM7检测其对病毒复制的影响。结果显示，成功构建TRIM7基因敲除PK-15细胞系，且FMDV在TRIM7基因敲除细胞系中的复制水平均显著低于对照细胞，当过表达TRIM7时则会显著促进病毒的复制，表明TRIM7影响了FMDV 的复制。本研究为深入探索TRIM7的生物学功能及其调控病毒复制的分子机制奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 TRIM7基因细胞系过表达口蹄疫病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

CRISPR/Cas9介导的KLHL34基因敲除细胞系的建立及其应用

引用

中国兽医科学 2023年第7期53卷 851-857页

作者：冉乾东杨帆张伟曹伟军郑海学蔺国珍西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030 中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室、国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建KLHL34基因敲除的猪肾细胞系(PK-15),初步探究KLHL34对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,为开展KLHL34功能研究和KLHL34调控病毒复制的分子机制提供试验材料。设计2条针对猪KLHL34基因的单向导RNA(single gui... 详细信息

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建KLHL34基因敲除的猪肾细胞系(PK-15),初步探究KLHL34对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,为开展KLHL34功能研究和KLHL34调控病毒复制的分子机制提供试验材料。设计2条针对猪KLHL34基因的单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),分别构建至载体PX459中;将PX459-KLHL34-sgRNA重组质粒转染PK-15细胞,经嘌呤霉素加压筛选、有限稀释法亚克隆挑取单克隆细胞,测序及Western-blot分析鉴定KLHL34基因的敲除情况。用FMDV感染鉴定后的KLHL34基因敲除细胞,利用间接免疫荧光试验、Western-blot、RT-qPCR和TCID50方法综合评价敲除KLHL34基因后对FMDV复制的影响。结果显示,敲除细胞中KLHL34基因发生了碱基缺失突变且引起了目的基因的移码,同时,敲除细胞中均未检测到KLHL34蛋白表达,表明成功构建了KLHL34基因敲除的PK-15细胞系;测定比较了FMDV在KLHL34基因敲除细胞系与对照细胞中的mRNA转录水平、病毒蛋白表达水平及病毒滴度,表明KLHL34基因敲除后显著促进了FMDV的复制。综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9系统成功构建了敲除KLHL34基因的PK-15细胞系,首次证实KLHL34在抗FMDV复制过程中发挥着重要作用,为后续研究KLHL34调控FMDV复制的机制奠定了基础。

关键词： CRISPR/Cas9 KLHL34基因基因敲除口蹄疫病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪瘟与口蹄疫二联疫苗的制备及其免疫效果评价

引用

中国预防兽医学报 2025年第2期47卷 172-178页

作者：高洁袁红焦云娟李坤李平花杨宇轩黄书伦郭海洋邱酉飞包慧芳孙普李冬刘在新卢曾军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 WOAH/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

为研制猪瘟(CSF)与口蹄疫(FMD)二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白(r E2)的表达与纯化效果,采用western blot检测r... 详细信息

为研制猪瘟(CSF)与口蹄疫(FMD)二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白(r E2)的表达与纯化效果,采用western blot检测r E2与His-Tag单克隆抗体(MAb)的反应原性。结果显示,在约50 ku处出现目的蛋白条带,纯化后在约50 ku处出现单一条带。western blot结果显示在50 ku处出现特异性条带。表明,r E2获得了表达且纯化效果较好,反应原性较强。将纯化后的r E2与灭活的口蹄疫病毒(FMDV)O/Tibet/99株混合后经ISA 201佐剂乳化制备二联疫苗,将小鼠分为4组:CSFV E2+FMDV(20μg^(+)1μg)组、CSFV E2(20μg)组、FMDV(1μg)组及PBS阴性对照组。于第1 d和21 d分别将相应疫苗以肌肉注射方式免疫6周龄~8周龄的各组雌性BALB/c小鼠,首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d采血,利用ELISA检测各组小鼠血清中的抗体水平;利用流式细胞术检测免疫后42 d各组小鼠血液中CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞和CD19^(+)B淋巴细胞的占比;采用ELISA检测免疫后42 d各组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平。抗体检测结果显示,与PBS组相比,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠产生的针对两种病毒的抗体水平均显著和极显著升高(P<0.05、P<0.01、P<0.0001);E2+FMDV组与E2组和FMDV组小鼠血清中CSFV和FMDV的抗体水平均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术结果显示,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞及CD19^(+)B淋巴细胞的占比均显著和极显著高于PBS组(P<0.05、P<0.01、P<0.0001);E2+FMDV组与E2组小鼠上述指标均无显著差异;与FMDV组相比,E2+FMDV组小鼠CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞的占比极显著升高(P<0.01),而另外两个指标均无显著差异。ELISA检测结果显示,3个实验组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平均显著和极显著高于PBS组(P<0.05、P<0.01),E2+FMDV组与二者单独免疫组小鼠IFN-γ的分泌水平均无显著差异。上述结果表明,E2+FMDV二联疫苗对小鼠的免疫效果与单独免疫E2亚单位疫苗和FMDV灭活疫苗的免疫效果相当,CSFV E2蛋白与FMDV灭活病毒的联合免疫是可行的。综上,本研究首次制备的CSFV E2+FMDV二联苗可作为防控CSF和FMD的一种潜在候选疫苗,为这两种病毒二联甚至多联疫苗的研制奠定了实验基础。

关键词：猪瘟 E2蛋白口蹄疫二联疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

硫酸乙酰肝素生物合成及修饰过程中关键酶的功能研究进展

引用

动物医学进展 2025年第7期46卷 104-109页

作者：黄磊袁红宫晓华包慧芳李冬李平花孙普卢曾军刘在新白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所/农业农村部动物病原生物学重点实验室/动物疫病防控全国重点实验室/WOAH国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个高度硫酸化的糖醛酸和葡糖胺二糖重复单元组成的线性异构多糖。HS可作为细胞表面受体,与细胞因子和包括口蹄疫病毒(FMDV)在内的多种病毒粒子结合,发挥重要且广泛的生物学功能。功能性HS大分子的合成包括胞... 详细信息

硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个高度硫酸化的糖醛酸和葡糖胺二糖重复单元组成的线性异构多糖。HS可作为细胞表面受体,与细胞因子和包括口蹄疫病毒(FMDV)在内的多种病毒粒子结合,发挥重要且广泛的生物学功能。功能性HS大分子的合成包括胞内的生物合成过程以及胞外的合成后修饰过程,涉及多种酶的参与。通过概述HS的多糖聚合以及蛋白修饰,分析HS生物合成及修饰过程,总结参与其中的关键酶及功能,以期为HS的生物学功能研究和化学酶学合成提供理论参考。

关键词：硫酸乙酰肝素生物合成合成后修饰生物学功能

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

METTL3表达水平对口蹄疫病毒复制的影响

引用

中国兽医科学 2024年第8期54卷 1010-1018页

作者：张继燕李伟伟范许许曹雪静朱兆宇裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰张伟王川郑海学甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 河南农业大学动物医学院河南郑州450046 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的... 详细信息

利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的复制。为了进一步验证METTL3的表型功能,利用慢病毒包装系统构建METTL3稳定表达细胞系。用FMDV分别感染野生型和METTL3过表达BHK-21细胞,通过q PCR和TCID50试验测定FMDV在这2株细胞中的复制情况。结果显示,过量表达METTL3促进FMDV的复制。此外,激光共聚焦显微镜试验显示,FMDV感染BHK-21细胞后,METTL3从细胞核迁移至细胞质,其细胞定位的改变表明METTL3可能参与调控FMDV基因组的转录过程。本研究中成功构建了METTL3基因敲除和过表达的BHK-21细胞系,首次发现该分子正向调控FMDV的复制。上述实验结果为进一步开展METTL3在宿主细胞中调控FMDV复制的机制研究奠定了可靠的数据基础。

关键词： METTL3 m6A修饰口蹄疫病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

硫酸乙酰肝素的组成及其对病毒感染的影响

引用

中国兽医科学 2023年第12期53卷 1475-1479页

作者：黄磊袁红宫晓华包慧芳王利豪王涛高洁李平花孙普李冬陈应理刘在新卢曾军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所农业农村部动物病原生物学重点实验室WOAH/国家口蹄疫参考实验室动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个二糖重复单元组成的线性硫酸化异构多糖,广泛存在于哺乳动物细胞表面和细胞外基质中。HS大分子通过相互作用识别并结合呈正电荷特性的病毒粒子,增强其对宿主细胞的感染能力,因此HS可作为病毒感染靶细胞的... 详细信息

硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个二糖重复单元组成的线性硫酸化异构多糖,广泛存在于哺乳动物细胞表面和细胞外基质中。HS大分子通过相互作用识别并结合呈正电荷特性的病毒粒子,增强其对宿主细胞的感染能力,因此HS可作为病毒感染靶细胞的特异性受体。已有研究证实,HS参与口蹄疫病毒(FMDV)等多种病毒的吸附和入胞过程,在病毒感染中发挥重要作用。本文概述了HS的组成及其对病毒感染的影响,以期为HS的研究提供参考。

关键词：硫酸乙酰肝素受体病毒感染

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：