本研究旨在利用铁蛋白制备携带非洲猪瘟病毒p30蛋白的纳米颗粒抗原,并对其免疫原性进行评价,为非洲猪瘟纳米疫苗研究提供实验基础。首先,将编码p30蛋白和SpyTag标签的基因序列融合后插入pCold-I载体,得到pCold-p30质粒。将编码SpyCatcher与铁蛋白的基因序列融合后插入pET-28a(+)载体得到pET-F-np质粒,并分别在大肠杆菌中诱导表达。然后,将亲和层析纯化后的p30蛋白与铁蛋白在体外偶联结合,用分子筛纯化后得到偶联p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒F-p30,利用粒径仪、透射电镜观察形态结构。将F-p30纳米颗粒蛋白免疫小鼠,评估其体液和细胞免疫应答。结果表明,本研究成功制备出偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒,颗粒结构约20nm。F-p30在体外能被小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)高效摄取,与p30蛋白相比,F-p30纳米颗粒免疫小鼠诱导产生更高水平的特异性抗体和细胞因子,更有利于刺激淋巴结滤泡辅助T细胞(follicular helper T cell,T_(FH))、生发中心B细胞(germinal center B cell,GCB)和脾脏CD4^(+)及CD8^(+)T淋巴细胞的增殖。综上,本研究成功制备了偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒,能显著增强p30蛋白的免疫原性,为非洲猪瘟疫苗的研究奠定了基础。
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