检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2023年第6期39卷 1660-1669页

作者：张国芮康棣王轩莹田占成高闪电关贵全常惠芸薛慧文殷宏独军政中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃农业大学动物医学院兰州730070 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

为了研究干扰素刺激基因1(Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1,IFIT1)在蓝舌病病毒1型(Bluetongue virus serotype 1,BTV1)感染复制过程中的作用,首先利用实时定量PCR检测到BTV1感染绵羊睾丸细胞后IFIT1基因的转录水平明显升高,利用RT-PCR方法扩增获得羊IFIT1基因,测序后进行生物信息学分析,将其克隆到质粒载体pcDNA3.1/(+)上,构建重组表达质粒pcDNA3.1-OV-IFIT1,将其转染BHK-21细胞,观察到IFIT1基因在细胞内的成功表达,然后利用BTV1感染质粒pcDNA3.1-OV-IFIT1转染的细胞,从病毒的mRNA转录、蛋白表达和病毒滴度的变化评价IFIT1对BTV1复制的影响。结果显示,IFIT1在细胞中的过表达可显著抑制BTV1复制,相反,敲低IFIT1的表达可促进BTV1的复制。本研究首次报道了干扰素刺激基因IFIT1在BTV1感染复制过程中的作用,这将有助于揭示BTV1和宿主细胞IFIT1的相互作用机制,同时也为抗病毒药物研发提供了理论指导。

关键词： IFIT1 蓝舌病病毒病毒复制抗病毒免疫

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CISD2敲除细胞系的构建及其对口蹄疫病毒复制的影响

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中国兽医科学 2025年

作者：陈治彤张伟蔡建涛吕岳芹刘泓屹曹伟军顾有方郑海学杨帆安徽科技学院动物科学学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在初步探究细胞铁硫蛋白2（CISD2）对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。运用CRISPR/Cas9基因编辑方法成功构建CISD2基因敲除的猪肾细胞系（PK-15），通过测序与Western-blot鉴定CISD2基因的敲除，采用间接免疫荧光试验、Western-b... 详细信息

本研究旨在初步探究细胞铁硫蛋白2（CISD2）对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。运用CRISPR/Cas9基因编辑方法成功构建CISD2基因敲除的猪肾细胞系（PK-15），通过测序与Western-blot鉴定CISD2基因的敲除，采用间接免疫荧光试验、Western-blot、RT-qPCR等方法比较FMDV在CISD2基因敲除细胞系和野生型细胞中的复制差异，统计分析CISD2对FMDV复制的影响。结果显示，测序及Western-blot证实CISD2基因敲除单克隆细胞系构建成功，间接免疫荧光试验、Western-blot、RT-qPCR等方法均显示FMDV在CISD2基因敲除细胞中的复制水平显著高于野生型细胞。本研究成功利用CRISPR/Cas9系统构建了CISD2基因敲除细胞系，并发现在该细胞中能显著促进口蹄疫病毒复制。上述结果为进一步探究CISD2的功能及其在调控FMDV等病毒感染机制方面提供了材料和数据支撑。

关键词：口蹄疫病毒 CRISPR/Cas9 CISD2基因细胞系

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流行性出血病病毒VP7蛋白的表达及其单克隆抗体制备

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中国兽医科学 2025年

作者：钟匀汝张雨宋昱庆户鑫兵田占成关贵全罗建勋艾军何俊峰殷宏独军政甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室昆明海关技术中心甘肃省病原生物学基础学科研究中心

流行性出血病是由流行性出血病病毒(EHDV)经库蠓叮咬传播感染牛、羊、鹿等反刍动物的非接触性传染病，EHDVVP7蛋白是该病诊断的靶标蛋白。本研究参照GenBank中已发表的基因序列经密码子优化后人工合成EHDVVP7基因，将该基因克隆至表达质... 详细信息

流行性出血病是由流行性出血病病毒(EHDV)经库蠓叮咬传播感染牛、羊、鹿等反刍动物的非接触性传染病，EHDVVP7蛋白是该病诊断的靶标蛋白。本研究参照GenBank中已发表的基因序列经密码子优化后人工合成EHDVVP7基因，将该基因克隆至表达质粒pET-28a，构建重组质粒pET-EHDV VP7，将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)，以IPTG诱导表达且优化表达条件，通过Ni-NTA亲和层析法对表达的VP7蛋白进行纯化并用不同浓度咪唑透析复性，用复性后的VP7蛋白免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备抗VP7蛋白单克隆抗体。通过间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹和细胞免疫荧光试验验证单克隆抗体的特异性。结果显示，利用大肠杆菌表达系统成功表达重组EHDVVP7蛋白，纯化后制备了2株稳定分泌针对EHDVVP7蛋白的单克隆抗体，分别命名为1D10和3C11，这2株单克隆抗体不仅能与大肠杆菌表达的重组EHDVVP7蛋白反应，而且也能与真核细胞表达的重组EHDVVP7蛋白结合，同时这2株单克隆抗体与重组蓝舌病毒VP7蛋白和重组非洲马瘟病毒VP7蛋白不发生反应。本研究成功表达和纯化出了重组EHDV VP7蛋白，制备了特异性抗VP7蛋白单克隆抗体，这为研究EHDV VP7 蛋白的结构功能以及诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：流行性出血病病毒 VP7蛋白蛋白表达与纯化单克隆抗体

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机械力转导在抗病毒免疫反应中的作用

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1253-1258页

作者：王常英张涛清郑海学伍国强秦晓东兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室甘肃兰州730046

细胞感受和传导机械力主要由LINC、Lamin A/C、Piezo1、TRPV4以及整合素等分子介导。越来越多的研究表明,机械力转导在免疫系统发育及免疫应答中发挥着重要的作用。在感染病原体以后,细胞免疫反应的激活、细胞因子的产生、代谢、增殖和... 详细信息

细胞感受和传导机械力主要由LINC、Lamin A/C、Piezo1、TRPV4以及整合素等分子介导。越来越多的研究表明,机械力转导在免疫系统发育及免疫应答中发挥着重要的作用。在感染病原体以后,细胞免疫反应的激活、细胞因子的产生、代谢、增殖和运输都受到机械力转导的调控。本文就机械力转导对免疫应答、炎症反应以及免疫细胞功能调控的影响进行了详细总结。

关键词： LINC Lamin A/C Piezo1 TRPV4 免疫应答

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分子伴侣TF促进塞内卡病毒VP2蛋白在大肠杆菌表达

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农业生物技术学报 2023年第9期31卷 1944-1955页

作者：杨锐茹毅郝荣增李亚军杨洋任蕊芳卢炳州毛玉涵张越郑海学张勇赵兴绪甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室中农威特生物科技股份有限公司

A型塞内卡病毒（Senecavirus A, SVA）是一种新近流行的小RNA病毒，严重危害着全球养猪业的健康发展。SVA病毒结构蛋白2（viral structural protein 2, VP2）在诱导机体免疫应答中发挥了重要的作用。为制备可溶性的SVA结构蛋白VP2，并... 详细信息

A型塞内卡病毒（Senecavirus A, SVA）是一种新近流行的小RNA病毒，严重危害着全球养猪业的健康发展。SVA病毒结构蛋白2（viral structural protein 2, VP2）在诱导机体免疫应答中发挥了重要的作用。为制备可溶性的SVA结构蛋白VP2，并系统分析其免疫原性，本研究首先以SVA/CH-FJ-2017毒株基因序列为基础，构建SVA-VP2蛋白重组表达质粒pET28a-SVA-VP2。然后将pET28a-SVA-VP2重组质粒与分子伴侣pTf16质粒共同转入大肠杆菌（Escherichia coli） BL21（DE3）感受态细胞，利用分子伴侣TF（trigger factor）在原核表达系统中促进蛋白可溶性表达的特性，诱导表达可溶性的SVA-VP2重组蛋白。纯化目标蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定后，免疫BALB/c小鼠（Mus musculus），通过间接ELISA检测血清抗体水平，病毒中和试验测定中和抗体滴度，流式细胞术检测分析脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群，以及脾脏淋巴细胞增殖及细胞因子产生的情况。结果表明，利用分子伴侣TF16成功制备了可溶性的VP2重组蛋白，并且VP2重组蛋白能够与SVA阳性血清发生特异性免疫反应，免疫组小鼠的血清抗体效价可达1∶32 000，中和抗体水平可达1∶128，免疫组小鼠脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比含量极显著高于对照组（P<0.001），干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）、白细胞介素-2（interleukin-2, IL-2）、IL-4和IL-10等细胞因子表达水平极显著高于对照组（P<0.001）。本研究成功利用分子伴侣TF共表达制备了可溶性的重组VP2蛋白，且重组VP2蛋白在体内、外试验中均具有良好的免疫原性，能够引发机体产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答，为SVA亚单位疫苗和诊断制剂的研制提供了实验材料和理论依据。

关键词： A型塞内卡病毒(SVA) 病毒结构蛋白2(VP2) 原核表达分子伴侣可溶性表达免疫原性

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绵羊肺炎支原体小鼠感染模型的建立

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1728-1737页

作者：杜改梅王月茅慧华雷卫强储岳峰刘茂军金陵科技学院动物科学与食品工程学院南京210038 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

旨在探索小鼠作为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)实验室感染模型的可行性,筛选建立Mo感染小鼠模型的最佳方法。将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、Mo感染组1、感染组2、感染组3和感染组4(n=12)。Mo感染组1小鼠分别滴鼻30μ... 详细信息

旨在探索小鼠作为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)实验室感染模型的可行性,筛选建立Mo感染小鼠模型的最佳方法。将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、Mo感染组1、感染组2、感染组3和感染组4(n=12)。Mo感染组1小鼠分别滴鼻30μL和腹腔注射25μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液各1次,Mo感染组2和3小鼠分别滴鼻2和3次30μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液,Mo感染组4小鼠喉头喷雾50μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液2次,对照组用正常培养基处理。分别于感染后第0、7和14天称量小鼠体重。感染后第14天处死所有小鼠,采集血液和肺组织。通过HE染色法进行肺组织病理学检查、剖检进行肺组织病理评分、qPCR方法检测肺组织中Mo的载荷量和ELISA检测血清Mo IgG水平,确定小鼠感染模型是否建立成功及最佳建立方法。Mo感染组2和组4中小鼠体重第14天时分别比对照组显著降低17.2%(P<0.05)和21.6%(P<0.05);感染第13天,感染组2和组4小鼠出现死亡;感染后第14天剖检,Mo感染组2和组4小鼠肺部有炎症,肺病变平均评分分别为3.5和3.3,均显著高于Mo感染组1(P<0.05)和组3(P<0.05),而对照组小鼠无病变;组织病理学检查发现,Mo感染组小鼠肺可见不同程度的间质性肺炎,肺泡腔内有炎细胞浸润;对照组小鼠肺组织结构正常、完整,肺泡内未见明显细胞浸润。小鼠肺组织中Mo DNA拷贝数在Mo感染组1和组3中分别为10^(2.56)和10^(3.21)拷贝·g^(-1);感染组2和组4分别为10^(3.84)和10^(3.77)拷贝·g^(-1),且显著高于Mo感染组1(P<0.05)和组3(P<0.05),对照组为阴性。小鼠血清Mo抗体OD_(450 nm)值在Mo感染组1、组2、组3和组4分别为0.63、1.05、0.81和0.99,均显著高于对照组(P<0.05),且组2和组4均显著高于1组(P<0.05)。本研究通过1×10^(8 )CCU·mL^(-1)的Mo NJ01株菌液滴鼻2次或喉头喷雾2次均可成功建立Mo感染小鼠模型。为绵羊肺炎支原体的致病机制及防治策略研究奠定基础。

关键词：绵羊肺炎支原体小鼠感染模型

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口蹄疫病毒非结构蛋白3D的研究进展

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中国兽医科学 2025年第2期55卷 247-254页

作者：翟凤格聂振宇张涵张钊裴晶晶郑海学河南农业大学动物医学院河南郑州450046 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种在偶蹄动物间感染与传播的急性、热性、高度传染性疾病,动物死亡率高,严重影响农业生产,造成巨大的经济损失。FMDV 3D^(pol)蛋白不仅在基因组复制中发挥至关重要的作用,还参与调节宿主细胞生... 详细信息

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种在偶蹄动物间感染与传播的急性、热性、高度传染性疾病,动物死亡率高,严重影响农业生产,造成巨大的经济损失。FMDV 3D^(pol)蛋白不仅在基因组复制中发挥至关重要的作用,还参与调节宿主细胞生物学过程,包括病毒复制复合体的组装和定位以及先天免疫反应。本文对FMDV 3D^(pol)与宿主的相互作用、抗病毒靶点研究以及病毒检测应用等内容进行了系统综述,旨在为疫病防控提供新思路。

关键词：口蹄疫病毒 3D^(pol) 宿主病毒相互作用药物靶点

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信鸽产酸克雷伯菌GS-BY-GG的分离鉴定

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中国人兽共患病学报 2024年第6期40卷 512-519页

作者：李韦李赟辉金有顺巴旭丽张淮瑜韩涛李兆才周继章中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 西北农林科技大学动物医学院杨凌712100 西安乡下人有限公司蓝田710500 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

目的分离并鉴定鸽源产酸克雷伯菌,探究其生物学特性及致病性。方法剖检甘肃某信鸽棚发病鸽,观察并采集病变组织,通过观察病菌形态、生化试验、16S rRNA PCR鉴定和序列分析实现对致病菌的分离鉴定,结合组织病理学观察、药敏试验和致病... 详细信息

目的分离并鉴定鸽源产酸克雷伯菌,探究其生物学特性及致病性。方法剖检甘肃某信鸽棚发病鸽,观察并采集病变组织,通过观察病菌形态、生化试验、16S rRNA PCR鉴定和序列分析实现对致病菌的分离鉴定,结合组织病理学观察、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行耐药性和致病性研究。结果病鸽肝、肺、心等多器官出血,肝脏发黄且质地脆,肺脏发生化脓;从病鸽中成功分离到一株革兰氏阴性、短杆状菌株,麦康凯琼脂培养基上为粉红色光滑、湿润、圆形菌落,靛基质试验阳性;16S rRNA扩增序列与MN330093.1同源性达100.00%,表明病鸽感染产酸克雷伯菌,并命名为GS-BY-GG;产酸克雷伯菌GS-BY-GG对青霉素、氨苄西林和呋喃唑酮等10种药物耐药,对氟苯尼考、美罗培南和庆大霉素等5种药物敏感;组织病理学观察可见病鸽多器官出血,肝脏细胞排列不规则、多处可见棕黄色色素沉积,气管黏膜上皮广泛细胞坏死和脱落、黏膜层可见大量炎性细胞浸润;接种SPF雏鸡显示分离菌具有很强的致病性。结论本研究成功分离了鸽源产酸克雷伯菌GS-BY-GG,研究结果为产酸克雷伯的临床诊断和防治提供数据支撑。

关键词：产酸克雷伯菌信鸽分离鉴定耐药情况组织病理学

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羊肠道蒙氏肠球菌和屎肠球菌的分离鉴定及益生特性分析

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微生物学通报 2024年第7期51卷 2546-2562页

作者：褚鑫龙马轲高鹏程付磊李学瑞冉维储岳峰蒋建军石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 中国农业科学院兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

【背景】随着病原菌对抗生素耐药性的不断增加,在畜牧业养殖中研发安全可靠的抗生素替代品变得越来越重要。益生菌以其无毒、无残留、低成本且能有效补充肠道有益微生物等诸多优点,成为一种理想的抗生素替代品。【目的】从绵羊肠道共生... 详细信息

【背景】随着病原菌对抗生素耐药性的不断增加,在畜牧业养殖中研发安全可靠的抗生素替代品变得越来越重要。益生菌以其无毒、无残留、低成本且能有效补充肠道有益微生物等诸多优点,成为一种理想的抗生素替代品。【目的】从绵羊肠道共生菌中分离获得满足益生特性的益生菌。【方法】将健康绵羊肠道内容物及粪便在MRS培养基上分离纯化,利用形态学和16S rRNA基因序列分析鉴定分离菌株;通过抗菌活性分析、耐酸和耐胆盐能力测定、自聚集能力测定、抗生素敏感性分析及对小鼠的安全性测定等确定益生特性。【结果】从健康绵羊肠道中分离出多株肠道共生菌,经鉴定其中2株属于肠球菌,分别为蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii)A12和屎肠球菌(Enterococcus faecium)C1。抗菌分析显示,分离菌株A12和C1培养上清对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)均有很强的抗菌活性。耐受性分析显示分离菌株A12和C1具有良好的耐酸和耐胆盐特性,并且均具有很强的自聚集能力。药敏试验发现分离菌株A12和C1对多种抗生素敏感。小鼠体内安全性试验显示分离菌株A12和C1未使小鼠出现明显的病理变化,因此具备良好的安全性。【结论】分离纯化的2株肠道共生菌Enterococcus mundtii A12和Enterococcus faecium C1具有优良的益生特性和良好的安全性,具备作为益生菌开发的潜力。

关键词：羊肠道分离纯化肠球菌益生特性

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PRRSV阳性猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及特性分析

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中国兽医科学 2024年第11期54卷 1491-1501页

作者：常辉王玉淼李静李洋荆扬郑紫方裴秀秀陈劭肖书奇郑海学齐萌塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

本试验旨在研究临床感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后继发感染的细菌病原及其生物学特性,为实现PRRSV继发细菌感染的有效防控提供研究基础。无菌采集感染PRRSV死亡仔猪的胸腔... 详细信息

本试验旨在研究临床感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后继发感染的细菌病原及其生物学特性,为实现PRRSV继发细菌感染的有效防控提供研究基础。无菌采集感染PRRSV死亡仔猪的胸腔积液进行细菌的分离与纯化,对分离菌进行形态学鉴定、分子生物学鉴定、药敏试验检测、耐药基因和毒力基因检测,进一步通过动物试验评估分离菌的致病性。结果发现,该菌为革兰阴性短杆菌,葡萄糖、尿素、蛋白胨水、枸橼酸盐、赖氨酸生化试验呈阳性,初步鉴定为克雷伯菌属细菌;细菌通用引物PCR扩增产物测序结果显示,该菌与巴基斯坦肉鸡源肺炎克雷伯菌的同源性为99.77%,进一步鉴定出分离菌株为肺炎克雷伯菌。药敏试验结果显示,该株肺炎克雷伯菌对四环素、红霉素、阿奇霉素、青霉素、氨苄西林、林可霉素6种药物有较强的耐药性,对链霉素、卡那霉素不敏感;该菌携带3种耐药基因和6种毒力基因,对BALB/c小鼠具有较强的致病性,7.0×10^(8)CFU/m L攻毒时死亡率为100%。本研究自PRRSV感染死亡仔猪体内分离出1株肺炎克雷伯菌,该菌具有多重耐药性和较强的致病性;肺炎克雷伯菌是PRRSV感染的重要继发致病菌,对PRRSV阳性猪继发细菌感染的防治具有重要指导意义。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒肺炎克雷伯菌毒力耐药性致病性

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