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中国兽医科学 2025年第3期55卷 285-290页

作者：范许许李伟伟朱兆宇裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰郑海学朱紫祥中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)R298L基因的功能,解析ASFV的致病机制,为基因缺失减毒疫苗的研发提供候选毒株,首先利用同源重组技术构建R298L基因缺失的非洲猪瘟病毒株ASFV-ΔR298L,随后通过动物实验在猪体内比较ASFV-ΔR298L与亲本毒株ASF... 详细信息

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)R298L基因的功能,解析ASFV的致病机制,为基因缺失减毒疫苗的研发提供候选毒株,首先利用同源重组技术构建R298L基因缺失的非洲猪瘟病毒株ASFV-ΔR298L,随后通过动物实验在猪体内比较ASFV-ΔR298L与亲本毒株ASFV CN/GS/2018致病性和免疫应答水平的差异。结果表明,感染亲本毒株的动物发热严重,在感染后13 d内全部死亡,解剖学观察显示多器官发生严重的病变,而感染ASFV-ΔR298L重组病毒的动物发热水平显著下降,在观察期内全部存活,组织器官未发生病变,并且在后期产生较高水平的中和抗体。以上数据为解析R298L病毒蛋白的功能和阐明非洲猪瘟病毒的致病机制提供了理论依据,为基因缺失候选疫苗的研制提供了参考。

关键词：非洲猪瘟病毒 R298L基因缺失毒株致病性免疫保护

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非洲猪瘟病毒D1133L蛋白增加宿主波形蛋白磷酸化而促进病毒在猪巨噬细胞中的复制

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微生物学报 2024年第3期64卷 720-732页

作者：陈玲玲张婷郝雨杨金柯史喜绢张大俊杨行赵登率闫文倩别鑫恬陈国辉郑海学乐涛张克山重庆师范大学生命科学学院重庆401331 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起家猪和野猪的一种高死亡率的传染性疾病。ASFV具有庞大的基因组,其中非结构蛋白pD1133L被预测为其编码的6个解旋酶之一。本实验室应用免疫... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起家猪和野猪的一种高死亡率的传染性疾病。ASFV具有庞大的基因组,其中非结构蛋白pD1133L被预测为其编码的6个解旋酶之一。本实验室应用免疫沉淀-质谱联用(immunoprecipitation-mass spectrometry,IP-MASS)技术筛选与pD1133L互作的宿主细胞蛋白,发现细胞波形蛋白(vimentin,VIM)为pD1133L互作的宿主蛋白之一,但尚不清楚宿主蛋白VIM对ASFV复制的影响。【目的】探究ASFV与VIM的相互调控作用,揭示VIM促进ASFV复制的机制。【方法】通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)试验验证pD1133L与VIM存在互作关系;外源过表达VIM蛋白以及设计并合成VIM的si RNA探究VIM对ASFV复制的影响;利用Western blotting以及荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)方法检测ASFV对VIM蛋白水平以及转录水平的影响;通过Western blotting、间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)探究巨噬细胞感染ASFV后VIM磷酸化水平变化以及亚细胞定位变化情况;CCK-8试剂盒检测VIM磷酸化抑制剂KN-93处理的最佳浓度,并利用Western blotting以及IFA检测KN-93对VIM磷酸化、亚细胞定位以及对ASFV复制影响。【结果】VIM过表达促进ASFV复制,敲低VIM的表达则抑制ASFV复制;ASFV感染抑制VIM蛋白水平以及转录水平表达,且呈时间依赖性;ASFV感染后VIM发生磷酸化修饰且发生亚细胞定位改变,从而促进ASFV复制。【结论】证实了ASFV与宿主蛋白VIM之间的相互调控作用;初步确定ASFV感染后VIM受到ASFV pD1133L调控,亚细胞定位发生重排向核周聚集从而促进ASFV复制的机制。

关键词：非洲猪瘟病毒 D1133L蛋白波形蛋白蛋白互作磷酸化

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铁蛋白纳米颗粒在生物领域的应用

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生物工程学报 2024年

作者：张越茹毅郝荣增李亚军赵陇和杨洋卢炳州刘华南郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃农业大学动物医学院

铁蛋白广泛存在于生物体内，具有存储和转化铁、维持细胞铁代谢平衡的功能。由于铁蛋白可以在体外自组装形成独特的纳米笼状结构且具有特殊的理化性质，在生物医药领域广泛应用。本文简要介绍了铁蛋白的结构和货物装载策略，重点对其在... 详细信息

铁蛋白广泛存在于生物体内，具有存储和转化铁、维持细胞铁代谢平衡的功能。由于铁蛋白可以在体外自组装形成独特的纳米笼状结构且具有特殊的理化性质，在生物医药领域广泛应用。本文简要介绍了铁蛋白的结构和货物装载策略，重点对其在纳米药物、生物成像和纳米颗粒疫苗载体等生物领域应用研究进行综述，旨在为基于铁蛋白纳米颗粒的相关研究提供参考。

关键词：铁蛋白纳米药物生物成像纳米颗粒疫苗

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口蹄疫病毒O型东南亚拓扑型抗原变异研究

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中国农业科学 2024年第15期57卷 3093-3104页

作者：王莉李坤黄书伦李凤娟王省卢曾军刘在新动物疫病防控全国重点实验室/兰州大学动物医学与生物安全学院/中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省病原生物学基础学科研究中心

【目的】O型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）不断变异，易导致现用疫苗与流行毒株的抗原匹配性下降引起免疫效果不佳，疫情零星散发。近年来，O型FMDV中SEA（东南亚）拓扑型流行活跃且不断变异，持续对口蹄疫防疫产生... 详细信息

【目的】O型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）不断变异，易导致现用疫苗与流行毒株的抗原匹配性下降引起免疫效果不佳，疫情零星散发。近年来，O型FMDV中SEA（东南亚）拓扑型流行活跃且不断变异，持续对口蹄疫防疫产生压力。系统解析O型FMDV毒株特异性抗原位点以及不同拓扑型毒株的序列差异，明确抗原变异的关键氨基酸，可为FMD抗原分子设计提供依据，为FMD防控提供指导。【方法】利用10株（SEA拓扑型）毒株特异性牛源单克隆中和抗体，对毒株O/GSLX/2010(O/Mya/98谱系)进行抗体压力筛选逃逸突变株，鉴定这10株抗体所识别表位的关键氨基酸。利用牛源多抗血清样本（32份）与逃逸突变毒株进行病毒交叉中和试验，分析SEA拓扑型毒株的免疫优势表位；通过序列比对分析不同拓扑型毒株在该抗原表位上的差异。利用反向遗传技术将差异性抗原表位引入O型FMDV经典疫苗株O/HN/CHA/93(Cathay拓扑型)，对拯救的点突变毒株测序分析后进行间接免疫荧光试验鉴定，并通过病毒蚀斑测定与一步生长曲线检测病毒的复制动力学。利用SEA拓扑型毒株特异性单克隆中和抗体，通过中和试验分析拯救突变株的抗原性，确定影响病毒抗原性的关键氨基酸，评估毒株特异性位点氨基酸的改变对抗原谱的影响。【结果】SEA拓扑型特异性抗原表位主要集中于结构蛋白VP1的B-C/C-D环，属于抗原位点3。10株抗体中多数抗体（8/10）识别的抗原表位在VP1上，其中有6株单抗（A19、B55、B74、C5、F53和F166）识别的关键氨基酸位于VP1 B-C环（T43、K45）及C-D环（P58），另外2株单抗（B66和F41）识别的关键氨基酸位于VP1 C末端。病毒交叉中和试验结果表明，VP1上43位和VP3上131位氨基酸的改变显著降低了牛源多抗血清的抗体效价。对O型FMDV不同谱系毒株（26株）序列进行分析，发现三种拓扑型毒株VP1 B-C/C-D环的28、47、56和58位氨基酸不同。利用反向遗传技术成功将毒株特异性抗原表位引入Cathay拓扑型毒株（O/HN/CHA/93），拯救出6株FMDV的点突变株：POZ-GSLX-M58、POZ-GSLX-M56/58、POZ-GSLX-M28/58、POZ-GSLX-M47/58、POZ-GSLX-M28/58/47和POZ-GSLX-M47/56/58。微量中和试验结果表明，VP1上56/58位对毒株抗原性起到关键作用；然而，进一步增加28位和47位突变会降低抗体B83的中和作用，影响毒株自身的抗原性。因此，VP1上56和58位氨基酸的改变可以扩展SEA拓扑型特异性中和mAbs对O/HN/CHA/93毒株的中和效力与广度。【结论】O型FMDV结构蛋白VP1上56和58位氨基酸是引起SEA拓扑型毒株抗原变异的关键位点，引入这些抗原决定簇可以拓展FMDV O/HN/CHA/93的抗原谱。研究为FMD防控及疫苗设计提供参考。

关键词：口蹄疫病毒毒株特异性中和抗体抗原变异

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基于碳水化合物的佐剂作用机制研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 491-501页

作者：周梦婷宋银娟许健李斌冉多良储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730046 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

佐剂是指添加到疫苗中以刺激和增强免疫应答强度或改变免疫应答类型的物质。目前疫苗佐剂种类较多,包括铝佐剂、油乳佐剂和脂质体佐剂等,但临床使用的佐剂很少同时具备高效和低毒两大特点,因此迫切需要一种有效且安全的佐剂。基于碳水... 详细信息

佐剂是指添加到疫苗中以刺激和增强免疫应答强度或改变免疫应答类型的物质。目前疫苗佐剂种类较多,包括铝佐剂、油乳佐剂和脂质体佐剂等,但临床使用的佐剂很少同时具备高效和低毒两大特点,因此迫切需要一种有效且安全的佐剂。基于碳水化合物的佐剂具有良好的生物相容性和易代谢的优点,同时,基于碳水化合物的佐剂种类广泛,且每种都有不同免疫特性,如基于多糖的佐剂可以增强巨噬细胞的吞噬活性及抗原提呈能力等。并且基于碳水化合物的佐剂还可与Toll样受体、C型凝集素受体等多种受体结合发挥上述免疫活性,但其作用机制尚不完全清楚。故本文基于碳水化合物的佐剂作用机制相关研究进展进行总结梳理,以期为相关佐剂的进一步研究提供参考。

关键词：基于碳水化合物的佐剂多糖佐剂作用机制研究进展

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寨卡病毒感染致病机制及其防控策略的研究进展

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中国兽医科学 2025年

作者：巩俊佑段翔瀚郑海学葛朝明兰州大学第二医院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院

寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）是一种人畜共患的虫媒黄病毒，ZIKV疫情及其临床不良预后引发了全世界的关注。本文综述了当前对ZIKV病原学的认识，讨论了病毒蛋白与宿主相互作用以及致病性的机制，总结了抗病毒化合物和疫苗开发的进展及... 详细信息

寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）是一种人畜共患的虫媒黄病毒，ZIKV疫情及其临床不良预后引发了全世界的关注。本文综述了当前对ZIKV病原学的认识，讨论了病毒蛋白与宿主相互作用以及致病性的机制，总结了抗病毒化合物和疫苗开发的进展及公共卫生应对的措施，以期为防控工作提供有益参考。

关键词：寨卡病毒病原学致病机制防控策略

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非洲猪瘟病毒M1249L蛋白的表达及单克隆抗体制备

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中国兽医科学 2025年

作者：孙树凯席飞郑海学朱国梁朱紫祥中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室东北农业大学动物医学学院

本研究旨在制备非洲猪瘟病毒（ASFV）M1249L蛋白的单克隆抗体并分析其亚型、灵敏性及反应性。首先对M1249L（673 aa～1249 aa）序列进行密码子优化，并将该片段插入pET-28a载体中，构建原核表达质粒；经过转化、挑取单克隆、诱导表达及... 详细信息

本研究旨在制备非洲猪瘟病毒（ASFV）M1249L蛋白的单克隆抗体并分析其亚型、灵敏性及反应性。首先对M1249L（673 aa～1249 aa）序列进行密码子优化，并将该片段插入pET-28a载体中，构建原核表达质粒；经过转化、挑取单克隆、诱导表达及蛋白纯化，用纯化后的M1249L截短蛋白免疫小鼠；经细胞融合、有限稀释法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株，进行亚型鉴定和腹水制备。采用蛋白质免疫印迹（Western-blot）和间接免疫荧光试验（IFA）检测该单抗的反应性。结果显示，该单抗1D6重链属于IgG1型，轻链为Kappa型，腹水抗体效价可达1∶1 024 000。Western-blot结果显示，该单克隆抗体能够特异性识别ASFV感染后不同时间点猪肺泡巨噬细胞（PAMs）表达的M1249L蛋白以及HEK 293T细胞转染不同质粒量后表达的M1249L蛋白。IFA结果显示，在ASFV感染的PAMs细胞中出现绿色荧光，表明有良好的反应性。综上所述，本研究成功制备出M1249L单克隆抗体，为后续研究M1249L蛋白的生物学功能和ASFV诊断检测奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体 M1249L蛋白

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牛支原体0580基因C端截短体的原核表达及生物学功能初步分析

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 2991-3001页

作者：荆婷婷尹号黄蓉兰仕梅李章程尤留超郝华芳付磊储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000

旨在初步分析牛支原体(Mycoplasma bovis)PG45菌株0580基因的生物学功能。前期测试发现牛支原体PG45菌株、08M菌株、07801菌株都有溶解鼠红细胞的现象,根据NCBI中对PG45菌株的基因注释,筛选到1个假定与溶血素相关的基因MBOVPG45_0580。... 详细信息

旨在初步分析牛支原体(Mycoplasma bovis)PG45菌株0580基因的生物学功能。前期测试发现牛支原体PG45菌株、08M菌株、07801菌株都有溶解鼠红细胞的现象,根据NCBI中对PG45菌株的基因注释,筛选到1个假定与溶血素相关的基因MBOVPG45_0580。该基因编码的蛋白经预测具有4个跨膜区,全长表达困难,故构建了不含跨膜区的C端截短体原核表达载体Pcold III-0580-C,进行诱导表达以及纯化,并在小鼠中制备0580-C端重组蛋白的多克隆抗体,对0580-C重组蛋白溶红细胞能力、多克隆抗体效价及特异性、是否影响菌株黏附细胞的能力进行了探究。PG45菌株中假定的与溶血素相关的蛋白0580在牛支原体中的相似性高达100%,去除4个跨膜区的重组蛋白0580-C能在大肠杆菌中表达,相对分子质量约为37 ku;鼠红细胞溶血试验发现0580-C重组蛋白没有溶血活性,但黏附及黏附阻断试验发现该蛋白有助于提高牛支原体黏附EBL细胞的效率,0580-C蛋白鼠源多抗能有效阻断牛支原体对EBL细胞的黏附。制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体效价达211,且能识别到3株牛支原体菌株(PG45、08M、07801)天然表达的0580蛋白,表明制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体特异性较好。牛支原体中假定的与溶血素相关蛋白0580可能是一种新的黏附相关分子,为解析牛支原体MBOVPG45_0580基因的生物学功能以及牛支原体致病机制提供了新的见解。

关键词：牛支原体原核表达黏附作用 0580-C重组蛋白

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细胞自噬相关蛋白ATG9A对口蹄疫病毒侵入的影响

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 285-291页

作者：邓欣雨袁红王涛宫晓华赵俊芳包慧芳李平花孙普付元芳李坤刘在新卢曾军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为揭示细胞自噬相关蛋白9A(ATG9A)对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,利用IFA、RT-qPCR和Western-blot等方法检测FMDV与ATG9A的共定位情况以及病毒感染对ATG9A的影响;通过构建ATG9A重组表达质粒和合成小干扰RNA,检测过表达及敲降ATG9A对FMD... 详细信息

为揭示细胞自噬相关蛋白9A(ATG9A)对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,利用IFA、RT-qPCR和Western-blot等方法检测FMDV与ATG9A的共定位情况以及病毒感染对ATG9A的影响;通过构建ATG9A重组表达质粒和合成小干扰RNA,检测过表达及敲降ATG9A对FMDV吸附、内化、基因组复制、蛋白翻译、子代病毒粒子产生的影响。结果显示,FMDV感染后与ATG9A共定位且抑制ATG9A的表达;ATG9A不影响FMDV的吸附,但极显著地抑制FMDV的内化过程;同时,过表达(或干扰)ATG9A能够在RNA与蛋白水平显著降低(或提高)FMDV的增殖和子代病毒粒子产生的能力。结论,ATG9A抑制FMDV的复制,为深入认识FMDV在细胞内的复制周期提供了线索。

关键词：自噬相关蛋白9A 口蹄疫病毒内化复制

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益生菌细菌素防御病毒和细菌感染的机制研究

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中国兽医科学 2024年第6期54卷 808-815页

作者：李彩玉刘东慧权衡周继章陈启伟宫晓炜中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

面对抗生素耐药性的巨大挑战,益生菌细菌素在提高免疫力和抗感染方面展现了显著的效果。基于此,开发以益生菌细菌素为基础的新型抗菌剂成为研究的热点。本文对益生菌细菌素的来源、分类以及它对病毒和细菌的作用机理和应用进行综述,旨... 详细信息

面对抗生素耐药性的巨大挑战,益生菌细菌素在提高免疫力和抗感染方面展现了显著的效果。基于此,开发以益生菌细菌素为基础的新型抗菌剂成为研究的热点。本文对益生菌细菌素的来源、分类以及它对病毒和细菌的作用机理和应用进行综述,旨在为天然产物的筛选和新型替抗产品的研发提供参考。

关键词：益生菌细菌素病毒细菌

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