检索结果-内蒙古大学图书馆

2018-2023年四川开江县口蹄疫、猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体监测与分析

动物医学进展 2024年第11期45卷 76-82页

作者：潘琴欧云文任绍科张洋邓书明翟佳佳开江县动物疫病预防控制中心四川达州636250 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

为准确掌握2018-2023年四川开江县猪群中口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的免疫效果,从辖区359个场(点)随机采集猪血清3420份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行FMD、CSF和PRRS免疫抗体检测。结果显示,FMD、CSF和PRRS... 详细信息

为准确掌握2018-2023年四川开江县猪群中口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的免疫效果,从辖区359个场(点)随机采集猪血清3420份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行FMD、CSF和PRRS免疫抗体检测。结果显示,FMD、CSF和PRRS场(点)阳性率分别为79.94%、89.97%和67.41%,样品阳性率分别为83.92%、91.96%和76.05%,FMD和CSF免疫抗体阳性率逐年呈波浪式整体上升趋势,PRRS呈逐年下降趋势;在不同区域方面,所有乡镇的FMD和CSF样品阳性率均达到农业农村部规定标准,其中淙城街道的FMD和CSF场(点)阳性率、样品阳性率均最高,灵岩镇PRRS样品阳性率未达到农业农村部规定标准;在场点类型方面,屠宰环节的场(点)阳性率显著低于养殖环节(P<0.05),规模场(存栏量≥500头)的场(点)阳性率、样品阳性率均高于适度规模场(存栏量<500头)和散养户;从不同生长阶段来看,种畜样品阳性率均最高,分别为91.82%、95.33%和87.15%;在不同季节方面,FMD和CSF样品阳性率最高为夏季,分别为90.36%和96.70%,最低为春季。监测结果表明,开江县猪群中FMD、CSF和PRRS的整体免疫效果较好,建立了有效的免疫保护屏障,结果为进一步做好3种主要病毒性疫病的科学防控提供了参考依据。

关键词：口蹄疫猪瘟猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体监测与分析

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不同免疫刺激剂的安全性及免疫增强特性评价

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 533-540页

作者：周梦婷宋银娟李娜冯雅茹冉多良李斌储岳峰新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

本研究旨在评价不同免疫刺激剂的安全性及免疫增强特性,为后续亚单位疫苗的制备提供佐剂选择依据。本研究利用不同免疫刺激剂皮下免疫小鼠,免疫两次,间隔1周,最后1次免疫后的第7天处死小鼠,观察小鼠脏器大体病变;利用ELISA方法检测小鼠... 详细信息

本研究旨在评价不同免疫刺激剂的安全性及免疫增强特性,为后续亚单位疫苗的制备提供佐剂选择依据。本研究利用不同免疫刺激剂皮下免疫小鼠,免疫两次,间隔1周,最后1次免疫后的第7天处死小鼠,观察小鼠脏器大体病变;利用ELISA方法检测小鼠血清中细胞因子的变化;取注射部位及主要脏器进行组织病理学观察。研究结果表明,免疫刺激剂壳聚糖和HMT13均引起促炎细胞因子IFN-γ显著增加,HMT13和ISA201会引起大量Ig G的产生;此外,壳聚糖刺激还可引起大量IL-17的分泌。本研究通过观察小鼠主要脏器及注射部位的大体和组织病理学变化以及检测小鼠血清中细胞因子的变化等方法评价了免疫刺激剂Alum、壳聚糖、α-半乳糖基神经酰胺、HMT13、ISA201的安全性及免疫增强特性,为后续亚单位疫苗佐剂的选择提供了数据支持及参考依据。

关键词：免疫刺激剂安全性免疫增强特性

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猪流行性腹泻病毒S蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

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中国兽医科学 2025年

作者：林圣宇高梦玲汤娇蒙奎洋赵隆陈佳宁朱婷福建农林大学动物科学学院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院山西农业大学动物医学学院

为了进一步探究猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染的机制，利用CHO真核表达系统表达并纯化了PEDV S1蛋白，然后将该重组蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合后筛选获得了1株抗PEDV S1蛋白的单克隆抗体。通过间接免疫荧光和Western-blot等试验证... 详细信息

为了进一步探究猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染的机制，利用CHO真核表达系统表达并纯化了PEDV S1蛋白，然后将该重组蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合后筛选获得了1株抗PEDV S1蛋白的单克隆抗体。通过间接免疫荧光和Western-blot等试验证明所制备的单克隆抗体可特异性地识别PEDV S蛋白。综上，成功制备了PEDV S1蛋白单克隆抗体，为PEDV的检测和后续研究奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白单克隆抗体

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荆州市三株猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及其进化分析

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中国兽医科学 2024年第11期54卷 1502-1509页

作者：吕熙王运航邱实郭慧琛孙世琪杨丰利白满元长江大学动物科学技术学院湖北荆州434000 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

为了解我国湖北省荆州市猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPV)的流行状况、遗传变异和演化方向,本研究采集荆州市4例疑似FPV病死猫肠道样本、1例FPV阳性粪便样本。经PCR检测后将FPV阳性样品接种F81细胞,连续盲传至出... 详细信息

为了解我国湖北省荆州市猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPV)的流行状况、遗传变异和演化方向,本研究采集荆州市4例疑似FPV病死猫肠道样本、1例FPV阳性粪便样本。经PCR检测后将FPV阳性样品接种F81细胞,连续盲传至出现显著细胞病变(cytopathic effect,CPE),利用PCR、间接免疫荧光实验(IFA)、电子显微镜等技术对其进行鉴定。经鉴定,共分离出3株FPV,分别命名为FPV-JZ202201、FPV-JZ202202和FPV-JZ202203。然后进行VP2基因测序并构建进化树。结果显示,此3株FPV的VP2序列与国内外参考毒株的核苷酸同源性为97.9%~99.9%,氨基酸序列同源性为97.6%~99.9%;其中FPV-JZ202203与2023年河北省保定市分离毒株OR727316处于同一分支,与国内疫苗株的距离较远,处于不同的拓朴亚群,FPV-JZ202201和FPV-JZ202202与国内当前流行的其他FPV毒株以及现有的疫苗株在遗传上表现出较高的相似性,且它们均归属于同一遗传拓扑群。本研究结果对于了解FPV的流行病学特征具有重要意义。它不仅增加了我们对FPV流行毒株遗传背景的认识,还为未来猫泛白细胞减少症(FPL)疫苗的研发和优化提供了宝贵的基础数据。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒 VP2 分离鉴定序列分析

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非洲猪瘟病毒M1249L基因编码蛋白的序列分析和结构预测及亚细胞定位

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中国兽医科学 2023年第5期53卷 578-587页

作者：王悦亢伟芳任静静彭江玲张敬李丹杨文萍郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730046

为了解非洲猪瘟病毒(ASFV)M1249L基因及其编码蛋白pM1249L的结构和功能,本研究从NCBI数据库中采集100个ASFV毒株基因序列,对这些毒株的M1249L基因序列及氨基酸序列进行比对并构建分子进化树;进一步分析M1249L基因及p M1249L蛋白的理化性... 详细信息

为了解非洲猪瘟病毒(ASFV)M1249L基因及其编码蛋白pM1249L的结构和功能,本研究从NCBI数据库中采集100个ASFV毒株基因序列,对这些毒株的M1249L基因序列及氨基酸序列进行比对并构建分子进化树;进一步分析M1249L基因及p M1249L蛋白的理化性质,预测pM1249L蛋白的二级结构,预测并验证pM1249L蛋白在胞内的分布,验证p M1249L蛋白的泛素化修饰。结果表明,本实验室所使用毒株CN/GS/2018的M1249L基因与ASFV II型毒株同源性最高,相似度为99.87%;氨基酸序列比对结果表明,pM1249L蛋白较为保守;物理性质分析显示,p M1249L蛋白较为稳定,无跨膜区,无核定位序列及信号肽;化学性质分析显示,pM1249L蛋白具有磷酸化、泛素化、糖基化修饰位点;p M1249L蛋白以α-螺旋为主;激光共聚焦试验证实pM1249L蛋白分布于胞质;免疫共沉淀试验表明,pM1249L蛋白能够发生泛素化修饰。通过网站预测及试验验证,本研究全面分析了p M1249L蛋白的理化特性,为阐明其发挥功能的结构基础提供了相关数据。

关键词：非洲猪瘟病毒 pM1249L蛋白序列分析泛素化亚细胞定位

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牛支原体LRR5蛋白原核表达及其在牛支原体入侵宿主细胞过程中的作用分析

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微生物学报 2024年第5期64卷 1469-1482页

作者：冯雅茹周梦婷张瑜瑜张格高鹏程冉多良许健储岳峰李斌新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆草食动物新药研究与创制重点实验室新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

致病性支原体具有入侵宿主细胞的能力,这是其发挥致病作用的关键。介导支原体入侵宿主细胞的自身功能蛋白可能是一种潜在的药物或疫苗靶标。【目的】克隆表达牛支原体(Mycoplasma bovis)MBOVPG45_0564基因编码蛋白(命名为LRR5蛋白),并... 详细信息

致病性支原体具有入侵宿主细胞的能力,这是其发挥致病作用的关键。介导支原体入侵宿主细胞的自身功能蛋白可能是一种潜在的药物或疫苗靶标。【目的】克隆表达牛支原体(Mycoplasma bovis)MBOVPG45_0564基因编码蛋白(命名为LRR5蛋白),并探究其在***入侵宿主细胞过程中的作用。【方法】利用NCBI数据库对MBOVPG45_0564基因进行同源性分析,用Discovery Studio Client系统对LRR5蛋白进行蛋白结构预测;原核表达LRR5蛋白并制备其小鼠多克隆抗体,利用免疫电镜对LRR5蛋白进行亚细胞定位;通过平板计数、激光共聚焦显微镜观察LRR5抗体封闭后***对胎牛肺(embryonic bovine lung,EBL)细胞入侵率的变化;将LRR5蛋白偶联至荧光微球表面后,以激光共聚焦显微镜及高内涵活细胞成像系统观察微球进入EBL细胞情况。【结果】MBOVPG45_0564基因在牛支原体属中为保守基因,其编码蛋白LRR5为膜相关蛋白,空间构象呈典型的月牙状,多个重复的亮氨酸基序以超螺旋方式组装并形成螺线管蛋白质结构单元。LRR5抗体封闭后,***对EBL细胞的入侵率显著降低(P<0.05),荧光微球偶联LRR5蛋白后,荧光微球可成功进入EBL细胞。【结论】MBOVPG45_0564基因编码的LRR5蛋白定位在***膜上,在***入侵宿主细胞过程中发挥着重要作用。

关键词：牛支原体 MBOVPG45_0564基因入侵蛋白表达生物学功能

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多糖修饰脂质纳米颗粒递药系统的研究进展

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生物工程学报 2024年第12期40卷 4339-4350页

作者：麻玉清柳海云王晓强孙世琪郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 兰州交通大学化学化工学院甘肃兰州730070 兰州交通大学生物与制药工程学院甘肃兰州730070

脂质纳米颗粒递送系统是目前最具有应用前景的药物载体之一,其生物相容性好、无免疫原性且载药效率高。然而,未修饰的脂质纳米颗粒仍存在稳定性差、易水解和易被快速清除的问题。为了克服上述缺点,研究人员对脂质纳米颗粒进行了一系列... 详细信息

脂质纳米颗粒递送系统是目前最具有应用前景的药物载体之一,其生物相容性好、无免疫原性且载药效率高。然而,未修饰的脂质纳米颗粒仍存在稳定性差、易水解和易被快速清除的问题。为了克服上述缺点,研究人员对脂质纳米颗粒进行了一系列的修饰,包括多肽修饰、抗体修饰、配体修饰、核酸适配体修饰、多糖修饰等。其中,多糖作为一类天然聚合物,修饰脂质纳米颗粒后表现出良好的生物相容性,而且还具有靶向目标器官和低毒性等优势。多糖修饰后的脂质纳米颗粒具有在临床治疗中发挥重要作用的潜力。本文综述了多糖修饰脂质纳米颗粒的制备及应用,为进一步研究与开发新型脂质纳米颗粒提供了参考。

关键词：递药系统脂质纳米颗粒多糖修饰脂质纳米颗粒制备多糖应用

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CHO细胞表达重组猪干扰素-γ及其抗病毒活性

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4784-4795页

作者：王凌云郝荣增杨洋李亚军卢炳州毛玉涵张越龚真莉刘艳红齐萌茹毅郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300

为利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovarian,CHO)细胞表达系统制备重组猪干扰素-γ(recombinant porcine interferon gamma,rPoIFN-γ),并分析其体外抗病毒活性,本研究首先构建rPoIFN-γ真核表达质粒pc DNA3.1-PoIFN-γ,转染悬浮培养的CHO细胞,进行上清分泌表达,利用亲和层析纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;通过CCK-8实验分析rPoIFN-γ对细胞的毒性,用VSV/PK-15系统检测其抗病毒活性效价;最后分析rPoIFN-γ对塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的抗病毒活性及其对细胞内干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)和细胞因子的诱导作用。结果显示,本研究利用CHO悬浮细胞表达系统成功制备了纯化的rPoIFN-γ,该rPoIFN-γ对细胞无毒性,VSV/PK-15系统检测其活性效价为5.59×10^(7) U/mg;此外,rPoIFN-γ可诱导细胞内多种ISGs和细胞因子的表达,并显著抑制SVA的复制。总之,本研究成功利用CHO表达系统制备了高活性的rPoIFN-γ,并在体外完成其对SVA的抗病毒作用分析,为rPoIFN-γ的功能及抗病毒制剂的研究提供了实验材料和基础。

关键词：猪干扰素-γ 塞内卡病毒A 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞蛋白表达与纯化抗病毒活性

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口蹄疫病毒通用型结构蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：张慧艳李坤孙梦阳邢向川付元芳李平花李冬卢曾军曹轶梅中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

为建立口蹄疫病毒(FMDV)O型、A型、Asia 1型通用结构蛋白抗体检测方法，本研究用FMDV各血清型间高度保守的结构蛋白VP2氨基端短肽为抗原，经过条件优化，建立了可检测牛血清中FMDV不同血清型结构蛋白抗体的间接ELISA方法，并分析了该方... 详细信息

为建立口蹄疫病毒(FMDV)O型、A型、Asia 1型通用结构蛋白抗体检测方法，本研究用FMDV各血清型间高度保守的结构蛋白VP2氨基端短肽为抗原，经过条件优化，建立了可检测牛血清中FMDV不同血清型结构蛋白抗体的间接ELISA方法，并分析了该方法的敏感性、特异性、重复性以及与液相阻断ELISA(LPB-ELISA)的符合性。结果显示，该短肽最佳包被浓度为2 μg/mL，最适封闭液为1% BSA+5%蔗糖，血清最佳稀释度为1∶4，酶标二抗稀释比例为1∶5 000。以约登指数最大作为临界值，测定其敏感性为87.5%，特异性为93%，与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的阳性血清均未出现交叉反应，且批间与批内变异系数均≤10%。与LPB-ELISA的符合率为92.59%。该方法耗时短、操作简洁，可检测牛血清中FMDV不同血清型结构蛋白抗体，为FMDV感染的诊断和群体免疫状况的评估提供了一种通用方法。

关键词：口蹄疫病毒结构蛋白VP2 通用型间接ELISA

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过表达JMJD6基因的293T细胞系的构建及对水疱性口炎病毒增殖效率的评价

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 569-576页

作者：黄梦瑶杨帆杨洋邵文华王家丽吕岳芹赵晓义陈治彤曹伟军张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为提高水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建Jumonji C结构域蛋白6(Jumonji domain-containing protein 6,JMJD6)过表达的HEK-293T/JMJD6细胞系,分析VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系与HEK-293T细胞中的复制差异。首先以JMJD6基因为目标,构建重组质粒pLV-puro-3×Flag-JMJD6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装。将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达JMJD6基因的阳性细胞。利用Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术和蚀斑试验检测VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系中的复制能力。结果显示,在HEK-293T/JMJD6细胞系中,VSV的复制能力显著增强。实时荧光定量检测VSV感染的HEK-293T/JMJD6细胞系和野生型HEK-293T细胞中干扰素下游基因的表达,结果显示HEK-293T/JMJD6细胞系抑制VSV诱导的Ⅰ型干扰素下游基因的产生。总之,本研究构建的HEK-293T/JMJD6细胞系能显著促进VSV的增殖并抑制Ⅰ型干扰素信号通路,为VSV疫苗候选细胞株的筛选奠定了基础。

关键词： JMJD6 水疱性口炎病毒慢病毒包装过表达细胞系干扰素

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