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口蹄疫病毒Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型比较分析

中国兽医科学 2012年第4期42卷 331-338页

作者：周强包慧芳白兴文孙普陈应理谢宝霞卢曾军刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心国家口蹄疫参考实验室OIE口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了明确口蹄疫病毒(FMDV)Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型差异,对采自不同宿主的4株FMDV进行了分子特征分析和蚀斑形态的比较。结果显示,来自不同宿主动物的分子特征差异主要表现为猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2与... 详细信息

为了明确口蹄疫病毒(FMDV)Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型差异,对采自不同宿主的4株FMDV进行了分子特征分析和蚀斑形态的比较。结果显示,来自不同宿主动物的分子特征差异主要表现为猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2与2个牛源毒株之间具有21个特异性的氨基酸置换位点,分散在ORF范围内。猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S1具有与牛源毒株大量相似的氨基酸位点,并且与2株牛源毒株一样,都显示为小斑的蚀斑显型,而猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2在蚀斑试验中显示为大小斑混合存在。结果表明,猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2的变异位点对病毒蚀斑显型的改变具有重要意义。

关键词： O型口蹄疫病毒 Mya98谱系不同宿主分子特征蚀斑显型

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口蹄疫病毒3A蛋白和FLAG标签的融合表达与血清学分析

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中国兽医科学 2012年第7期42卷 690-695页

作者：祁国财曹轶梅付元芳厍大亮况文东孙普卢曾军刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心国家口蹄疫参考实验室OIE口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过对比各短肽标签,选择由8个氨基酸组成的FLAG标签弥补口蹄疫疫苗毒株OZK 3A蛋白的93～102位10个氨基酸缺失,原核表达FLAG与3A的嵌合蛋白,并命名为3AF。同时也表达了OZK毒株原始3A蛋白。分别以3A和3AF蛋白作为免疫原免疫6～8周龄雌性B... 详细信息

通过对比各短肽标签,选择由8个氨基酸组成的FLAG标签弥补口蹄疫疫苗毒株OZK 3A蛋白的93～102位10个氨基酸缺失,原核表达FLAG与3A的嵌合蛋白,并命名为3AF。同时也表达了OZK毒株原始3A蛋白。分别以3A和3AF蛋白作为免疫原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,采用ELISA和Western-blot分析融合蛋白的血清学反应活性。结果表明,3A蛋白和3AF蛋白均能在大肠杆菌中有效表达,且主要以可溶性形式表达。纯化的3AF蛋白能与FLAG单抗特异性反应而未能诱导免疫小鼠产生针对该标签的抗体,体现了体外和体内的生物反应性差异。FLAG标签对3A蛋白的表达水平、表达形式等未产生显著影响。本研究为下一步FLAG标记病毒的拯救及其应用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 3A蛋白 FLAG标签酶联免疫吸附试验

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牛支原体生长曲线的测定和培养基筛选

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湖北农业科学 2012年第3期51卷 549-551页

作者：邵倩储岳峰何生虎逯忠新宁夏大学农学院银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物(疫病重点开放实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

为筛选最适于牛支原体(Mycoplasma bovis)生长的培养基,利用活菌计数方法测定了牛支原体OF2株在改良Thiaucourt’s培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中的生长曲线。结果发现,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长30 h即可达到平... 详细信息

为筛选最适于牛支原体(Mycoplasma bovis)生长的培养基,利用活菌计数方法测定了牛支原体OF2株在改良Thiaucourt’s培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中的生长曲线。结果发现,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长30 h即可达到平台期,平均最高生长滴度7.0×109ccu/mL;在牛心汤培养基中生长40 h即可达到平台期,平均最高生长滴度4.0×109ccu/mL;在改良KM2培养基中生长50 h达到平台期,其平均最高生长滴度为7.0×108ccu/mL。结果表明,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长快、滴度高,为下一步牛支原体灭活疫苗的研究提供了参考依据。

关键词：牛支原体(Mycoplasma bovis) 培养基筛选生长曲线

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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组质粒pEGFP-NSP9的构建与表达

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中国兽医科学 2012年第8期42卷 843-847页

作者：吴锦艳田宏陈妍尚佑军刘湘涛吴润甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为验证siRNAs对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制效果,构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因与增强型绿色荧光蛋白基因GFP的融合表达质粒,并在Marc145细胞中进行了表达。通过RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因,将其克隆... 详细信息

为验证siRNAs对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制效果,构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因与增强型绿色荧光蛋白基因GFP的融合表达质粒,并在Marc145细胞中进行了表达。通过RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因,将其克隆入表达载体pEGFP-N1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染Marc145细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和NSP9基因转录水平。结果显示,经双酶切及PCR鉴定,目的基因的大小与预期相符。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有NSP9基因的转录。本研究成功构建的猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因GFP融合表达质粒,为在细胞水平快速筛选有效的siRNAs提供了工具。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9基因绿色荧光蛋白融合表达

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猪痘病毒研究进展

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动物医学进展 2012年第2期33卷 91-94页

作者：芦晓立张强颜新敏商洛学院生物医药工程系陕西商洛72600 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

猪痘是由猪痘病毒或痘苗病毒引起的猪的一种急性、热性和接触性传染病,近年来,国内外在猪痘病毒的分子水平的研究方面取得了较大进展。论文在综述了猪痘病毒的理化特征的基础上,着重介绍了猪痘病毒分子特征以及不同类型的编码蛋白、作... 详细信息

猪痘是由猪痘病毒或痘苗病毒引起的猪的一种急性、热性和接触性传染病,近年来,国内外在猪痘病毒的分子水平的研究方面取得了较大进展。论文在综述了猪痘病毒的理化特征的基础上,着重介绍了猪痘病毒分子特征以及不同类型的编码蛋白、作为疫苗载体、诊断和防控方面的研究进展。

关键词：猪痘病毒编码蛋白疫苗载体诊断防控

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表达抑制山羊痘病毒ORF095 shRNA的山羊成纤维细胞系的建立

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甘肃农业大学学报 2012年第2期47卷 6-11页

作者：赵志荀吴国华颜新敏许丹李健朱海霞崔力凡高顺平孙晓林马保华张强甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物医学院农业部动物生理生殖和胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

将已经通过体外验证能够有效抑制山羊痘病毒复制的shRNA转入山羊体细胞,构建其表达细胞系.将已经通过验证能够靶向抑制山羊痘病毒ORF095基因并有效抑制GTPV的pGPU6/GFP-ORF095-siRNA-70转染山羊原代成纤维细胞,经800μg/mL G418抗性筛选... 详细信息

将已经通过体外验证能够有效抑制山羊痘病毒复制的shRNA转入山羊体细胞,构建其表达细胞系.将已经通过验证能够靶向抑制山羊痘病毒ORF095基因并有效抑制GTPV的pGPU6/GFP-ORF095-siRNA-70转染山羊原代成纤维细胞,经800μg/mL G418抗性筛选7～8d后,用含200μg/mL G418和10～15ng/mL EGF的培养基进一步单克隆化并将单克隆细胞扩大、传代培养,应用RT-PCR检测及测序鉴定所构建的细胞系.结果表明:本试验获得的1株成纤维细胞系基因组含有ORF095-siRNA-70表达框架,为进一步进行体细胞克隆转基因动物的制备和RNAi体内抗山羊痘病毒的研究奠定了基础.

关键词：山羊痘病毒 pGPU6/GFP-shRNA G418 细胞系 RT-PCR

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口蹄疫病毒Asia Ⅰ/HeB株不同宿主适应毒及其多克隆抗体的鉴定

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湖南农业科学 2012年第4期 126-129页

作者：郭少娟张中旺张永光王永录潘丽吕建亮周鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫病毒接种乳鼠、豚鼠及BHK-21细胞,获得相应的适应毒。以各组织液中的口蹄疫病毒RNA为模板,反转录并扩增VP1基因,PCR产物琼脂糖凝胶电泳,回收目的片段,测序。测序结果与核酸数据库中口蹄疫病毒VP1基因比对,并将各适应毒扩增的VP1... 详细信息

口蹄疫病毒接种乳鼠、豚鼠及BHK-21细胞,获得相应的适应毒。以各组织液中的口蹄疫病毒RNA为模板,反转录并扩增VP1基因,PCR产物琼脂糖凝胶电泳,回收目的片段,测序。测序结果与核酸数据库中口蹄疫病毒VP1基因比对,并将各适应毒扩增的VP1基因序列相互比对。结果表明:此毒为口蹄疫病毒,各适应毒间序列同源性达98%。并用口蹄疫病毒抗原进行SDS-PAGE,分别与大肠杆菌表达的口蹄疫病毒HeB株P1蛋白制备的多克隆兔抗及健康对照血清进行Western blot,对多克隆兔抗进行鉴定,并用间接ELISA测定此多克隆兔抗的效价。确定此多抗能中和FMDV结构蛋白,抗体效价>1∶800。

关键词：口蹄疫病毒结构蛋白P1 多克隆抗体

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羊传染病四季发病特点及其防制

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中国草食动物科学 2012年第S1期32卷 436-437页

作者：张克山尚佑军逯忠新刘湘涛家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

1四季羊发生传染病特点春暖花开的春季,"冬眠"的微生物开始复苏,圈养了整个冬天的羊离开羊舍出去活动,加上初春季节羊的膘情不理想,抵抗力相对较低,给羊传染病的发生和流行创造了极为便利的条件。尤其是冬季出生的羔羊,在春... 详细信息

1四季羊发生传染病特点春暖花开的春季,"冬眠"的微生物开始复苏,圈养了整个冬天的羊离开羊舍出去活动,加上初春季节羊的膘情不理想,抵抗力相对较低,给羊传染病的发生和流行创造了极为便利的条件。尤其是冬季出生的羔羊,在春季断奶时,羔羊本身抵抗力弱加上断奶应激易发生传染病。因此春季必须高度重视羊传染病,做好免疫接种、药物预防和定期消毒等工作。夏季湿热的环境为羊传染病尤其是细菌性传染病的发生、传播和流行提供了有利条件。

关键词：断奶应激羊舍免疫接种羊肠毒血症药物预防羊快疫羊病羊口疮李氏杆菌病羊炭疽

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猪圆环病毒的分子生物学与检测方法的研究现状

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中国农学通报 2012年第14期28卷 66-72页

作者：田晓婷李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)作为引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaningmultisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原,引起了人们的广泛关注。对猪圆环病毒的分子生物学研究和了解,有利于PMWS的预防和控制。而快速有效... 详细信息

猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)作为引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaningmultisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原,引起了人们的广泛关注。对猪圆环病毒的分子生物学研究和了解,有利于PMWS的预防和控制。而快速有效的分子生物学诊断技术将有助于PMWS的流行病学调查研究和早期诊断。经过近20年的系统研究,人们对其病原分子生物学等方面有较深入的了解,在此就猪圆环病毒的分子生物学相关研究进展进行了简单的总结。

关键词：猪圆环病毒基因组结构复制模式分子生物学诊断

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羊传染病四季发病特点及其防制

羊传染病四季发病特点及其防制

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2012年全国养羊生产与学术研讨会

作者：张克山尚佑军逯忠新刘湘涛家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

关键词：发病特点传染性角膜结膜炎羊肠毒血症传染病羔羊痢疾羊传染性胸膜肺炎羊快疫

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