检索结果-内蒙古大学图书馆

甘肃农业大学学报 2006年第3期41卷 11-15页

作者：姜海霞刘永生杨孝朴陈豪泰朱小玲张杰谢庆阁甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．... 详细信息

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．6％,推导的氨基酸序列同源性为99．8％,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化*** BL21(DE3),在37℃下用1．0 mmol／L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20％～25％．用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物．Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别．因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原．

关键词：人朊蛋白基因克隆原核表达

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羊朊蛋白基因的克隆和序列分析

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畜牧兽医学报 2005年第8期36卷 794-799页

作者：吴润谢庆阁刘湘涛陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室

分别从6只羊(3只藏绵羊和3只山羊)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的羊PrP基因片段大小为771bp,包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列,为包... 详细信息

分别从6只羊(3只藏绵羊和3只山羊)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的羊PrP基因片段大小为771bp,包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框,其与国外报道的已知序列基本相同。所克隆的羊PrP基因含5个短而富含G-C的元件,可编码八肽Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln或九肽Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln。这些PrP基因序列相比较,其核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性分别在99.0%~100.0%和98.1%~100.0%之间。共发现17个碱基替换,其中6个为同义码替换、11个为异义突变。异义突变中,除SY200301~SY200303的S240P和MY200301的M112T外,其余均位于PrP氨基酸125~228的C-端球形结构区,分别为MY200301的G129S突变、MY200302的T191R突变、MY200303的G127S突变及SY200302和SY200303的H143R和R211G。6个羊PrP基因均为密码子136、154和171的PrPARQ等位基因。

关键词：藏绵羊山羊朊蛋白基因 DNA克隆序列分析

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用大肠杆菌表达FMDV NSP3ABC鉴别感染与注苗动物ELISA方法的建立

引用

畜牧兽医学报 2005年第4期36卷 381-386页

作者：曹轶梅卢曾军刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样... 详细信息

用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样品效价。当效价小于012为阴性,介于012～013之间为可疑,大于013为阳性。根据此判定标准所测试验感染动物血清都为阳性,敏感性达100%;97.06%疫苗注射动物血清为阴性;98.39%的非免疫健康牛(未感染也未注射疫苗牛)血清为阴性。研究证实感染牛在1年以后仍能检测到3ABC抗体。这说明3ABC-I-ELISA能够鉴别FMDV感染动物和注苗动物,可作为大面积疫情监测的方法应用。

关键词：大肠杆菌表达鉴别间接ELISA方法 FMDV 感染动物判定标准动物血清血清样品疫苗注射注射疫苗方法应用疫情监测阳性敏感性健康牛检测效价抗原后作免疫抗体

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双峰驼朊蛋白基因的克隆和序列分析

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中国兽医科技 2005年第12期35卷 969-973页

作者：吴润陈豪泰刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室

分别从4峰双峰驼全血中提取基因组总DNA,用所设计的引物扩增了细胞型朊蛋白(PrP)基因,并克隆到pMD 18-T载体.序列分析表明,所克隆的4个双峰驼PrP基因片段大小分别为768、768、792和795 bp,包含了朊蛋白基因的完整编码区序列,为包含在单... 详细信息

分别从4峰双峰驼全血中提取基因组总DNA,用所设计的引物扩增了细胞型朊蛋白(PrP)基因,并克隆到pMD 18-T载体.序列分析表明,所克隆的4个双峰驼PrP基因片段大小分别为768、768、792和795 bp,包含了朊蛋白基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框,均与国外报道的同属单峰驼PrP序列基本相同.4个双峰驼PrP基因含5个或6个短而富含G-C的元件,可编码5个或6个八肽(九肽)重复序列Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln或Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln,其氨基酸序列含有24个氨基酸的N-端信号肽和22个氨基酸(除LT200302为23个氨基酸外)的C-端信号肽.4个双峰驼PrP基因之间相比较,其核苷酸和推导氨基酸序列的同源性为91.0%～100.0%和94.2%～100.0%.共发生133个碱基替换,其中107个为同义码替换,26个为异义突变.

关键词：双峰驼朊蛋白基因 DNA克隆序列分析

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用原位RT-PCR对BHK-21细胞中的FMDV检测和定位

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中国人兽共患病杂志 2005年第12期21卷 1086-1088页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

目的为了明确FMDV在BHK-21细胞中的复制和增殖部位,建立原位检测FMDV的方法。方法以地高辛标记的寡核苷酸作为探针,用间接原位RT-PCR技术对实验接种FMDV的BHK-21细胞中的FMDV RNA进行检测和定位。结果在接毒细胞的细胞质中有大量强阳性... 详细信息

目的为了明确FMDV在BHK-21细胞中的复制和增殖部位,建立原位检测FMDV的方法。方法以地高辛标记的寡核苷酸作为探针,用间接原位RT-PCR技术对实验接种FMDV的BHK-21细胞中的FMDV RNA进行检测和定位。结果在接毒细胞的细胞质中有大量强阳性蓝染颗粒,阴性对照细胞中没有蓝染颗粒出现,也没有明显的背景染色。结论结果表明FMDV RNA在细胞的细胞质中进行复制和增殖,同时也表明原位RT-PCR是检测细胞内病毒的一种敏感、特异的方法。

关键词：原位RT-PCR FMDV BHK-21细胞原位杂交

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疯牛病与新型克-雅病研究进展

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基础医学与临床 2005年第12期25卷 1090-1094页

作者：陈豪泰张杰刘永生吴润刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

朊病毒是一种不含核酸的感染性蛋白颗粒,能导致哺乳动物中枢神经系统组织的病变,其繁殖是通过构象变构由正常型(PrPC)转变为致病型(PrPSc)而完成的。这两种结构异型体来源于同一基因,具有相同的氨基酸序列,但其二级和三级结构不同。作... 详细信息

朊病毒是一种不含核酸的感染性蛋白颗粒,能导致哺乳动物中枢神经系统组织的病变,其繁殖是通过构象变构由正常型(PrPC)转变为致病型(PrPSc)而完成的。这两种结构异型体来源于同一基因,具有相同的氨基酸序列,但其二级和三级结构不同。作者就疯牛病和新型克-雅病的病原、结构特征、诊断与防治作此综述。

关键词：朊病毒疯牛病新型克-雅病结构

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佐剂及其在基因免疫研究中的应用

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中国兽医科技 2005年第4期35卷 315-321页

作者：郭慧琛孙世琪刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

论述了免疫佐剂的作用机理及细胞因子、CpGDNA、化学佐剂、共刺激信号分子、化学因子、黏附分子等佐剂在基因疫苗中的应用概况,并对免疫佐剂在基因疫苗中的应用前景进行了展望。

关键词：佐剂基因疫苗免疫

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用原位杂交对BHK-21细胞中的FMDV定位和检测

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畜牧兽医学报 2005年第11期36卷 1170-1173页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

为了明确FMDV在细胞内的增殖部位,建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法,对试验接种FMDV O/Akesu/58(107TCID50)毒株的BHK-21细胞中2～10 h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位.选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针,采用尾段... 详细信息

为了明确FMDV在细胞内的增殖部位,建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法,对试验接种FMDV O/Akesu/58(107TCID50)毒株的BHK-21细胞中2～10 h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位.选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针,采用尾段标记法以地高辛-11-dUTP标记,用原位杂交敏感加强型试剂盒检测杂交体.结果显示,从感染FMDV后2～10 h内的BHK-21细胞中检测出阳性染色的病毒粒子,这些病毒粒子大多集中在核周围,随感染时间延长阳性染色信号增强.这说明用寡核苷酸探针与敏感加强型试剂盒结合对检测细胞内低拷贝的病毒粒子是可行的,同时也从分子水平上证明FMDV主要在细胞质中进行复制和繁殖.

关键词：原位杂交 FMDV 探针 BHK-21

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猪带绦虫六钩蚴表膜结合蛋白45WB_2基因在毕赤酵母中的表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第3期23卷 171-174页

作者：王谨骆学农岳城胡志敏才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046 新疆农业大学化工学院乌鲁木齐830052

目的从猪带绦虫六钩蚴总RNA中扩增45WB2基因,并在甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K中获得高效表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从孵化激活的六钩蚴克隆获得459bp的基因,亚克隆至酵母分泌表达载体pPIC9K中,经测序验证读码框正确后... 详细信息

目的从猪带绦虫六钩蚴总RNA中扩增45WB2基因,并在甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K中获得高效表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从孵化激活的六钩蚴克隆获得459bp的基因,亚克隆至酵母分泌表达载体pPIC9K中,经测序验证读码框正确后,重组质粒电转化毕赤酵母SMD1168菌株。用PCR方法检测结果表明,目的基因整合进毕赤酵母染色体DNA中。重组菌株用1%甲醇诱导,分别取诱导72和96h的上清和沉淀进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Westernblotting)分析。结果重组菌株在毕赤酵母中的表达蛋白分子量为Mr16000,表达产物占上清总蛋白量的32.8%,且能被猪囊尾蚴病患者血清识别。结论基因在毕赤酵母中成功表达,表达产物有望作为免疫原用于猪囊尾蚴病的免疫预防。

关键词：猪带绦虫六钩蚴表膜结合蛋白基因毕赤酵母菌基因表达

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口蹄疫病毒O/China/99株多基因植物组成型表达载体的构建及序列分析

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中国人兽共患病杂志 2005年第10期21卷 841-844,905页

作者：潘丽张永光王永录王宝琴王文秀方玉珍蒋守田张维德董金杰吕建亮谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的构建包含FMDV结构蛋白P1、非结构蛋白2A、3C以及部分2B的基因片段P12X3C的植物组成型表达载体,为FMDV可饲疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增法,从pGEM/P12A质粒和pGEM/3C质粒中扩增P12A及部分2B基因(P12X)、3C基因,将获得的P12X... 详细信息

目的构建包含FMDV结构蛋白P1、非结构蛋白2A、3C以及部分2B的基因片段P12X3C的植物组成型表达载体,为FMDV可饲疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增法,从pGEM/P12A质粒和pGEM/3C质粒中扩增P12A及部分2B基因(P12X)、3C基因,将获得的P12X与3C片段经BamHI/SpeI和SpeI/SalI双酶切后,与经BamHI/SalI双酶切后的pUC18质粒大片段连接,得到重组质粒pUC18/P12X3C,pUC18/P12X3C质粒经BamHI/SalI双酶切后的大片段与经同样双酶切的植物表达载体pBin438连接,转化子经酶切、PCR及测序鉴定后,获得包含FMDV O/China/99株P12X3C片段的植物组成型表达载体pBin438/P12X3C,最后通过三亲交配法,将表达载体pBin438/P12X3C导入农杆菌。结论成功构建FMDV多基因的植物组成型表达载体。

关键词：口蹄疫病毒 O/China/99株多基因植物组成型表达载体基因序列可饲疫苗

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