检索结果-内蒙古大学图书馆

甘肃农业大学学报 2005年第3期40卷 306-310页

作者：吴锦艳刘湘涛胡永浩尚佑军田宏孙世琪尹双辉冯霞甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

将猪FMDV毒株(O/GD/MSH/86)分别适应牛肾细胞(Bovinekidney,MD-BK)、幼仓鼠肾细胞(Babyhamsterkidney,BHK-21)和猪肾细胞(Porcinekidney,PK-15),研究了FMDV在宿主细胞上的嗜性。结果发现,该毒株在MD-BK细胞上不产生细胞病变(CPE),从细胞液中也未检测到病毒,而在BHK-21和PK-15细胞上能够稳定产生CPE。可见,猪FMDVO/GD/MSH/86毒株不能在MD-BK细胞上增殖,而在BHK-21和PK-15细胞上则增殖较好。

关键词：猪口蹄疫病毒细胞嗜性

来源：评论

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病毒感染与逃避免疫反应的研究进展

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医学分子生物学杂志 2005年第4期2卷 284-287,305页

作者：沈小燕丛国正常惠芸刘永生王建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州市730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西省杨凌市712100

病毒和宿主共生过程中,病毒为了生存繁衍形成多种逃避宿主免疫反应的方式。其中病毒抗原变异逃逸抗体的中和和病毒干扰补体激活的关键环节来抑制宿主的抗病毒状态是病毒拮抗机体体液免疫反应的主要途径。此外,病毒还利用编码多种细胞因... 详细信息

病毒和宿主共生过程中,病毒为了生存繁衍形成多种逃避宿主免疫反应的方式。其中病毒抗原变异逃逸抗体的中和和病毒干扰补体激活的关键环节来抑制宿主的抗病毒状态是病毒拮抗机体体液免疫反应的主要途径。此外,病毒还利用编码多种细胞因子的类似物干扰细胞因子的正常功能,造成有利于病毒生存复制的内环境,从而使得病毒能够持续感染机体。

关键词：病毒感染逃避免疫反应

来源：评论

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牛朊蛋白(bPrP^C)基因的克隆和序列分析

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畜牧兽医学报 2004年第3期35卷 318-323页

作者：吴润谢庆阁刘湘涛陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室

分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrPC的片段大小为795bp,包含了牛朊蛋白基因的完整编... 详细信息

分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrPC的片段大小为795bp,包含了牛朊蛋白基因的完整编码区序列,为含单一外显子的完整开放阅读框,与国内外报道的已知序列基本相同。本次所报道的牛PrP(bPrPC)基因含6个短而富含G-C的元件,可编码八肽Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln/Arg或九肽Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp/Arg-Gly-Gln。这些bPrPC基因序列相比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别在99.0%～100.0%和99.2%～100.0%之间。在整个18个碱基替换中,多数替换是保守的,为同义突变,仅有5个替换引起氨基酸突变,分别为HN200302的W60R、HN200303的S154N、MN200301的A129V、NN200302的Q234R和NN200303的Q94R突变。发现牦牛朊粒基因在126(A→G)、234(G→A)和678(T→C)位的特征性核苷酸替换,但均为同义码替换。

关键词：牛朊蛋白基因克隆序列分析神经变性疾病疯牛病朊病毒

来源：评论

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口蹄疫病毒OH/CHA/99株全长基因组感染性克隆的构建

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科学通报 2004年第9期49卷 858-862页

作者：刘光清刘在新陈应理包慧芳刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学开放实验室兰州730046

以构建的口蹄疫病毒OH/CHA/99株全长cDNA为模板,使用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,得到病毒RNA.用脂质体转染法将转录物RNA导入BHK细胞,可观察到典型的口蹄疫病毒致细胞病变效应.对收获的病毒分别用RT-PCR,乳鼠毒力试验以及免疫电子... 详细信息

以构建的口蹄疫病毒OH/CHA/99株全长cDNA为模板,使用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,得到病毒RNA.用脂质体转染法将转录物RNA导入BHK细胞,可观察到典型的口蹄疫病毒致细胞病变效应.对收获的病毒分别用RT-PCR,乳鼠毒力试验以及免疫电子显微镜观察等方法进行鉴定,结果表明拯救到特定的口蹄疫病毒.同时用空斑实验法观察了拯救病毒及其亲本毒株的生长特性,结果表明二者在致病性上没有明显差异,这将为进一步探索猪口蹄疫病毒致病的分子机制及研制新型口蹄疫疫苗奠定良好的基础.

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA 转录物RNA OH/CHA/99株克隆

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猪囊尾蚴病免疫原的分子生物学研究进展

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中国兽医科技 2004年第11期34卷 35-44页

作者：景志忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

猪带绦虫有成虫、虫卵、六钩蚴、囊尾蚴不同形式的发育阶段和寄生状态,不同的虫体形式以独特的组织结构和生命活动规律满足其寄生在相应宿主体内的需要[1,2].研究发现,六钩蚴与囊尾蚴在虫体组成成分、生化指标以及代谢(分泌)产物等方面... 详细信息

猪带绦虫有成虫、虫卵、六钩蚴、囊尾蚴不同形式的发育阶段和寄生状态,不同的虫体形式以独特的组织结构和生命活动规律满足其寄生在相应宿主体内的需要[1,2].研究发现,六钩蚴与囊尾蚴在虫体组成成分、生化指标以及代谢(分泌)产物等方面都有差异.

关键词：猪囊尾蚴病免疫原分子生物学发育阶段寄生状态

来源：评论

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口蹄疫OX株全基因组cDNA的分子克隆、序列测定及分析

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畜牧兽医学报 2004年第4期35卷 454-458页

作者：孙世琪郭慧琛尚佑军魏旭文靳野马军武韩雪清刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

采用RT-PCR法对FMDVOX株基因组全序列进行了分子克隆与测序。结果表明不含poly(C)序列和poly(A)尾巴的OX株基因组全序列长8104nt,开放读码框(ORF)长6969nt、编码2322aa,5′UTR长1040nt,3′UTR长95nt。应用分子生物学软件将OX株与FMDV其... 详细信息

采用RT-PCR法对FMDVOX株基因组全序列进行了分子克隆与测序。结果表明不含poly(C)序列和poly(A)尾巴的OX株基因组全序列长8104nt,开放读码框(ORF)长6969nt、编码2322aa,5′UTR长1040nt,3′UTR长95nt。应用分子生物学软件将OX株与FMDV其它参考毒株进行序列比较,并对其基因特征进行分析。结果显示,OX株与OTwyl/97的核苷酸同源性最高,在基因组功能未知区和3A编码区具有两处明显的缺失现象,其一是在3A编码区有30nt的连续缺失,这与OTwyl/97株相同,其二是在功能未知区域有44nt的缺失,这与OTwyl/97株相同,与OAkesu58相似(43nt缺失)。

关键词：口蹄疫 OX株基因组分子克隆序列分析 RT-PCR

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口蹄疫病毒多基因腺病毒穿梭质粒的构建

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中国兽医科技 2004年第2期34卷 21-24页

作者：卢曾军曹轶梅刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用分步扩增连接的方法将口蹄疫病毒结构蛋白基因P1 2A、3C蛋白酶基因和 3D聚合酶基因按正确的读码框依次连接克隆入 pGEM T载体。然后 ,将切取的目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒 pShuttle CMV。构建成功的 2个重组穿梭质粒经测序鉴定 ... 详细信息

采用分步扩增连接的方法将口蹄疫病毒结构蛋白基因P1 2A、3C蛋白酶基因和 3D聚合酶基因按正确的读码框依次连接克隆入 pGEM T载体。然后 ,将切取的目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒 pShuttle CMV。构建成功的 2个重组穿梭质粒经测序鉴定 ,含有完整的目的基因表达盒 ,穿梭质粒可与腺病毒骨架载体进行细菌内同源重组。

关键词：口蹄疫病毒腺病毒穿梭质粒结构蛋白基因

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口蹄疫O/China/99毒株在不同宿主系传代的3A和VP1基因变异研究

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病毒学报 2004年第4期20卷 338-346页

作者：张永光吕建亮王永录方玉珍蒋守田张维德刘湘涛潘丽刘力宽裴仉福中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用RT-PCR法扩增了经不同宿主系(乳鼠、BHK21细胞、PK15细胞)连传不同代次的口蹄疫O/China/99毒株的3A和VP1基因,并进行了核苷酸和氨基酸序列分析。结果表明,该毒株经不同宿主系传至90代后,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点也较稳定... 详细信息

利用RT-PCR法扩增了经不同宿主系(乳鼠、BHK21细胞、PK15细胞)连传不同代次的口蹄疫O/China/99毒株的3A和VP1基因,并进行了核苷酸和氨基酸序列分析。结果表明,该毒株经不同宿主系传至90代后,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点也较稳定;而非结构蛋白3A基因却在不同宿主和代次发生突变缺失;经BHK21细胞传代后未发生缺失;经PK15细胞传代,在70～90代之间在第254～313位出现缺失;经乳鼠传代,在60～70代之间在第265～300位发生缺失,并在以后的90代毒中仍在此位缺失。这与代表性猪源流行毒O/YUN/TAW/97和O/HKN/21/70的3A基因在第276～305位发生缺失有相同之处。

关键词：宿主细胞乳鼠 VP1基因毒株 PK 非结构蛋白3 传代代次口蹄疫

来源：评论

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口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC在大肠杆菌中的高效表达

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畜牧兽医学报 2004年第1期35卷 115-118页

作者：曹轶梅刘在新卢曾军郭建宏常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部病毒学重点实验室甘肃兰州730046

将牛源O型口蹄疫病毒(Foot and mouthdiseasevirus,FMDV)China/99株非结构蛋白基因3ABC从pGEM T 3ABC重组质粒中亚克隆到原核表达载体pTriEx 4Neo上,成功构建重组表达质粒pTriEx 3ABC。将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,... 详细信息

将牛源O型口蹄疫病毒(Foot and mouthdiseasevirus,FMDV)China/99株非结构蛋白基因3ABC从pGEM T 3ABC重组质粒中亚克隆到原核表达载体pTriEx 4Neo上,成功构建重组表达质粒pTriEx 3ABC。将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,表达产物经SDS PAGE可检测到分子量约为59 1ku的目的蛋白带,经薄层扫描分析,目的蛋白占菌体总蛋白的31 4%。Westernblotting分析证明表达产物能被FMDV阳性血清所识别。表达产物纯化后作抗原进行ELISA检测,结果表明,表达的蛋白显示特异的免疫学活性,并能区分自然感染动物和注苗动物。研究为以FMDV非结构蛋白为抗原,建立自然感染动物和注苗动物的鉴别诊断方法提供了材料。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白基因 3ABC 大肠杆菌基因表达

来源：评论

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同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒

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中国病毒学 2004年第2期19卷 125-128页

作者：卢曾军曹轶梅包惠芳刘在新赵启祖陈应理常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有O型口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体.首先将P1-2A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle-CMV上,再将重组穿梭质粒用PmeI线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAde... 详细信息

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有O型口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体.首先将P1-2A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle-CMV上,再将重组穿梭质粒用PmeI线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv-p12x3c和pAdcmv-p12x3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中.重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK293细胞,转染1w内细胞出现典型病变.取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24~48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行PCR和RT-PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达.取第4、6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在.本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础.

关键词：同源重组口蹄疫病毒腺病毒疫苗免疫重组腺病毒质粒

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