检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科技 2004年第7期34卷 13-18页

作者：冶贵生刘湘涛张彦明马玉花邓明俊洪海霞韩雪清中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构... 详细信息

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构蛋白编码区核苷酸长 4 0 0 2nt ,氨基酸长 1334aa ;与J1’73、H/ 3’76、SVDV(Seechrn等测株 )、NET/ 1/ 92的核苷酸同源性分别为 98.6 %、98.3%、98.3%、91.2 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 98.9%、99.1%、99.2 %和 97.2 %。

关键词：猪水泡病病毒非结构蛋白编码区序列分析同源性

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猪水泡病病毒VP2基因抗原区在大肠杆菌中的表达

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微生物学报 2004年第5期44卷 593-595页

作者：冶贵生刘湘涛张彦明马玉花张淼涛洪海霞韩雪清中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院杨凌712100

利用RT_PCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T_1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX_VP2 ... 详细信息

利用RT_PCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T_1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX_VP2 ,并测序。测序结果表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确 ,表达载体构建成功。将含有阳性质粒的BL2 1菌液经IPTG诱导后进行SDS_PAGE分析 ,出现预期的目的蛋白条带 ,此目的蛋白经Westernblot检测确定其有免疫活性。

关键词： SVDV HK’70 VP2基因抗原区 pGEX—VP2 SDS—PAGE Western blot

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口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达

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中国兽医学报 2004年第1期24卷 31-34页

作者：曹轶梅刘在新卢曾军胡永浩常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部病毒学重点实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学甘肃兰州730070

从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与... 详细信息

从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与国外参考序列 0 1K/ 6 6相比 ,同源性在 99%以上。亚克隆 3ABC基因至表达载体 p Tri Ex- 4 Neo中 ,通过序列分析发现 ,克隆到 p Tri Ex- 4 Neo载体上的片段于 3ABC基因 70 9～ 72 5 bp之间有 17bp的缺失 ,碰巧在 3AB基因后形成一终止密码子 ,但 3AB基因的阅读框架完整。选出含有 3AB基因完整阅读框架的阳性克隆 ,用 IPTG诱导表达 ,收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western blotting分析 ,结果表明 ,3AB基因在大肠杆菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 33.5 ku的融合蛋白 ,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析 ,表达的目的蛋白占总蛋白量的 2 6 %以上。该项研究为应用重组

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因 3AB基因基因克隆基因表达

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猪囊尾蚴cDNA质粒表达文库的构建

引用

中国兽医科技 2004年第5期34卷 11-13页

作者：宗瑞谦才学鹏季建莉景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室新疆农业职业技术学院动物科学系新疆昌吉831100

从猪囊尾蚴中提取总RNA ,并分离出mRNA ,采用定向克隆方法 ,将猪囊尾蚴cDNA片段重组入质粒表达载体 pSPORT 1的NotⅠ和SalⅠ双酶切位点之间 ,构建了猪囊尾蚴cDNA表达文库。通过库容量鉴定 ,所构建的表达文库的容量为 2× 10 6 ;经含... 详细信息

从猪囊尾蚴中提取总RNA ,并分离出mRNA ,采用定向克隆方法 ,将猪囊尾蚴cDNA片段重组入质粒表达载体 pSPORT 1的NotⅠ和SalⅠ双酶切位点之间 ,构建了猪囊尾蚴cDNA表达文库。通过库容量鉴定 ,所构建的表达文库的容量为 2× 10 6 ;经含有IPTG和X gal的颜色选择平皿测定 ,其重组率为 10 0 %。

关键词：猪囊尾蚴 cDNA 质粒表达文库 mRNA 克隆

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猪水泡病病毒结构蛋白编码区核苷酸的序列测定与分析

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中国兽医科技 2004年第3期34卷 3-8页

作者：冶贵生刘湘涛张彦明马玉花张淼涛韩雪清张永国中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出P1区的 2个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经重组质粒的双酶切 ,PCR鉴定后测序。序列分析表明 ,HK’70P1区核苷酸组成... 详细信息

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出P1区的 2个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经重组质粒的双酶切 ,PCR鉴定后测序。序列分析表明 ,HK’70P1区核苷酸组成中A含量较高 ,G +C含量较低 ,且A G、C T转换率较高。P1序列同源性分析表明 ,SVDVHK’70与J1’73、H/3’76、SVDV(Seechurn等测株 )、NET/1/92的核苷酸序列同源性分别为 97.8%、98.1%、97.6 %和 89.3% ;相应地 ,推导的氨基酸序列同源性分别为 98.8%、98.7%、98.8%和 96 .5 %。

关键词：猪水泡病病毒 P1区序列分析同源性结构蛋白编码区核苷酸

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猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达

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中国兽医科技 2004年第1期34卷 3-7页

作者：胡慧邱昌庆张彦明西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

用RT PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株 (Shimen)、近期地方流行的属于第 1群毒株的新疆毒株 (XJ)和第 2群代表毒株甘肃临洮 (LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增 ,均得到约 5 6 1bp的基因片段 ;经克隆测序及序列分析 ,该基因编码 18... 详细信息

用RT PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株 (Shimen)、近期地方流行的属于第 1群毒株的新疆毒株 (XJ)和第 2群代表毒株甘肃临洮 (LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增 ,均得到约 5 6 1bp的基因片段 ;经克隆测序及序列分析 ,该基因编码 187个氨基酸残基 ,预计蛋白分子质量为 2 1.7ku。将这 4个基因分别克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1中 ,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中 ,阅读框是正确的 ,从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL2 1(DE3)中 ,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG )进行诱导表达 ,对表达的蛋白用SDS PAGE电泳、免疫印迹和薄层凝胶扫描分析。结果表明 ,E2基因的主要抗原区可以在大肠埃希氏菌中表达 ,表达的蛋白多以包涵体形式存在 ,表达产物的分子质量约为 5 0 .0ku ,与理论推测的分子质量一致 ;薄层凝胶扫描分析表明 ,表达蛋白约占菌体蛋白总量的 2 0 .1% ;免疫印迹结果证明 ,表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别。

关键词：猪瘟病毒 E2基因抗原区原核表达载体基因片段克隆测序序列分析氨基酸残基重组质粒包涵体菌体蛋白

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口蹄疫病毒的抗原变异与逃避免疫反应

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中国兽医科技 2004年第12期34卷 33-37页

作者：沈小燕丛国正常惠芸王建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是1898年首次发现的病毒性动物疾病,因其发病凶猛,被国际兽医局(OIE)列为A类传染病之首.

关键词：口蹄疫病毒抗原变异家养 FMDV 动物疾病 OIE 兽医发病免疫反应首次发现

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口蹄疫病毒3D蛋白对DNA疫苗免疫效果的影响

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中国兽医科技 2004年第3期34卷 12-17页

作者：郭慧琛孙世琪云涛张腾国包慧芳陈应理马军武刘湘涛刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 兰州大学生命科学学院甘肃兰州730000

将携带O型FMDVChina 99株P1 2A、部分 2B及 3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDVChina 99株 3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素 (PHA)刺激后的增殖活性 ,以间接ELISA... 详细信息

将携带O型FMDVChina 99株P1 2A、部分 2B及 3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDVChina 99株 3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素 (PHA)刺激后的增殖活性 ,以间接ELISA方法检测血清FMDV特异抗体变化 ,并以微量中和试验检测中和抗体水平。结果表明 ,FMDDNA疫苗与 3D蛋白共同免疫豚鼠后 ,抗体水平没有明显提高 ,攻毒后的保护率为 2 5 %。

关键词：口蹄疫病毒 3D蛋白 DNA疫苗免疫效果

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猪带绦虫六钩蚴TsO1基因的克隆、表达与结构预测

猪带绦虫六钩蚴TsO1基因的克隆、表达与结构预测

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：才学鹏景志忠窦永喜蒙学莲吴国华骆学农郑亚东中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室

从猪带绦虫六钩蚴cDNA 表达文库中筛选、克隆的TSOl 基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建pGEX-GST-TSO1的融合表达的重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG 诱导表达后,经SDS-PAGE 和Western 蛋白分析,成功地高效表达了约40kD... 详细信息

从猪带绦虫六钩蚴cDNA 表达文库中筛选、克隆的TSOl 基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建pGEX-GST-TSO1的融合表达的重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG 诱导表达后,经SDS-PAGE 和Western 蛋白分析,成功地高效表达了约40kD 左右的融合蛋白质,与预测的分子量大小一致,表达量达达40%左右,具有免疫学活性,而且表达的产物呈可溶性,未形成包涵体,这与用蛋白质软件分析的TSO1编码蛋白水溶性相一致。

关键词：六钩蚴免疫筛选基因克隆融合表达结构预测

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猪囊尾蚴病免疫原分子生物学研究进展

猪囊尾蚴病免疫原分子生物学研究进展

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：景志忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室

猪囊尾蚴(Cysticercus cellilosae)是猪带绦虫的幼虫,能寄生于猪的横纹肌等组织器官,而引起的一种人兽共患寄生虫病,它严重影响养猪业的发展和人体健康。猪带绦虫有成虫、虫卵、六钩蚴、囊尾蚴不同形式的发育阶段和寄生状态,不同的虫体... 详细信息

猪囊尾蚴(Cysticercus cellilosae)是猪带绦虫的幼虫,能寄生于猪的横纹肌等组织器官,而引起的一种人兽共患寄生虫病,它严重影响养猪业的发展和人体健康。猪带绦虫有成虫、虫卵、六钩蚴、囊尾蚴不同形式的发育阶段和寄生状态,不同的虫体形式都具有其独特的组织结构和生命活动规律,以满足其寄生在相应宿主体内的需要。研究发现,六钩蚴和囊尾蚴在虫体组成成分、生化代谢指标以及代谢(分泌)产物等方面都具有重要的差异

关键词：内含子外显子学术研讨会副肌球蛋白羊带绦虫分子生物学研究猪囊尾蚴病猪带绦虫

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