检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年第4期55卷 435-440页

作者：郑东东冯涛郝荣增杨彪晏子龙齐晓兰郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白... 详细信息

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白表达质粒,制备了HERC4基因过表达细胞,随后在HERC4基因敲除细胞和过表达细胞中,分别利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量和病毒滴度测定方法检测了HERC4蛋白对FMDV复制的影响,结果表明,HERC4蛋白对FMDV复制有影响,敲除可以抑制病毒复制,过表达可以促进病毒复制。该研究结果为后续开展HERC4蛋白调控FMDV复制机制研究奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒宿主蛋白HERC4 基因敲除基因过表达

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非洲猪瘟病毒p30抗体竞争化学发光法的建立

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中国兽医学报 2025年第1期45卷 1-7页

作者：温升辉邵军军高闪电彭德财常惠芸丁嘉烽刘伟师铭咸广西大学动物科学技术学院临床兽医学实验室广西南宁530004 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/甘肃省病原生物学基础学科研究中心OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起猪的一种急性、热性、高致死性疾病。鉴于当前尚缺乏商业化的疫苗,并且近年来ASFV不断演变,中等毒力基因Ⅱ型毒株的涌现以及基因Ⅰ型弱毒... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起猪的一种急性、热性、高致死性疾病。鉴于当前尚缺乏商业化的疫苗,并且近年来ASFV不断演变,中等毒力基因Ⅱ型毒株的涌现以及基因Ⅰ型弱毒株的传入,导致猪仅出现了持续性和慢性感染的状况。因此,对ASFV的特异性抗体检测变得势在必行。本研究利用p30单克隆抗体建立了一种检测ASFV p30抗体的竞争化学发光法——p30-cCLIA。通过检测背景清晰的阴阳性血清,确定该方法的Cut-off值为50%时,诊断敏感性(Dsn)和诊断特异性(Dsp)均为100%。在最佳反应条件下筛选出适用于p30单抗16-5E7E8-HRP的酶标稳定剂。此外,本研究建立的p30-cCLIA方法的灵敏度比商品化阻断ELISA试剂盒更高(1∶2048 vs 1∶512),并具有良好的重复性。通过检测其他病毒感染猪阳性血清,结果表明与这些血清无交叉反应性。该方法的建立为ASF早期诊断提供了有力工具。

关键词：非洲猪瘟 p30抗体抗体检测化学发光法

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猪瘟与口蹄疫二联疫苗的制备及其免疫效果评价

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中国预防兽医学报 2025年第2期47卷 172-178页

作者：高洁袁红焦云娟李坤李平花杨宇轩黄书伦郭海洋邱酉飞包慧芳孙普李冬刘在新卢曾军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 WOAH/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

为研制猪瘟(CSF)与口蹄疫(FMD)二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白(r E2)的表达与纯化效果,采用western blot检测r... 详细信息

为研制猪瘟(CSF)与口蹄疫(FMD)二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白(r E2)的表达与纯化效果,采用western blot检测r E2与His-Tag单克隆抗体(MAb)的反应原性。结果显示,在约50 ku处出现目的蛋白条带,纯化后在约50 ku处出现单一条带。western blot结果显示在50 ku处出现特异性条带。表明,r E2获得了表达且纯化效果较好,反应原性较强。将纯化后的r E2与灭活的口蹄疫病毒(FMDV)O/Tibet/99株混合后经ISA 201佐剂乳化制备二联疫苗,将小鼠分为4组:CSFV E2+FMDV(20μg^(+)1μg)组、CSFV E2(20μg)组、FMDV(1μg)组及PBS阴性对照组。于第1 d和21 d分别将相应疫苗以肌肉注射方式免疫6周龄~8周龄的各组雌性BALB/c小鼠,首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d采血,利用ELISA检测各组小鼠血清中的抗体水平;利用流式细胞术检测免疫后42 d各组小鼠血液中CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞和CD19^(+)B淋巴细胞的占比;采用ELISA检测免疫后42 d各组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平。抗体检测结果显示,与PBS组相比,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠产生的针对两种病毒的抗体水平均显著和极显著升高(P<0.05、P<0.01、P<0.0001);E2+FMDV组与E2组和FMDV组小鼠血清中CSFV和FMDV的抗体水平均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术结果显示,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞及CD19^(+)B淋巴细胞的占比均显著和极显著高于PBS组(P<0.05、P<0.01、P<0.0001);E2+FMDV组与E2组小鼠上述指标均无显著差异;与FMDV组相比,E2+FMDV组小鼠CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞的占比极显著升高(P<0.01),而另外两个指标均无显著差异。ELISA检测结果显示,3个实验组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平均显著和极显著高于PBS组(P<0.05、P<0.01),E2+FMDV组与二者单独免疫组小鼠IFN-γ的分泌水平均无显著差异。上述结果表明,E2+FMDV二联疫苗对小鼠的免疫效果与单独免疫E2亚单位疫苗和FMDV灭活疫苗的免疫效果相当,CSFV E2蛋白与FMDV灭活病毒的联合免疫是可行的。综上,本研究首次制备的CSFV E2+FMDV二联苗可作为防控CSF和FMD的一种潜在候选疫苗,为这两种病毒二联甚至多联疫苗的研制奠定了实验基础。

关键词：猪瘟 E2蛋白口蹄疫二联疫苗

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口蹄疫病毒O型全自动磁微粒CLIA抗体定量检测方法的建立

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中国农业科学 2024年第4期57卷 810-819页

作者：包艳芳蒋韬何莉吕律李涛善李昕孙燕燕杨光魏婷潘晓乐林密兰州兽研生物科技有限公司中国农业科学院兰州兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室/国家口蹄疫参考实验室

【背景】口蹄疫（foot and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病，疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施。免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据，是免疫工作和疫情防控必不可... 详细信息

【背景】口蹄疫（foot and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病，疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施。免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据，是免疫工作和疫情防控必不可少的关键环节，因此建立高效、快速、全自动的抗体检测方法具有重要意义。【目的】基于磁微粒（micromagnetic particles,MPs）化学发光免疫分析技术（CLIA），建立一种新型、全自动、可定量的口蹄疫病毒O型抗体检测方法，为口蹄疫免疫监测和疫情防控提供技术支撑。【方法】使用纳米材料磁微粒为固相载体和分离载体包被捕获抗体，用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）标记检测抗体，经过条件优化建立了一种新型磁微粒CLIA检测方法（magnetic particle chemiluminescence immunoassay,MP-CLIA）。本方法首先加入磁微粒-兔抗偶联物（magnetic particle-polyclonal antibodies,MPs-p Abs）、待测样本、口蹄疫病毒O型抗原，37℃孵育；再加入适量酶标抗体（ALP-p Abs）,37℃孵育；最后加入化学发光底物AMPPD，检测相对发光强度（relative light unit,RLU）。研究通过检测标准品拟合标准曲线，并应用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic,ROC）确定检测方法的判定标准；利用质控样本进行方法学评价，同时检测田间样本，并和液相阻断ELISA（LPB-ELISA）比对，验证临床检测效果。【结果】优化后最佳反应条件为磁微粒浓度0.25 mg·m L-1、口蹄疫病毒O型抗原1﹕1 000稀释、酶标抗体1﹕2 000稀释、加样量20μL。整个检测过程均在全自动化学发光免疫分析仪中完成，反应时间20 min，在抗体含量0—1 280 U（效价0—1﹕2 048）范围内标准曲线R2>0.99，可进行定量检测。该方法敏感性为94.66%；特异性为97.10%，检测口蹄疫A型、Asia I型血清型特异性为97.14%，与塞内卡病毒（SVV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、牛流行热病毒（BEFV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、羊痘病毒（QRFV）、小反刍兽疫病毒（PPRV）抗体阳性血清无交叉反应；重复检测变异系数CV值<10%；田间样本检测结果与LPB-ELISA符合率为94.69%，定量结果相关系数R2为0.8473,P<0.0001，相关性显著。【结论】建立的MP-CLIA方法耗时短、操作简便，配套国产全自动化学发光仪，可进行全自动化检测，是一种新型、高效的口蹄疫病毒O型抗体定量检测方法，本方法对应的试剂盒已经完成中试生产和临床检测试验，在全国不同区域试用效果较好，具有较高的临床应用价值。

关键词：磁微粒化学发光免疫分析法口蹄疫磁微粒全自动化

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口蹄疫病毒与塞内卡病毒灭活抗原免疫小鼠脾脏的转录组学差异分析

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生物工程学报 2024年第12期40卷 4493-4508页

作者：郑紫萱马雪青李坤孙普黄书伦董开恒赵琼琼卢曾军钱平华中农业大学动物医学院农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室湖北武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

本研究旨在探究C57BL/6小鼠免疫口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)与塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)2种病原的免疫应答差异,为解析获得性免疫调控机制提供理论基础。将灭活纯化的FMDV与SVA抗原分别免疫C57BL/6小鼠,设置PB... 详细信息

本研究旨在探究C57BL/6小鼠免疫口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)与塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)2种病原的免疫应答差异,为解析获得性免疫调控机制提供理论基础。将灭活纯化的FMDV与SVA抗原分别免疫C57BL/6小鼠,设置PBS免疫对照组;利用流式细胞术分析免疫14、28 d后各组小鼠脾淋巴细胞中Th1与Th2细胞的比例,并进行小鼠脾脏转录组测序和分析;通过体外抗原刺激鼠巨噬细胞验证筛选差异表达基因。结果显示,小鼠免疫14d后,FMDV与SVA抗原免疫组诱导Th1/Th2型免疫应答水平无显著差异,免疫28d后,SVA抗原免疫组诱导Th1型与Th2型免疫应答水平均高于FMDV抗原免疫组;转录组测序获得2种抗原免疫后2组共有差异基因Rsad2和Tspan8等,可能参与FMDV和SVA抗原激活Th1/Th2型免疫应答反应的过程;FMDV与SVA抗原体外刺激巨噬细胞分泌IL-12、IL-33,差异基因Tspan8、Rsad2的表达趋势与转录组测序结果一致,Rsad2的表达受Ⅰ型干扰素(IFNα、IFNβ)的调控。本研究获得了2种小鼠脾脏中抗原免疫应答相关的差异基因,为进一步研究FMDV和SVA免疫应答机制奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒 A型塞内卡病毒 Th1/Th2型免疫应答脾脏转录组测序

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不同粒径口蹄疫病毒样颗粒-ZIF-8复合物诱导小鼠的体液免疫效果分析

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4837-4848页

作者：李家俊王俊张韵滕志东董虎郭慧琛孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室口蹄疫国家参考实验室甘肃兰州730046 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为进一步提高口蹄疫(foot-and-mouthdisease,FMD)病毒样颗粒(virus-likeparticles,VLPs)疫苗的免疫效果,本研究采用仿生矿化方法,将Zn2+和2-甲基咪唑按照不同浓度配比制备了不同粒径的FMDV VLPs-沸石咪唑骨架-8(zeolitic imidazolate framework-8,ZIF-8)复合物,以探究尺寸效应对免疫效果的影响。结果显示,成功制备出3种不同粒径的FMDV VLPs-ZIF-8,粒径分别约为70、100、1000 nm。细胞毒性和组织病理学试验表明,3种复合物均具有良好的生物安全性。小鼠免疫试验表明,3种复合物均能明显提高中和抗体和特异性抗体水平,并且随着复合物体积的减小,其免疫效果也随之增强。本研究表明,ZIF-8包封FMDV VLPs可显著增强其免疫效果,且具有尺寸依赖性。

关键词：沸石咪唑骨架-8 口蹄疫病毒样颗粒佐剂尺寸效应

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CHO细胞表达重组猪干扰素-γ及其抗病毒活性

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4784-4795页

作者：王凌云郝荣增杨洋李亚军卢炳州毛玉涵张越龚真莉刘艳红齐萌茹毅郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300

为利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovarian,CHO)细胞表达系统制备重组猪干扰素-γ(recombinant porcine interferon gamma,rPoIFN-γ),并分析其体外抗病毒活性,本研究首先构建rPoIFN-γ真核表达质粒pc DNA3.1-PoIFN-γ,转染悬浮培养的CHO细胞,进行上清分泌表达,利用亲和层析纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;通过CCK-8实验分析rPoIFN-γ对细胞的毒性,用VSV/PK-15系统检测其抗病毒活性效价;最后分析rPoIFN-γ对塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的抗病毒活性及其对细胞内干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)和细胞因子的诱导作用。结果显示,本研究利用CHO悬浮细胞表达系统成功制备了纯化的rPoIFN-γ,该rPoIFN-γ对细胞无毒性,VSV/PK-15系统检测其活性效价为5.59×10^(7) U/mg;此外,rPoIFN-γ可诱导细胞内多种ISGs和细胞因子的表达,并显著抑制SVA的复制。总之,本研究成功利用CHO表达系统制备了高活性的rPoIFN-γ,并在体外完成其对SVA的抗病毒作用分析,为rPoIFN-γ的功能及抗病毒制剂的研究提供了实验材料和基础。

关键词：猪干扰素-γ 塞内卡病毒A 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞蛋白表达与纯化抗病毒活性

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我国猪A型塞内卡病毒的流行现状及诊断技术的研究进展

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中国兽医科学 2023年第5期53卷 631-640页

作者：丁凯璐马雪青黄嘉馨刘霞孙普中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种新发生的猪水疱性传染病病原,被感染猪的临床症状为口鼻及蹄冠部水疱性损伤、跛行、厌食、仔猪腹泻甚至急性死亡等。这与猪的口蹄疫、水疱病、水疱性口炎的临床症状非常相似,临床上难以鉴别诊断... 详细信息

A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种新发生的猪水疱性传染病病原,被感染猪的临床症状为口鼻及蹄冠部水疱性损伤、跛行、厌食、仔猪腹泻甚至急性死亡等。这与猪的口蹄疫、水疱病、水疱性口炎的临床症状非常相似,临床上难以鉴别诊断,只能依赖实验室确诊。近年来,在美国、加拿大、中国等多个国家发生猪塞内卡病毒病,似乎正在成为一种全球性流行的猪病,给养猪业带来了不同程度的经济损失和潜在威胁。本文对我国猪塞内卡病毒的流行现状及诊断技术的研究进展进行了综述,以期为该病的科学防控提供参考。

关键词：猪塞内卡病毒病 A型塞内卡病毒流行病学诊断技术

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非洲猪瘟病毒及其免疫调控分子机制

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中国兽医杂志 2023年第5期59卷 1-7页

作者：张坤鹏杨发誉张丹阳郑海学朱紫祥中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室口蹄疫国家参考实验室甘肃兰州730046 兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730000

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种以高热和出血为特征的急性传染病,世界动物卫生组织(WOAH)将其列为法定报告动物疾病,我国也将其列为一类动物疫病。由于ASFV的环境稳定性以及能借助中间宿主软蜱和不易感宿主野猪进行传... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种以高热和出血为特征的急性传染病,世界动物卫生组织(WOAH)将其列为法定报告动物疾病,我国也将其列为一类动物疫病。由于ASFV的环境稳定性以及能借助中间宿主软蜱和不易感宿主野猪进行传播的能力,使其防控具有一定难度。另外,由于缺乏对ASFV庞大的基因组和对应的编码蛋白的了解,其免疫学和疫苗学相关研究也具有一定的挑战。在缺乏具有稳定保护效力的安全疫苗情况下,ASF防控仍以扑杀和生物安全措施为主,这使得在应对ASF的过程中消耗了大量的人力、物力和财力。虽然我国2018年首次暴发ASF疫情后在较短的时间内即控制住了疫情进一步传播,但目前ASF依旧威胁着包括我国在内的全世界养猪行业的发展。本文对ASF的疾病特征、病原学特征和疫苗研发,以及ASFV所引起的天然免疫反应、适应性免疫反应等方面的研究进展进行概述,以期为ASFV的免疫学相关研究和ASF的疫苗研发提供一定的启示。

关键词：非洲猪瘟病毒天然免疫炎症反应细胞凋亡细胞自噬非洲猪瘟疫苗

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A型塞内卡病毒HBWH/1/2018株的分离鉴定及全基因组序列测定

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中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 146-152页

作者：马雪青祁光宇李平花付元芳白兴文包慧芳孙普卢曾军刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司兰州730000

为了鉴定湖北省某猪场水疱性疾病的病原,本研究采用RT-PCR、细胞分离培养、间接免疫荧光检测、电镜观察、病毒基因序列测定及分子进化分析的方法对湖北省某猪场采集的具有水疱样病变的猪水疱皮样品进行了病毒的分离和鉴定及全基因组序... 详细信息

为了鉴定湖北省某猪场水疱性疾病的病原,本研究采用RT-PCR、细胞分离培养、间接免疫荧光检测、电镜观察、病毒基因序列测定及分子进化分析的方法对湖北省某猪场采集的具有水疱样病变的猪水疱皮样品进行了病毒的分离和鉴定及全基因组序列的测定。结果表明:成功分离到1株A型塞内卡病毒(SVA),命名为HBWH/1/2018株。该毒株接种BHK-21细胞培养能够引起明显的致细胞病变效应;免疫荧光试验结果为阳性;病毒滴度为10^(9.35) TCID_(50)/0.1mL;该毒株基因组全长7281 bp(不包括Poly A),开放阅读框为6546 bp,编码2181个氨基酸;VP1核苷酸序列的遗传进化分析表明HBWH/1/2018株与HN01/2017株亲缘关系最近(相似性高达99.4%),而与SVA原型毒株SVV-001株的亲缘关系最远(相似性为91.3%)。本研究不仅丰富了SVA的分子流行病学数据,也为进一步研究SVA的致病机理及相关疫苗的研发奠定了基础。

关键词：塞内卡病毒分离鉴定进化分析

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