检索结果-内蒙古大学图书馆

甘肃畜牧兽医 2016年第1期46卷 81-82,84页

作者：李知新刘光远赵燕田进梅张学军张和平吴润甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 宁夏动物疾病预防控制中心宁夏银川750011

比较两个弓形虫抗体检测试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选可合理使用的商品化试剂盒。对510份猪血清分别进行弓形虫抗体IHA和ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析,用x^2检验分析差异... 详细信息

比较两个弓形虫抗体检测试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选可合理使用的商品化试剂盒。对510份猪血清分别进行弓形虫抗体IHA和ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析,用x^2检验分析差异性。两种试剂盒联合检出79份阳性,阳性符合率为67.52%,阴性符合率为95.17%,总符合率为88.82%。x^2检验差异显著(x^2=228.23,p=0.00);u检验值为15.89,两种产品的一致性为中度一致(Kappa值=0.66)。所以弓形虫病IHA检测试剂盒可作为现场收益流行病学调查,而弓形虫Ig G抗体ELISA检测试剂盒适合辅助临床检测和诊断。x^2检验比较两种试剂盒具有局限性。u检验排除偶然性造成的一致程度,与Kappa检验结合可比较一致性。弓形虫抗体检测要根据实况选择不同的试剂盒。

关键词：弓形虫 Kappa检验 x2检验 u检验 IHA ELISA

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miR-275在长角血蜱不同发育阶段及组织中表达的动态变化

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中国兽医科学 2014年第10期44卷 1014-1021页

作者：王芳芳罗金袁小松谢俊仁田占成王素艳郭锦霞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用Graph... 详细信息

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。

关键词：长角血蜱 microRNA 荧光定量PCR 标准曲线

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血红扇头蜱卵黄原蛋白基因的克隆及生物学特性分析

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中国兽医科学 2014年第10期44卷 991-996页

作者：郭锦霞罗金殷宏罗建勋谢俊仁田占成王素艳王芳芳李奎刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450000

为研究卵黄原蛋白(Vg)基因对蜱虫卵的生理机制作用,参考GenBank中微小扇头蜱(登录号:EU086096)卵黄原蛋白基因的核苷酸序列,设计特异性引物,PCR扩增血红扇头蜱相关基因,将其克隆至pGEM-T Easy载体,并测序。对获得的阳性克隆进行序列分析... 详细信息

为研究卵黄原蛋白(Vg)基因对蜱虫卵的生理机制作用,参考GenBank中微小扇头蜱(登录号:EU086096)卵黄原蛋白基因的核苷酸序列,设计特异性引物,PCR扩增血红扇头蜱相关基因,将其克隆至pGEM-T Easy载体,并测序。对获得的阳性克隆进行序列分析,选取Vg基因的VWFD功能区设计表达引物,构建重组表达载体pGEX-4T-1-Vg,并进行表达纯化。用Western-blot鉴定表达产物的免疫原性。结果显示,获得的1 218bp的核苷酸序列片段与预期结果一致。系统发生树显示,血红扇头蜱与微小扇头蜱具有较高的同源性,两者之间的同源性高达93%,其次与变异革蜱、希伯来花蜱、肩突硬蜱的同源性分别为85%、78%、62%。序列分析显示,该基因含有1个由221个氨基酸组成的VWFD功能区。该功能区重组融合蛋白的分子质量约为51ku。Western-blot分析表明,该重组蛋白与家兔抗血红扇头蜱全蜱阳性血清、家兔抗长角血蜱全蜱阳性血清、家兔抗残缘璃眼蜱全蜱阳性血清以及家兔抗草原革蜱全蜱阳性血清均出现不同程度的反应活性。结果表明,经表达Vg基因VWFD区域而制备的重组抗原对于不同蜱种血清具有广谱性。

关键词：血红扇头蜱卵黄原蛋白基因克隆生物学特性

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亚洲璃眼蜱miR-451与MIF相互关系分析

亚洲璃眼蜱miR-451与MIF相互关系分析

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第五届媒介生物可持续控制国际论坛

作者：罗金陈泽任巧云殷宏罗建勋刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

目的为研究亚洲璃眼蜱miR-451对其靶基因巨噬细胞游走因子表达水平的影响.方法参考高通量测序获得的亚洲璃眼蜱miR-451序列,设计茎环及PCR引物,扩增获得该蜱种miR-451序列;并通过基因合成获得抑制miR-451的dsRNA序列,用于亚洲璃眼蜱... 详细信息

目的为研究亚洲璃眼蜱miR-451对其靶基因巨噬细胞游走因子表达水平的影响.方法参考高通量测序获得的亚洲璃眼蜱miR-451序列,设计茎环及PCR引物,扩增获得该蜱种miR-451序列;并通过基因合成获得抑制miR-451的dsRNA序列,用于亚洲璃眼蜱饥饿成蜱体内注射.根据亚洲璃眼蜱MIF基因(暂未登录序列),设计特异性MIF基因的实时荧光定量引物,以β-actin基因作为内参,采用SYBR Green mal-timeRT-PCR方法检测注射dsRNA后亚洲璃眼蜱饥饿成蜱不同时间点MIF基因的表达水平,以及miR-451的表达情况.结果通过PCR扩增测序验证miR-451的成熟体序列为AAACCG UUA CCA UUA CUG AGU UU,大小为23bp.注射dsRNA后,实验组MIF基因表达量在6-18h明显低于对照组,24-48h明显高于对照组;48-84h水平一致,90-108两组MIF表达量均有明显升高,且实验组明显早于对照组.注射dsRNA后,实验组miR-451的表达量在0-6h明显升高且高于对照组,6-30h逐渐降低;54h时明显升高,且明显高于对照组,随后降低与对照组水平一致.结论本研究初步探讨了抑制miR-451后其靶基因MIF相对表达量的变化,为进一步研究亚洲璃眼蜱miR-451与MIF基因的相互作用提供参考.证明,miRNA参与基因功能的调控具有一定的功能特异性和时序性.

关键词：亚洲璃眼蜱 microRNA-451 巨噬细胞抑制游走因 MIF

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微小牛蜱饱血雌蜱高毒力昆虫病原真菌菌株的筛选

微小牛蜱饱血雌蜱高毒力昆虫病原真菌菌株的筛选

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第五届媒介生物可持续控制国际论坛

作者：任巧云陈泽罗金孙明关贵全殷宏刘光远罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

目的微小牛蜱是动物体表常见的一类体外寄生虫,可通过叮咬侵袭家畜和野生动物,有时也侵袭人,微小牛蜱给畜牧业造成严重经济损失,并且给人类健康和动物生产带来的威胁.随着人们对药物残留和环境污染等问题的关注,加之某些蜱耐药性虫株... 详细信息

目的微小牛蜱是动物体表常见的一类体外寄生虫,可通过叮咬侵袭家畜和野生动物,有时也侵袭人,微小牛蜱给畜牧业造成严重经济损失,并且给人类健康和动物生产带来的威胁.随着人们对药物残留和环境污染等问题的关注,加之某些蜱耐药性虫株的产生,人们越来越重视对蜱的生物防治等绿色防控方法的研究.方法本试验进行了13株白僵菌和7株绿僵菌对微小牛蜱饱血雌蜱的毒力测定,采用体外浸渍法将随机分组的微小牛蜱饱血雌蜱浸入不同浓度的孢子悬液中,浸渍30 s.在28℃、相对湿度85％的条件下放置15 d,每天观察微小牛蜱,每个处理设3个重复,以含0.05 ml/L吐温80的无菌水做对照.结果从中筛选出了4株高毒力菌株：3株白僵菌(BbAT01、***03、***13)和一株绿僵菌(***04),此四株菌在孢子浓度为108个孢子/ml时对蜱的致死率均达到100％.结论此4株真菌菌株可作为微小牛蜱生防制剂的候选菌株,为后续昆虫病原真菌杀蜱制剂的研究及生产应用提供了参考依据.

关键词：微小牛蜱昆虫病原真菌致病性

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基于16S rDNA的长角血蜱不同分布区的多态性分析

基于16S rDNA的长角血蜱不同分布区的多态性分析

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第五届媒介生物可持续控制国际论坛

作者：陈泽任巧云罗金李凯罗建勋殷宏刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

目的调查长角血蜱在我国的分布现状，并基于16S rDNA序列对其进行多态性分析.方法用PCR技术克隆长角血蜱16S rDNA序列，其长度约为430 bp.利用Clustal X2.0.11对这些基因序列进行比对，然后用TCS 1.2.1进行不同地理分布的长角血蜱进... 详细信息

目的调查长角血蜱在我国的分布现状，并基于16S rDNA序列对其进行多态性分析.方法用PCR技术克隆长角血蜱16S rDNA序列，其长度约为430 bp.利用Clustal X2.0.11对这些基因序列进行比对，然后用TCS 1.2.1进行不同地理分布的长角血蜱进行多态性分析.结果长角血蜱存在8种单倍型，其中Ⅰ型和Ⅱ型最为常见，分别含有21和16个个体，其次为Ⅲ、Ⅳ型分别包括4和5个个体.Ⅴ-Ⅷ型均由单一个体构成.此外，同一地区的不同个体也包括几种不同的单倍型，其中北京和贵州独山的长角血蜱多态性最大(数量分别为4和3)，其次为湖北、广西和山东(单倍型均为2种)，云南、甘肃和河北的多态性最低(1种).结论我国分布的长角血蜱的16S rDNA具有较高的多态性，并具有一定的地区特异性.

关键词： 16S rRNA基因长角血蜱多态性分析

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长角血蜱MESK基因的克隆及其生物学特性分析

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中国兽医科学 2013年第8期43卷 806-811页

作者：赵波刘光远罗金张萍田占成谢俊仁田美媛王芳芳袁小松中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了... 详细信息

为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了表达。48h后对细胞进行裂解,用兔抗长角血蜱阳性血清与表达出的重组蛋白进行反应,以检测重组蛋白的免疫活性。结果显示,MESK基因全长为1 426bp,包括1个1 185bp的开放阅读框。该基因含有5个N-糖基化位点、5个豆蔻酰化位点、9个酪氨酸蛋白Ⅱ激酶磷酸化位点、1个酪氨酸蛋白激酶位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、1个蛋白磷酸激酶C磷酸化位点。SDS-PAGE分析及Western-blot分析表明,表达出的重组蛋白的分子质量约为71ku,且以与兔抗长角血蜱阳性血清反应,免疫原性良好。结果表明,MESK基因可以作为一种重要的分子标记参与蜱分类的研究,在作为候选抗蜱疫苗的研究中具有重要的开发价值。

关键词：长角血蜱 MESK基因生物信息学克隆真核表达

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microRNA碱基编辑特性的研究进展

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 650-654页

作者：罗金刘光远袁小松王芳芳田占成谢俊仁王辉中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 牛津大学生态水文研究中心

为了更好地了解microRNA分子中碱基编辑的产生机理,论述了microRNA序列碱基编辑特征,以及碱基编辑在生物组织、物种进化、神经发育等方面的特征,并就碱基编辑在microRNA中的研究方法进行了阐述。展望了碱基编辑在microRNA分子中的研究前... 详细信息

为了更好地了解microRNA分子中碱基编辑的产生机理,论述了microRNA序列碱基编辑特征,以及碱基编辑在生物组织、物种进化、神经发育等方面的特征,并就碱基编辑在microRNA中的研究方法进行了阐述。展望了碱基编辑在microRNA分子中的研究前景,以期为碱基编辑的生物学机制研究提供参考。

关键词： microRNA 碱基编辑研究进展

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长角血蜱卵中miR:275荧光定量PCR标准曲线的建立

长角血蜱卵中miR:275荧光定量PCR标准曲线的建立

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：王芳芳刘光远罗金袁小松田占成谢俊仁王素艳郭锦霞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为了研究miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况,采用实时相对荧光定量PCR,构建miR-275、内参基因的标准质粒和标准曲线.根据成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,通过qRT-PCR检测miR-275在长角血蜱卵中的表达量.... 详细信息

为了研究miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况,采用实时相对荧光定量PCR,构建miR-275、内参基因的标准质粒和标准曲线.根据成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,通过qRT-PCR检测miR-275在长角血蜱卵中的表达量.将克隆出的约70bp左右的miR-275片段插入到pGEM-T Easy载体中,成功构建了原核表达载体,转化***,对鉴定的阳性克隆进行序列测定,并用标准化的阳性质粒进行绝对荧光定量PCR标准曲线的制备.结果显示,本实验建立的miR-275和β-actin标准曲线斜率分别为M=-2.982,M=-3.038,回归系数分别为R2=0.999,R2=0.997,说明线性关系良好、产物溶解曲线峰值单一、无引物二聚体及引物特异性高;重复性实验结果显示所构建的重组质粒Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5％,表明标准曲线重复性好、稳定性高.本研究建立的方法简单、准确、敏感、特异性强,成功构建的miRNA标准曲线为后续miR-275在卵中功能的研究奠定了良好基础.

关键词：兽医学长角血蜱荧光定量PCR 标准曲线基因序列

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Hlo:miR:275在长角血蜱卵中的表达动态变化

Hlo:miR:275在长角血蜱卵中的表达动态变化

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

基于microRNA的重要性及其在寄生虫和寄生虫病防控方面的潜在应用价值,本研究就hlo-miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况进行了分析.根据数据库中hlo-miR-275的成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时根据Gene... 详细信息

基于microRNA的重要性及其在寄生虫和寄生虫病防控方面的潜在应用价值,本研究就hlo-miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况进行了分析.根据数据库中hlo-miR-275的成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时根据GeneBank中长角血蜱β-actin基因编码区保守序列,设计特异性引物进行扩增.将克隆出的约70bp左右的hlo-miR-275、β-actin片段插入到pGEM-T Easy载体中,成功构建了原核表达载体,转化***,对鉴定的阳性克隆进行序列测定,并用标准化的阳性质粒进行绝对荧光定量PCR标准曲线的建立;计算hlo-miR-275标准拷贝数,通过SPSS软件分析其在长角血蜱卵不同发育时期的表达显著性差异.本实验建立的miR-275和β-actin标准曲线斜率分别为M=-2.982,M=-3.038,回归系数分别为R2=0.999,R2=0.997,说明线性关系良好;产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;重复性实验结果显示所构建的重组质粒Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5％,说明标准曲线重复性好,稳定性高.本研究建立了hlo-miR-275、β-actin的标准曲线,为研究hlo-miR-275在长角血蜱中的生物学意义奠定了基础,也为研究miR-275在其它近源物种中的作用提供了有价值的参考.

关键词：兽医学长角血蜱荧光定量PCR 标准曲线动态变化

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