检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2019年第5期49卷 567-573页

作者：曲志强张亮罗金陈泽任巧云刘文阁倪军许肖枫吴泽功罗建勋殷宏孙晓林刘光远甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的1... 详细信息

为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的18种不同物种的氨基酸序列构建遗传发育树,结果表明本实验获得的双芽巴贝斯虫与美国株和中国新疆株的亲缘关系最近。对其氨基酸序列进行比对分析,发现在第31～85位点存在冗余,与公布的Hsp20氨基酸序列存在明显的差异。通过同源建模分析,发现该冗余致使Hsp20蛋白在第7号位形成1个环形结构,从而引起了第3号位的拉伸。通过生物信息学分析得出,获得的双芽巴贝斯虫甘肃株的Hsp20基因是一新基因型。该基因型的存在为更加准确诊断双芽巴贝斯虫病提供了依据。

关键词：双芽巴贝斯虫 Hsp20 基因型生物学特征

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18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成沈辉中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室

通过泰勒虫和巴贝斯虫18S rRNA V4高变区核苷酸序列的对比,分析两物种之间该序列的结构特征,并确定马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位。参考GenBank中公布的马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)基因序列设计引物,分别获得53... 详细信息

通过泰勒虫和巴贝斯虫18S rRNA V4高变区核苷酸序列的对比,分析两物种之间该序列的结构特征,并确定马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位。参考GenBank中公布的马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)基因序列设计引物,分别获得531bp和452bp的核苷酸片段。该序列克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与GenBank中公布的30种不同原虫的18S rRNA核苷酸序列构建系统发生树。利用clustal x将这些系列对齐,分析泰勒虫及巴贝斯虫核苷酸序列之间的差异。泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的亲缘关系,他们同处于一个分支。序列对齐分析显示,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变。该种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据之一。马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫种。

关键词：泰勒虫核苷酸序列巴贝斯虫梨形虫序列差异分类学

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长角血蜱成蜱免疫家兔模型的建立及对生长发育的影响

长角血蜱成蜱免疫家兔模型的建立及对生长发育的影响

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：谢俊仁刘光远田占成龚真莉刘建刚张丽艳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室

每隔2周用长角血蜱成蜱定量感染家兔,成功构建了具有不同抵抗力的家兔免疫模型。ELISA检测结果表明,家兔血清中的抗体效价从初次叮咬后第3周开始呈阳性,随着叮咬次数的增加抗体水平逐渐地上升,第11周时达到高峰。具有一定抵抗力的家兔... 详细信息

每隔2周用长角血蜱成蜱定量感染家兔,成功构建了具有不同抵抗力的家兔免疫模型。ELISA检测结果表明,家兔血清中的抗体效价从初次叮咬后第3周开始呈阳性,随着叮咬次数的增加抗体水平逐渐地上升,第11周时达到高峰。具有一定抵抗力的家兔对长角血蜱成蜱的吸血和生长发育影响显著,其抗体水平与长角血蜱成蜱在兔体的吸血周期、死亡率成正相关,与雌蜱的饱血脱落率、饱血体重成负相关。结果进一步证明,蜱的唾液腺是其主要的免疫器官之一。家兔抗体水平的持续期足以使长角血蜱完成一个世代,可以满足试验需求,是抗蜱免疫研究理想的阳性对照模型。同时,血清中特异性抗体的效价也可以作为判定动物对长角血蜱抵抗力强弱的重要指标之一。

关键词：长角血蜱成蜱免疫模型生长发育

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长角血蜱卵中miR:275荧光定量PCR标准曲线的建立

长角血蜱卵中miR:275荧光定量PCR标准曲线的建立

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：王芳芳刘光远罗金袁小松田占成谢俊仁王素艳郭锦霞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为了研究miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况,采用实时相对荧光定量PCR,构建miR-275、内参基因的标准质粒和标准曲线.根据成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,通过qRT-PCR检测miR-275在长角血蜱卵中的表达量.... 详细信息

为了研究miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况,采用实时相对荧光定量PCR,构建miR-275、内参基因的标准质粒和标准曲线.根据成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,通过qRT-PCR检测miR-275在长角血蜱卵中的表达量.将克隆出的约70bp左右的miR-275片段插入到pGEM-T Easy载体中,成功构建了原核表达载体,转化***,对鉴定的阳性克隆进行序列测定,并用标准化的阳性质粒进行绝对荧光定量PCR标准曲线的制备.结果显示,本实验建立的miR-275和β-actin标准曲线斜率分别为M=-2.982,M=-3.038,回归系数分别为R2=0.999,R2=0.997,说明线性关系良好、产物溶解曲线峰值单一、无引物二聚体及引物特异性高;重复性实验结果显示所构建的重组质粒Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5％,表明标准曲线重复性好、稳定性高.本研究建立的方法简单、准确、敏感、特异性强,成功构建的miRNA标准曲线为后续miR-275在卵中功能的研究奠定了良好基础.

关键词：兽医学长角血蜱荧光定量PCR 标准曲线基因序列

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Hlo:miR:275在长角血蜱卵中的表达动态变化

Hlo:miR:275在长角血蜱卵中的表达动态变化

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

基于microRNA的重要性及其在寄生虫和寄生虫病防控方面的潜在应用价值,本研究就hlo-miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况进行了分析.根据数据库中hlo-miR-275的成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时根据Gene... 详细信息

基于microRNA的重要性及其在寄生虫和寄生虫病防控方面的潜在应用价值,本研究就hlo-miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况进行了分析.根据数据库中hlo-miR-275的成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时根据GeneBank中长角血蜱β-actin基因编码区保守序列,设计特异性引物进行扩增.将克隆出的约70bp左右的hlo-miR-275、β-actin片段插入到pGEM-T Easy载体中,成功构建了原核表达载体,转化***,对鉴定的阳性克隆进行序列测定,并用标准化的阳性质粒进行绝对荧光定量PCR标准曲线的建立;计算hlo-miR-275标准拷贝数,通过SPSS软件分析其在长角血蜱卵不同发育时期的表达显著性差异.本实验建立的miR-275和β-actin标准曲线斜率分别为M=-2.982,M=-3.038,回归系数分别为R2=0.999,R2=0.997,说明线性关系良好;产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;重复性实验结果显示所构建的重组质粒Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5％,说明标准曲线重复性好,稳定性高.本研究建立了hlo-miR-275、β-actin的标准曲线,为研究hlo-miR-275在长角血蜱中的生物学意义奠定了基础,也为研究miR-275在其它近源物种中的作用提供了有价值的参考.

关键词：兽医学长角血蜱荧光定量PCR 标准曲线动态变化

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Bantam在长角血蜱不同变态发育时期表达谱及代谢通路分析

Bantam在长角血蜱不同变态发育时期表达谱及代谢通路分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成袁晓松王芳芳郭锦霞王素艳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

本研究参考miRBase数据库中Bantam序列,设计特异性引物,RT-PCR方法获得Bantam序列并进行生物信息学分析.利用qRT-PCR分析长角血蜱不同变态发育过程中Bantam的表达谱特征.预测其靶标基因,Cytoscape_v2.8软件模拟B antam与潜在靶标基因在... 详细信息

本研究参考miRBase数据库中Bantam序列,设计特异性引物,RT-PCR方法获得Bantam序列并进行生物信息学分析.利用qRT-PCR分析长角血蜱不同变态发育过程中Bantam的表达谱特征.预测其靶标基因,Cytoscape_v2.8软件模拟B antam与潜在靶标基因在代谢通路中的相互作用.Bantam序列高度保守,长角血蜱与果蝇有较近的亲缘关系.其表达丰度在卵中最高,幼蜱阶段次之,而在成蜱阶段最低.比较而言,卵中的表达丰度和蜱发育的其他阶段表达丰度差异显著(P＜0.05),幼蜱,若蜱以及成蜱之间仅有较小差异.代谢通路结果显示,Bantam可对多个靶基因进行转录后调控.同时一个靶基因也可能受到多个miRNA分子的调控.不同物种来源的Bantam序列高度保守,并在蜱不同变态发育时期具有一定的时序性.参与多个基因的表达调控过程,亦协同其他miRNA分子对靶基因功能的发挥起着重要的作用.

关键词：兽医学长角血蜱变态发育基因表达谱

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亚洲璃眼蜱miR-451与MIF相互关系分析

亚洲璃眼蜱miR-451与MIF相互关系分析

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第五届媒介生物可持续控制国际论坛

作者：罗金陈泽任巧云殷宏罗建勋刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

目的为研究亚洲璃眼蜱miR-451对其靶基因巨噬细胞游走因子表达水平的影响.方法参考高通量测序获得的亚洲璃眼蜱miR-451序列,设计茎环及PCR引物,扩增获得该蜱种miR-451序列;并通过基因合成获得抑制miR-451的dsRNA序列,用于亚洲璃眼蜱... 详细信息

目的为研究亚洲璃眼蜱miR-451对其靶基因巨噬细胞游走因子表达水平的影响.方法参考高通量测序获得的亚洲璃眼蜱miR-451序列,设计茎环及PCR引物,扩增获得该蜱种miR-451序列;并通过基因合成获得抑制miR-451的dsRNA序列,用于亚洲璃眼蜱饥饿成蜱体内注射.根据亚洲璃眼蜱MIF基因(暂未登录序列),设计特异性MIF基因的实时荧光定量引物,以β-actin基因作为内参,采用SYBR Green mal-timeRT-PCR方法检测注射dsRNA后亚洲璃眼蜱饥饿成蜱不同时间点MIF基因的表达水平,以及miR-451的表达情况.结果通过PCR扩增测序验证miR-451的成熟体序列为AAACCG UUA CCA UUA CUG AGU UU,大小为23bp.注射dsRNA后,实验组MIF基因表达量在6-18h明显低于对照组,24-48h明显高于对照组;48-84h水平一致,90-108两组MIF表达量均有明显升高,且实验组明显早于对照组.注射dsRNA后,实验组miR-451的表达量在0-6h明显升高且高于对照组,6-30h逐渐降低;54h时明显升高,且明显高于对照组,随后降低与对照组水平一致.结论本研究初步探讨了抑制miR-451后其靶基因MIF相对表达量的变化,为进一步研究亚洲璃眼蜱miR-451与MIF基因的相互作用提供参考.证明,miRNA参与基因功能的调控具有一定的功能特异性和时序性.

关键词：亚洲璃眼蜱 microRNA-451 巨噬细胞抑制游走因 MIF

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黑龙江省三地蜱体内Q热病原的感染情况和分子特征

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中国兽医科学 2021年第11期51卷 1385-1391页

作者：罗金李静张高峰刘佩雯罗文蔚苏小玲任巧云刘文阁曹润来刁培文孙世弟关贵全罗建勋殷宏李祥瑞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 中农威特生物科技股份有限公司青海西宁8100001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730046 甘肃省兰州新区农林水务局甘肃兰州730300 青海省动物疫病预防控制中心甘肃兰州7300701

为了解贝氏柯克斯体伴随蜱活动的流行特征以及该病原的分子特征,采用布旗法收集黑龙江省伊春、鹤岗及佳木斯等地共计461份饥饿蜱,并通过形态学鉴定其种类。经PCR扩增病原的16S rRNA基因,并测序,分析统计不同蜱种感染贝氏柯克斯体阳性率... 详细信息

为了解贝氏柯克斯体伴随蜱活动的流行特征以及该病原的分子特征,采用布旗法收集黑龙江省伊春、鹤岗及佳木斯等地共计461份饥饿蜱,并通过形态学鉴定其种类。经PCR扩增病原的16S rRNA基因,并测序,分析统计不同蜱种感染贝氏柯克斯体阳性率。采用Neighbor-Joining方法构建遗传进化树,分析不同地域不同蜱种来源贝氏柯克斯体的遗传进化关系。形态学鉴定结果表明,收集的蜱种主要包括日本血蜱(n=102)、全沟硬蜱(n=97)、森林革蜱(n=150)以及嗜群血蜱(n=112)。其中,日本血蜱的贝氏柯克斯体感染率高达12%,嗜群血蜱的贝氏柯克斯体感染率为6%,而全沟硬蜱及森林革蜱的贝氏柯克斯体感染率均为4%。基于16S rRNA序列分析表明,贝氏柯克斯体是一类高度保守的病原,不同地方株之间序列差异不显著。且贝氏柯克斯体与多个变形菌有着较近的亲缘关系,特别是G-变形菌在长期的进化过程中,有一支分化为贝氏柯克斯体,另外一支依然保持了G-变形菌的分子特征。基于上述分析,贝氏柯克斯体作为一种重要的人兽共患病原,可在多种蜱体内广泛存在,但其感染率略有不同。该病原的存在会给当地家畜及人的活动造成潜在的危害,为该病原的防控提出了挑战。因此,加强当地家畜饲养管理将成为首要解决的问题。其次,杀蜱也是防控Q热病原极其有效的方法。

关键词：蜱贝氏柯克斯体 Q热流行病学调查

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微小牛蜱饱血雌蜱高毒力昆虫病原真菌菌株的筛选

微小牛蜱饱血雌蜱高毒力昆虫病原真菌菌株的筛选

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第五届媒介生物可持续控制国际论坛

作者：任巧云陈泽罗金孙明关贵全殷宏刘光远罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

目的微小牛蜱是动物体表常见的一类体外寄生虫,可通过叮咬侵袭家畜和野生动物,有时也侵袭人,微小牛蜱给畜牧业造成严重经济损失,并且给人类健康和动物生产带来的威胁.随着人们对药物残留和环境污染等问题的关注,加之某些蜱耐药性虫株... 详细信息

目的微小牛蜱是动物体表常见的一类体外寄生虫,可通过叮咬侵袭家畜和野生动物,有时也侵袭人,微小牛蜱给畜牧业造成严重经济损失,并且给人类健康和动物生产带来的威胁.随着人们对药物残留和环境污染等问题的关注,加之某些蜱耐药性虫株的产生,人们越来越重视对蜱的生物防治等绿色防控方法的研究.方法本试验进行了13株白僵菌和7株绿僵菌对微小牛蜱饱血雌蜱的毒力测定,采用体外浸渍法将随机分组的微小牛蜱饱血雌蜱浸入不同浓度的孢子悬液中,浸渍30 s.在28℃、相对湿度85％的条件下放置15 d,每天观察微小牛蜱,每个处理设3个重复,以含0.05 ml/L吐温80的无菌水做对照.结果从中筛选出了4株高毒力菌株：3株白僵菌(BbAT01、***03、***13)和一株绿僵菌(***04),此四株菌在孢子浓度为108个孢子/ml时对蜱的致死率均达到100％.结论此4株真菌菌株可作为微小牛蜱生防制剂的候选菌株,为后续昆虫病原真菌杀蜱制剂的研究及生产应用提供了参考依据.

关键词：微小牛蜱昆虫病原真菌致病性

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甘肃省庆阳地区泰勒虫病流行趋势及分子特征分析

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中国兽医科学 2020年第8期50卷 946-951页

作者：罗金谭阳春仇晓飞马雨楠黄学智禹晓宁梁会锋李军岗李利娟程保伟吴泽功倪军许肖枫殷宏罗建勋李祥瑞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 北京大学肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所实验动物室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142 泾源县六盘山畜牧兽医工作站宁夏固原756400 郏县畜牧局河南郏县467100

泰勒虫引起的泰勒虫病作为危害畜牧养殖业的重要血液原虫疾病受到人们的广泛重视。因此,调查清楚某地域泰勒虫流行对于该病的早期预防有着积极的意义。本研究通过对位于陕西、甘肃、宁夏三省区的交汇处的庆阳地区蜱虫分布的调查,并进一... 详细信息

泰勒虫引起的泰勒虫病作为危害畜牧养殖业的重要血液原虫疾病受到人们的广泛重视。因此,调查清楚某地域泰勒虫流行对于该病的早期预防有着积极的意义。本研究通过对位于陕西、甘肃、宁夏三省区的交汇处的庆阳地区蜱虫分布的调查,并进一步进行了蜱所携带的泰勒虫进行了分子鉴定。结果显示,庆阳地区蜱虫优势种以长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)为主,兼有小亚璃眼蜱(Hyalomma anatolicum anatolicum),青海血蜱(***)的分布。其传播的泰勒虫主要是瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti),东方泰勒虫(T. orientalis),环形泰勒虫(T. annulata)以及感染羊的吕氏泰勒虫(T. luwenshuni),尤氏泰勒虫(T. uilenbergi)等,此外还有泰勒虫未定种(Theileria sp.)的寄生。统计显示在收集的300头份牛血液中瑟氏泰勒虫感染率高达74.58%,东方泰勒虫感染率72.36%,环形泰勒虫感染率12.54%。收集的200头份羊血液中吕氏泰勒虫感染率63.58%,尤氏泰勒虫感染率53.62%。而长角血蜱感染泰勒虫的感染率高达87.76%,小亚璃眼蜱感染率为47.62%,青海血蜱感染率46.43%。由此可见,庆阳地区蜱虫分布虽然较为单一,但其传播的泰勒虫病原具有多样性,值得注意的是不论家畜还是蜱虫对于泰勒虫的感染均较高。这为当地的该疾病的防控带来了挑战。因此,加强当地家畜饲养管理将成为首要解决的问题;其次杀蜱也是防控泰勒虫病极其有效的方法。

关键词：蜱梨形虫泰勒虫庆阳

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