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生物技术通报 2010年第5期26卷 70-73页

作者：刘明徐娜李志勇柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

口蹄疫是偶蹄动物的一种急性,热性,高度接触性传染病,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失。本文综述了目前口蹄疫诊断技术的研究进展,其中包括了病毒分离技术等传统的诊断方法,以及血清学诊断方法,还介绍了环介导等温扩增技术等... 详细信息

口蹄疫是偶蹄动物的一种急性,热性,高度接触性传染病,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失。本文综述了目前口蹄疫诊断技术的研究进展,其中包括了病毒分离技术等传统的诊断方法,以及血清学诊断方法,还介绍了环介导等温扩增技术等几种新的诊断技术。

关键词：口蹄疫诊断技术研究进展

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猪圆环病毒Ⅱ型的研究进展

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生物技术通报 2010年第6期26卷 22-26页

作者：徐娜李宝玉娄忠子柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus type2,PCV-2)是引起猪圆环病毒病(porcine circovirus desease,PCVD)的主要病原,在猪群中广泛存在。本病毒可以单独或者与其它病原混合感染猪只,引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、育肥猪皮炎与... 详细信息

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus type2,PCV-2)是引起猪圆环病毒病(porcine circovirus desease,PCVD)的主要病原,在猪群中广泛存在。本病毒可以单独或者与其它病原混合感染猪只,引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、育肥猪皮炎与肾病综合征(PDNS)等一系列较为复杂的疾病,严重威胁猪只的健康。经过10余年持续不断的努力,各国对PCV-2的研究日益深入,对病毒的相关特性也有了较为清晰的认识。对病毒的病原学、流行病学、致病机理、临床症状、病理变化、诊断和防制对策等方面的研究进展进行了简要综述。

关键词：猪圆环病毒病原学致病机理诊断防制

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转基因植物疫苗研究进展

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生物技术通报 2010年第4期26卷 28-32页

作者：李杨李志勇柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

疫苗是当今世界上控制及预防疾病发生的有效方法,利用植物作为生物反应器生产转基因疫苗,成本低廉,方便安全等特点,被认为新型疫苗的研究热点。从4个方面综述了转基因疫苗的研究概况,分析了其优点及不足,并对其未来的发展进行了展望。

关键词：转基因植物疫苗研究进展

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猪流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及原核表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第7期38卷 33-38,43页

作者：李西玉许信刚周继章邱昌庆曹小安宫晓炜王光华西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

【目的】克隆猪流产嗜性衣原体青海株主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的猪流产嗜性衣原体MOMP基因的核苷酸序列,设计并合成4条特异性引物,用套式PCR方法扩增... 详细信息

【目的】克隆猪流产嗜性衣原体青海株主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的猪流产嗜性衣原体MOMP基因的核苷酸序列,设计并合成4条特异性引物,用套式PCR方法扩增猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,将其克隆入pMD18-T载体中,进行测序及序列分析。然后将MOMP基因亚克隆入原核表达载体pGEX4T-1中,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测。【结果】扩增到猪流产嗜性衣原体青海株1170bp的MOMP全长基因。序列分析结果表明,该基因与已发表的猪流产嗜性衣原体B11001株和CP/12株核苷酸同源性均为99.7%。SDS-PAGE电泳可检测到分子质量约为66ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,重组蛋白可被猪流产嗜性衣原体抗体识别。【结论】成功克隆了猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,并进行了原核表达,表达的蛋白具有抗原活性。

关键词：猪流产嗜性衣原体 MOMP蛋白原核表达

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猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0708株的分离鉴定及其Nsp2基因的遗传变异分析

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中国畜牧兽医 2010年第10期37卷 58-63页

作者：贾怀杰陈国华房永祥王晓霞李小庆莫斯科瞿惠玲景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃省兽医局兰州730030

采集江西省某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,RT-PCR检测可扩增出PRRSV ORF7特异性片段,序列分析发现其与美洲型毒株序列一致性达93.9%以上,与欧洲型毒株仅为69.8%。将采集的脑和肺脏处理后接种Marc-145细胞盲传,在盲传的细胞中可扩增... 详细信息

采集江西省某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,RT-PCR检测可扩增出PRRSV ORF7特异性片段,序列分析发现其与美洲型毒株序列一致性达93.9%以上,与欧洲型毒株仅为69.8%。将采集的脑和肺脏处理后接种Marc-145细胞盲传,在盲传的细胞中可扩增到PRRSV ORF7特异性片段,传至第6代时出现明显的细胞病变;将该毒株NSP2非结构蛋白基因测序分析,发现其编码的氨基酸与国内近年来分离的高致病性PRRSV毒株有较高的同源性,与美洲型代表株VR-2332相比缺失第482位和533-561位共30个氨基酸;纯化病毒并进行电镜观察,可见典型的PRRSV病毒粒子。第8代的细胞毒回归30日龄仔猪,可观察到猪繁殖与呼吸综合征典型症状和病理变化。这表明已成功地分离到1株美洲型PRRSV变异株,命名为JX0708株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 JX0708株分离鉴定 Nsp2基因遗传变异分析

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猪圆环病毒2型甘肃兰州株全基因组序列的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医 2010年第1期37卷 45-50页

作者：贾怀杰景志忠房永祥王晓霞陈国华李克斌窦永喜瞿惠玲中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃省兽医局兰州730030

参照GenBank中登录的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组序列,设计合成了2对特异性引物,从甘肃兰州疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病料中提取PCV2基因组DNA,分段PCR扩增全长基因组。回收PCR产物,将其插入pGEM-T Easy载体,构建了重组质粒p... 详细信息

参照GenBank中登录的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组序列,设计合成了2对特异性引物,从甘肃兰州疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病料中提取PCV2基因组DNA,分段PCR扩增全长基因组。回收PCR产物,将其插入pGEM-T Easy载体,构建了重组质粒pGEM-PCV2,转化后筛选、提取阳性重组质粒进行测序。结果表明,克隆到的PCV2全基因组长为1767 bp。应用DNAStar序列分析软件对所测PCV2序列与GenBank中登录的包括甘肃在内的国内外PCV2毒株进行同源性分析。结果显示,克隆的PCV2与ZhouKou(EU656143)毒株遗传关系较近,其核苷酸和推导的氨基酸序列同源性高达99.4%、98.6%,与已报道的GS03(EU547458)甘肃毒株遗传关系较远,可能是流行于甘肃兰州的一个变异毒株GSLZ(GenBank登录号为:FJ447482)。

关键词：猪圆环病毒2型基因组克隆序列分析

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产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因克隆与表达

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浙江农业学报 2010年第2期22卷 145-149页

作者：王光华周继章蔺国珍郑福英曹小安邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1194bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NcoⅠ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET-28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切... 详细信息

用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1194bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NcoⅠ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET-28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切和核苷酸序列分析,证明重组质粒pET-28a-CPA含有产气荚膜梭菌α毒素基因,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,目的基因获得了良好表达。以羊抗α毒素多克隆血清进行Western blot分析,抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应,表明目的蛋白具有较好的免疫原性。

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素基因基因克隆核苷酸序列

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腺病毒在动物口蹄疫防治中的研究进展

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江苏农业科学 2010年第2期38卷 240-241页

作者：王猛刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

由于腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合到动物宿主细胞染色体等优点,已被认为是最有效的转基因载体之一,成为重组疫苗和基因治疗研究的热点。本文就腺病毒载体的生物学特性、研究进展及在口蹄疫防治... 详细信息

由于腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合到动物宿主细胞染色体等优点,已被认为是最有效的转基因载体之一,成为重组疫苗和基因治疗研究的热点。本文就腺病毒载体的生物学特性、研究进展及在口蹄疫防治中发挥的重要作用进行综述。

关键词：腺病毒载体重组疫苗 shRNA 干扰素口蹄疫

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猪囊尾蚴AgB重组质粒在免疫小鼠体内的表达及其抗体水平检测

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中国预防兽医学报 2010年第6期32卷 488-490页

作者：巩伟侯俊玲骆学农张少华郭爱疆才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生病重点实验室甘肃兰州730046 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

为评价猪囊尾蚴副肌球蛋白(AgB)真核表达重组质粒作为候选DNA疫苗的免疫效果,本研究将猪囊尾蚴AgB基因亚克隆于真核表达载体pVAX1中构建了重组表达质粒pVAX1-AgB;将pVAX1-AgB与ISA206佐剂按1:1体积比乳化,以每只100μg的剂量,肌肉注免疫... 详细信息

为评价猪囊尾蚴副肌球蛋白(AgB)真核表达重组质粒作为候选DNA疫苗的免疫效果,本研究将猪囊尾蚴AgB基因亚克隆于真核表达载体pVAX1中构建了重组表达质粒pVAX1-AgB;将pVAX1-AgB与ISA206佐剂按1:1体积比乳化,以每只100μg的剂量,肌肉注免疫5周龄左右的BALB/c小鼠,3周后加强免疫。同时,通过原核表达制备重组AgB蛋白作为ELISA检测抗原,通过间接ELISA方法检测免疫小鼠的抗体水平。结果显示,在小鼠免疫后2周即可检测到抗AgB抗体,6周达到峰值,并维持在较高水平,持续达8个月;实验组血清抗体水平明显高于对照组(p<0.01)。本研究为pVAX1-AgB作为候选DNA疫苗提供了实验依据。

关键词：重组表达质粒 pVAX1 免疫

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牛朊蛋白在COS-7细胞中的表达

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江苏农业学报 2010年第4期26卷 755-759页

作者：丁耀忠张杰刘永生陈豪泰马丽娜马艳平杨生海王猛刘文倩殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

为研究重组蛋白pCI-PrP27-30在COS-7细胞中的表达,用pCI-PrP27-30重组表达载体转染COS-7细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果表明目的蛋白在COS-... 详细信息

为研究重组蛋白pCI-PrP27-30在COS-7细胞中的表达,用pCI-PrP27-30重组表达载体转染COS-7细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果表明目的蛋白在COS-7细胞中成功表达。

关键词：牛朊蛋白 COS-7细胞间接免疫荧光检测技术

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