检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：任巧云孙明关贵全刘志杰陈泽刘爱红李有全马米玲杨吉飞牛庆丽刘军龙韩雪清殷宏罗建勋家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所中国检验检疫科学研究院

目的:青海血蜱为我国的特有蜱种,分布在如青海、宁夏、甘肃、四川、云南和西藏等西部高原地区,是绵羊和山羊特勒虫病的传播媒介,给畜牧业造成严重的经济损失。传统的控蜱方式主要依赖于化学药物,可随着3R(抗性resistance、再增猖獗resur... 详细信息

目的:青海血蜱为我国的特有蜱种,分布在如青海、宁夏、甘肃、四川、云南和西藏等西部高原地区,是绵羊和山羊特勒虫病的传播媒介,给畜牧业造成严重的经济损失。传统的控蜱方式主要依赖于化学药物,可随着3R(抗性resistance、再增猖獗resurgence、残留residue)问题的出现使得人们不得不寻找化学药物安全有效的替代物。对温血动物无害、环境友好、不易产生耐药性且对蜱具高效杀伤作用的绿僵菌也会成为人们对蜱进行绿色防控的重要致病因子。方法:本试验采用体外浸渍法测定了6株绿僵菌在孢子浓度分别为106,107和108个孢子/毫升时对青海血蜱饱血雌蜱的杀伤效果。结论:结果显示绿僵菌菌株M.a AT08和M.a AT13对青海血蜱的致病力较高,在浓度为108个孢子/毫升时,对青海血蜱饱血雌蜱的致死率均达到100%。这两株菌可为防控青海血蜱的候选菌株,为绿僵菌真菌杀蜱制剂的研究及生产应用奠定了基础。

关键词：青海血蜱绿僵菌生物防控昆虫病原真菌

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新疆巴贝斯虫棒状体相关蛋白(RAP-1):多个不同3'末端重复序列的基...

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：牛庆丽 Marchand Jordan 杨聪山 Bonsergent Claire 关贵全殷宏 Laurence Malandrin INRA UMR1300 BiologyEpidemiology and Risk Analysis in Animal Health 家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所

目的:棒状体相关蛋白(Rhoptry-associated protein 1,RAP-1)位于顶复门寄生虫裂殖子的棒状体上,是寄生虫与宿主红细胞粘附后由棒状体分泌的与红细胞入侵相关的蛋白。本研究以羊的新疆巴贝斯虫入侵红细胞过程中分泌的棒状体相关蛋白(RAP... 详细信息

目的:棒状体相关蛋白(Rhoptry-associated protein 1,RAP-1)位于顶复门寄生虫裂殖子的棒状体上,是寄生虫与宿主红细胞粘附后由棒状体分泌的与红细胞入侵相关的蛋白。本研究以羊的新疆巴贝斯虫入侵红细胞过程中分泌的棒状体相关蛋白(RAP-1)为研究对象,扩增和测得rap-1基因序列,研究该虫种rap-1的基因特征,基因进化特征,诊断意义与疫苗的研制将会被讨论。方法:根据rap-1基因保守区设计兼并引物,获得了新疆巴贝斯虫未定种rap-1部分基因序列,Blast分析仅为rap-1a基因型,根据获得的序列设计特异性引物,经过不同引物对的多轮扩增与大量测序。结果:我们发现新疆巴贝斯虫rap-1基因座包括7个不同的基因拷贝,这些拷贝的基因序列可分为三个明显的区域:5‘端的936bp序列完全一致,3’端的147bp中有28个点突变,中间为变异区,包含2-10个序列长度为36bp的重复序列(72to 360 nt)。这些拷贝因此被命名为alpha组(5个拷贝)和beta组(2个拷贝)。变异区的重复序列存在很大差异,但它们编辑的氨基酸序列呈现高度的保守性;B细胞表位预测发现,这些重复序列包含了潜在的B细胞表位,大多数的B细胞表位位于蛋白的C端;RT-PCR对7个不同基因拷贝的体外转录研究发现,至少有6个基因拷贝(4个alpha,2个beta)表达。结论:研究结果表明,RAP-1蛋白的N端保守区可作为多价重组疫苗的组分。

关键词：新疆巴贝斯虫棒状体相关蛋白重复序列疫苗候选基因

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新疆巴贝斯虫棒状体相关蛋白(RAP-1):多个不同3′末端重复序列的...

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

羊巴贝斯虫病是以绵羊巴贝斯虫(Babesia ovis),莫氏巴贝斯虫(***)和粗糙巴贝斯虫(***)为主要病原因子,主要分布在热带和亚热带地区的血液原虫病。临床反应通常以高热,溶血性贫血,黄疸,血红蛋白尿为主要特征,严重时引起死亡。在宿主的红... 详细信息

羊巴贝斯虫病是以绵羊巴贝斯虫(Babesia ovis),莫氏巴贝斯虫(***)和粗糙巴贝斯虫(***)为主要病原因子,主要分布在热带和亚热带地区的血液原虫病。临床反应通常以高热,溶血性贫血,黄疸,血红蛋白尿为主要特征,严重时引起死亡。在宿主的红细胞内进行无性繁殖,有性繁殖发生在传播媒介蜱体内,并通过蜱的叮咬传播到宿主体内,因此巴贝斯虫的分布与其传播媒介-蜱的分布范围相一致。巴贝斯虫病在全球几乎所有的热带、亚热带和温带地区都有流行,对全球范围内的养殖业、宠物健康和经济生产具有重大影响。在我国主要感染绵羊和山羊的巴贝斯虫有若干个巴贝斯虫分离株,分为两个系统进化组:莫氏巴贝斯虫和新疆巴贝斯虫未定种。子孢子和裂殖子是巴贝斯虫在入侵宿主红细胞过程中无性繁殖的两个阶段。在蜱叮咬宿主过程中经唾液腺将子孢子传播到宿主体内,其子孢子直接侵入宿主的红细胞内,以二分裂或四分裂进行裂殖增殖。分裂阶段的裂殖子从裂解的宿主红细胞中释放,侵入新的红细胞开始第二个繁殖周期。一旦裂殖子侵入宿主红细胞内,宿主抗体无法进入红细胞发挥体液免疫功能。因此,阻断裂殖子对红细胞的入侵过程是控制巴贝斯虫感染的关键;裂殖子的表面蛋白或由裂殖子细胞器所分泌的、在入侵过程中发挥作用的蛋白可能作为抗原蛋白或药物靶点,阻断裂殖子入侵宿主红细胞进行无性繁殖被认为是一种具有潜力的防治策略。棒状体相关蛋白(Rhoptry-associated protein 1,RAP-1)位于顶复门寄生虫裂殖子的棒状体上,是寄生虫与宿主红细胞粘附后由棒状体分泌的与红细胞入侵相关的蛋白。目前,关于RAP-1研究主要集中在疟原虫和感染牛的巴贝斯虫等。rap-1属多基因家族,在巴贝斯虫中,最简单的基因结构是牛巴贝斯虫rap-1基因座,仅包括两个几乎同源的rap-1口基因,而双芽巴贝斯虫rap-1基因座结构却极其复杂,由5个rap-1a,5个rap-1b和1个rap-1c,共11个基因组成;并且除了rap-1aβ3外所有的rap-1基因都转录,但转录水平不同,然而rap-1b和rap-1c在体内和体外是不翻译的,而rap-1a蛋白在其裂殖子棒状体中有表达。大多数巴贝斯虫rap-1的基因座组成是比较复杂的,并且不同虫种的rap-1基因拷贝数也不同。羊巴贝斯虫RAP-1基因结构报道较少,仅在1993年,Dalrymple等描述了绵羊巴贝斯虫(***)rap-1基因座的部分结构,发现绵羊巴贝斯虫(B-ovis)的rap-1基因座由5个多态性的rap-1基因随机串联在一起,但未对其基因结构和序列进行详细研究。本研究以羊的新疆巴贝斯虫入侵红细胞过程中分泌的棒状体相关蛋白(RAP-1)为研究对象,扩增和测得rap-1基因序列,研究该虫种rap-1的基因特征,基因进化特征,诊断意义与疫苗的研制将会被讨论。根据rap-1基因保守区设计兼并引物,获得了新疆巴贝斯虫未定种rap-1部分基因序列,Blast分析仅为rap-1a基因型,根据获得的序列设计特异性引物,经过不同引物对的多轮扩增与大量测序,我们发现新疆巴贝斯虫rap-1基因座包括7个不同的基因拷贝,这些拷贝的基因序列可分为三个明显的区域:5‘端的936bp序列完全一致,3'端的147bp中有28个点突变,中间为变异区,包含2-10个序列长度为36bp的重复序列(72 to 360 nt)。这些拷贝因此被命名为alpha组(5个拷贝)和beta组(2个拷贝)。变异区的重复序列存在很大差异,但它们编辑的氨基酸序列呈现高度的保守性;B细胞表位预测发现,这些重复序列包含了潜在的B细胞表位,大多数的B细胞表位位于蛋白的C端;RT-PCR对7个不同基因拷贝的体外转录研究发现,至少有6个基因拷贝(4个alpha,2个beta)表达。研究结果表明,RAP-1蛋白的N端保守区可作为多价重组疫苗的组分。

关键词：新疆巴贝斯虫棒状体相关蛋白重复序列疫苗候选基因

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microRNA碱基编辑在不同蜱种间的差异特征分析

microRNA碱基编辑在不同蜱种间的差异特征分析

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：罗金陈荣贵赵卫东陈泽任巧云陈秋语刘小翠殷宏罗建勋刘光远家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心

目的:保守micro RNA(mi RNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约205个核苷酸,广泛存在于动植物细胞中。mi RNA通过"种子序列"实现对靶标基因的识别,因此,其具有高度保守性。mi RNA通过碱基... 详细信息

目的:保守micro RNA(mi RNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约205个核苷酸,广泛存在于动植物细胞中。mi RNA通过"种子序列"实现对靶标基因的识别,因此,其具有高度保守性。mi RNA通过碱基编辑对多个靶标基因进行调控,这一现象决定了mi RNA的多样性。为了分析蜱mi RNA碱基编辑特征。方法:利用高通量测序方法对我国五个主要的蜱种(微小牛蜱,长角血蜱,银盾革蜱,小亚璃眼蜱,血红扇头蜱)进行mi RNA测序。并将未注释上的小片段RNA序列与mi RBase21(http://***/***)中已知成熟mi RNA序列进行比对(只允许在特定位点的错配)来找出发生了碱基突变的mi RNA。结果:显示表达丰度越高的mi RNA碱基编辑的类型越对,主要有A->G、G->A、G->T、T->C的编辑,且编辑频率也相对较高,平均频率为6.5%。经分析表达丰度越高的mi RNA其编辑种类和编辑频率越高。表明,mi RNA成熟体序列虽然在不同物种中具有较高保守性,但有限数量的mi RNA调控数量繁多的靶标基因,其碱基编辑发挥了重要的作用。表达丰度越高的mi RNA碱基编辑的频率越高,这可能是由于该mi RNA在碱基编辑的多样性条件下调控靶标基因的数目越多,导致其表大量的上调。结论:基于此,可以利用mi RNA的编辑编辑特征,定向改造生物向有利于人类公共卫生健康的方向发展。

关键词：蜱碱基编辑编辑频率种子序列多样性

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microRNA碱基编辑在不同蜱种间的差异特征分析

microRNA碱基编辑在不同蜱种间的差异特征分析

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

保守microRNA(miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20～25个核苷酸,广泛存在于动植物细胞中。miRNA通过"种子序列"实现对靶标基因的识别,因此,其具有高度保守性。miRNA通过碱基编辑对... 详细信息

保守microRNA(miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20～25个核苷酸,广泛存在于动植物细胞中。miRNA通过"种子序列"实现对靶标基因的识别,因此,其具有高度保守性。miRNA通过碱基编辑对多个靶标基因进行调控,这一现象决定了miRNA的多样性。为了分析蜱miRNA碱基编辑特征,利用高通量测序方法对我国五个主要的蜱种(微小牛蜱,长角血蜱,银盾革蜱,小亚璃眼蜱,血红扇头蜱)进行miRNA测序。并将未注释上的小片段RNA序列与miRBase21(http://***/***)中己知成熟miRNA序列进行比对(只允许在特定位点的错配)来找出发生了碱基突变的miRNA。结果显示,表达丰度越高的miRNA碱基编辑的类型越对,主要有A->G、G->A、G->T、T->C的编辑,且编辑频率也相对较高,平均频率为6.5%。经分析表达丰度越高的miRNA其编辑种类和编辑频率越高。表明,miRNA成熟体序列虽然在不同物种中具有较高保守性,但有限数量的miRNA调控数量繁多的靶标基因,其碱基编辑发挥了重要的作用。表达丰度越高的miRNA碱基编辑的频率越高,这可能是由于该miRNA在碱基编辑的多样性条件下调控靶标基因的数目越多,导致其表大量的上调。基于此,可以利用miRNA的编辑编辑特征,定向改造生物向有利于人类公共卫生健康的方向发展。

关键词：蜱碱基编辑编辑频率种子序列多样性

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miR-275在长角血蜱不同发育阶段及组织中表达的动态变化

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中国兽医科学 2014年第10期44卷 1014-1021页

作者：王芳芳罗金袁小松谢俊仁田占成王素艳郭锦霞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用Graph... 详细信息

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。

关键词：长角血蜱 microRNA 荧光定量PCR 标准曲线

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血红扇头蜱卵黄原蛋白基因的克隆及生物学特性分析

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中国兽医科学 2014年第10期44卷 991-996页

作者：郭锦霞罗金殷宏罗建勋谢俊仁田占成王素艳王芳芳李奎刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450000

为研究卵黄原蛋白(Vg)基因对蜱虫卵的生理机制作用,参考GenBank中微小扇头蜱(登录号:EU086096)卵黄原蛋白基因的核苷酸序列,设计特异性引物,PCR扩增血红扇头蜱相关基因,将其克隆至pGEM-T Easy载体,并测序。对获得的阳性克隆进行序列分析... 详细信息

为研究卵黄原蛋白(Vg)基因对蜱虫卵的生理机制作用,参考GenBank中微小扇头蜱(登录号:EU086096)卵黄原蛋白基因的核苷酸序列,设计特异性引物,PCR扩增血红扇头蜱相关基因,将其克隆至pGEM-T Easy载体,并测序。对获得的阳性克隆进行序列分析,选取Vg基因的VWFD功能区设计表达引物,构建重组表达载体pGEX-4T-1-Vg,并进行表达纯化。用Western-blot鉴定表达产物的免疫原性。结果显示,获得的1 218bp的核苷酸序列片段与预期结果一致。系统发生树显示,血红扇头蜱与微小扇头蜱具有较高的同源性,两者之间的同源性高达93%,其次与变异革蜱、希伯来花蜱、肩突硬蜱的同源性分别为85%、78%、62%。序列分析显示,该基因含有1个由221个氨基酸组成的VWFD功能区。该功能区重组融合蛋白的分子质量约为51ku。Western-blot分析表明,该重组蛋白与家兔抗血红扇头蜱全蜱阳性血清、家兔抗长角血蜱全蜱阳性血清、家兔抗残缘璃眼蜱全蜱阳性血清以及家兔抗草原革蜱全蜱阳性血清均出现不同程度的反应活性。结果表明,经表达Vg基因VWFD区域而制备的重组抗原对于不同蜱种血清具有广谱性。

关键词：血红扇头蜱卵黄原蛋白基因克隆生物学特性

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青海省细粒棘球蚴线粒体cox1基因和nad1基因多态性的研究

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中国兽医科学 2014年第12期44卷 1251-1256页

作者：马睿麟娄忠子李立胡广卫赵全邦沈艳丽闫鸿斌张向乐殷宏蔡金山贾万忠青海省动物疫病预防控制中心青海西宁810008 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室中国农业科学院人兽共患病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

分析了采自青海省7个县共19个细粒棘球蚴分离株样品的nad1基因和cox1基因核苷酸序列的多态性和单倍型。结果显示,18个细粒棘球蚴分离株属于G1型,1个分离株属于G3型。G1型分离株可根据nad1基因和cox1基因的核苷酸序列变异分为不同的单倍... 详细信息

分析了采自青海省7个县共19个细粒棘球蚴分离株样品的nad1基因和cox1基因核苷酸序列的多态性和单倍型。结果显示,18个细粒棘球蚴分离株属于G1型,1个分离株属于G3型。G1型分离株可根据nad1基因和cox1基因的核苷酸序列变异分为不同的单倍型,其中nad1基因的单倍型共有5种,变异位点只有5个,单倍型序列之间碱基差异1~4个,变异率达0.45%;而cox1基因的单倍型共有9种,涉及变异位点共27个,单倍型序列之间碱基差异1~11个,变异率达0.68%。突变碱基多位于密码子第3位碱基上,属于同义突变。cox1基因的多态性比nad1基因的多态性丰富。用于细粒棘球蚴G1型内分离株之间核苷酸多态性的分析则分辨率相对较高。上述研究结果为进一步开展棘球蚴病分子流行病学调查积累了数据。

关键词：细粒棘球蚴青海省 cox1基因 nad1基因基因型单倍型单核苷酸多态性

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绵羊体表脓包病原的分离·鉴定及药敏试验

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安徽农业科学 2014年第17期42卷 5503-5505页

作者：张晓刘志杰杨吉飞陈泽关贵全刘爱红任巧云罗建勋殷宏李有全中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省寄生虫学重点实验室/农业部草食动物疫病重点实验室甘肃兰州730046

[目的]对分离自湖北省大悟县的患病山羊体表脓包中的致病菌进行分析和鉴定,以确定脓包中细菌的分子分类学地位及药物敏感性。[方法]通过对分离株16S rRNA基因序列分析,结合细菌菌落形态和细菌生化特性分析进行细菌分离和鉴定,并对已鉴... 详细信息

[目的]对分离自湖北省大悟县的患病山羊体表脓包中的致病菌进行分析和鉴定,以确定脓包中细菌的分子分类学地位及药物敏感性。[方法]通过对分离株16S rRNA基因序列分析,结合细菌菌落形态和细菌生化特性分析进行细菌分离和鉴定,并对已鉴定的菌株进行药物敏感性试验,筛选出脓包细菌敏感性药物。[结果]从脓包分离的细菌分别为葡萄球菌属、大肠埃希氏杆菌属、不动杆菌属以及绿脓杆菌;药物敏感试验表明这些细菌对药物的敏感性不同,其中对头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类以及氯霉素等敏感。[结论]该研究可为该地区该病流行病学的研究与防治药物的研发提供参考。

关键词：山羊脓包 16S rRNA 药物敏感性鉴定

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亚洲璃眼蜱miR-451与MIF相互关系分析

亚洲璃眼蜱miR-451与MIF相互关系分析

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第五届媒介生物可持续控制国际论坛

作者：罗金陈泽任巧云殷宏罗建勋刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

目的为研究亚洲璃眼蜱miR-451对其靶基因巨噬细胞游走因子表达水平的影响.方法参考高通量测序获得的亚洲璃眼蜱miR-451序列,设计茎环及PCR引物,扩增获得该蜱种miR-451序列;并通过基因合成获得抑制miR-451的dsRNA序列,用于亚洲璃眼蜱... 详细信息

目的为研究亚洲璃眼蜱miR-451对其靶基因巨噬细胞游走因子表达水平的影响.方法参考高通量测序获得的亚洲璃眼蜱miR-451序列,设计茎环及PCR引物,扩增获得该蜱种miR-451序列;并通过基因合成获得抑制miR-451的dsRNA序列,用于亚洲璃眼蜱饥饿成蜱体内注射.根据亚洲璃眼蜱MIF基因(暂未登录序列),设计特异性MIF基因的实时荧光定量引物,以β-actin基因作为内参,采用SYBR Green mal-timeRT-PCR方法检测注射dsRNA后亚洲璃眼蜱饥饿成蜱不同时间点MIF基因的表达水平,以及miR-451的表达情况.结果通过PCR扩增测序验证miR-451的成熟体序列为AAACCG UUA CCA UUA CUG AGU UU,大小为23bp.注射dsRNA后,实验组MIF基因表达量在6-18h明显低于对照组,24-48h明显高于对照组;48-84h水平一致,90-108两组MIF表达量均有明显升高,且实验组明显早于对照组.注射dsRNA后,实验组miR-451的表达量在0-6h明显升高且高于对照组,6-30h逐渐降低;54h时明显升高,且明显高于对照组,随后降低与对照组水平一致.结论本研究初步探讨了抑制miR-451后其靶基因MIF相对表达量的变化,为进一步研究亚洲璃眼蜱miR-451与MIF基因的相互作用提供参考.证明,miRNA参与基因功能的调控具有一定的功能特异性和时序性.

关键词：亚洲璃眼蜱 microRNA-451 巨噬细胞抑制游走因 MIF

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