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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：牛庆丽 Claire Bonsergent 关贵全殷宏 Laurence Malandrin INRA UMPR1300 BiologyEpidemiology and Risk Analysis in Animal HealthBP 40706F:44307 NantesFrance 家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

本研究测定了临潭株棒状体相关蛋白的多基因家族的基因序列及基因座结构.结果显示临潭株的棒状体相关蛋白(rap-1)基因座复杂的基因结构。1),存在三种rap-1基因类型(rap-1a,rap-1b and rap-1c);2),rap-1a和rap-1b包含多个基因拷贝;3),rap... 详细信息

本研究测定了临潭株棒状体相关蛋白的多基因家族的基因序列及基因座结构.结果显示临潭株的棒状体相关蛋白(rap-1)基因座复杂的基因结构。1),存在三种rap-1基因类型(rap-1a,rap-1b and rap-1c);2),rap-1a和rap-1b包含多个基因拷贝;3),rap-1a基因存在基因多态性,包含两种rap-1a基因类型(命名为:rap-1a 61和rap-1a 67)同源性为95.7％,每个rap-1a类型又包含两个变异体亚型;4),rap-1a61-1和rap-1a 61-2之间的多态性是有限的,仅存在三个核苷酸位点的变异;5),rap-1a 67-1和rap-1a 67-2之间,从1270bp到rap-1a67-1基因末端存在8个核苷酸变异位点,因此产生了两种有细微差异的蛋白;6),两类rap-1a基因在基因座中的比率为:1 rap-1a 67,1 rap-1a 61-1和1 rap-1a61-2;7),不同的rap-1基因类型被三类转录间隔区分开;8),rap-1a基因被rap-1b基因间隔开;9),Rap-1c位于基因组的终点.全长基因座大概为31kb,包含6个rap-1a基因,5个rap-1b基因和1个rap-1c基因.上述多基因家族的基因序列及基因座结构的测定为羊巴贝斯虫的深入研究及防控提供一定的理论依据.

关键词：羊巴贝斯虫棒状体相关蛋白1 基因座结构序列分析

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BQP35是血清学检测莫氏巴贝斯虫临潭株感染的潜在抗原

BQP35是血清学检测莫氏巴贝斯虫临潭株感染的潜在抗原

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：关贵全罗建勋 Alain Chauvin 殷宏 Emmanuelle Moreau 刘军龙马米玲 Hélène Rogniaux 刘爱红牛庆丽李有全任巧云家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州 730046 LUNAM Université OnirisUMR 1300 BioEpARNantes F:44307France INRA UR1268 BIAPlatE-Forme BIBSNantesF:44300France

本研究应用体外培养单克隆的莫氏巴贝斯虫临潭株G7株,纯化获得裂殖子,提取/纯化RNA和mRNA,构建裂殖子cDNA表达文库.以感染后第6周的羊血清,用免疫学筛选技术,自该cDNA文库中筛选获得5个具有较高相似性的EST片段(297-357bp).然后应用5... 详细信息

本研究应用体外培养单克隆的莫氏巴贝斯虫临潭株G7株,纯化获得裂殖子,提取/纯化RNA和mRNA,构建裂殖子cDNA表达文库.以感染后第6周的羊血清,用免疫学筛选技术,自该cDNA文库中筛选获得5个具有较高相似性的EST片段(297-357bp).然后应用5'RACE扩增技术,扩增获得一个1140bp的基因,同源性分析表明,BQP35与牛巴贝斯虫的一个假定蛋白具有26％的相似性.结果显示,该蛋白是一个IUP蛋白,最长的无序区长105个氨基酸,总的无序区有286个氨基酸,占总蛋白长度的91.96％.最后,应用western blot和ELISA对BQP35作为检测低致病性的莫氏巴贝斯虫感染的抗原潜力进行了评价,结果显示,该抗原与我国羊的其它主要其它梨形虫和羊无浆体的阳性血清没有交叉反应,而只与低致病性的莫氏巴贝斯虫天祝株有一定的交叉反应.在ELISA中,在莫氏巴贝斯虫临潭株感染一周后的羊血清中就可以检测到抗BQP35的抗体.本研究首次在巴贝斯虫中鉴定到IUP蛋白,并对其作为血清学检测抗原的潜力进行了评价.

关键词：羊莫氏巴贝斯虫体外培养重组蛋白抗体检测血清指标

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新疆巴贝斯虫棒状体相关蛋白1基因序列与分子特征

新疆巴贝斯虫棒状体相关蛋白1基因序列与分子特征

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：牛庆丽 Jordan Marchanda,b,Claire Bonsergent 殷宏 Laurence Malandrin INRA UMR1300 BiologyEpidemiology and Risk Analysis in Animal HealthBP 40706F:44307 NantesFrance 家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫掌重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

本研究旨在测定新疆巴贝斯虫rap-1基因序列和分析其分子特征,研究结果显示新疆巴贝斯虫rap-1基因座由rap-1a基因组成,该基因序列分为明显的三个区域,位于5’和3’的两个保守区和中间的一个变异区.3’保守区分为两类基因序列,仅在7个核... 详细信息

本研究旨在测定新疆巴贝斯虫rap-1基因序列和分析其分子特征,研究结果显示新疆巴贝斯虫rap-1基因座由rap-1a基因组成,该基因序列分为明显的三个区域,位于5’和3’的两个保守区和中间的一个变异区.3’保守区分为两类基因序列,仅在7个核苷酸位点存在变异.新疆巴贝斯虫rap-1基因座因此包含多个rap-1a基因拷贝.变异区由一系列的36bp变异的重复基因序列组成.这些重复的变异序列特征在以前的绵羊巴贝斯虫(***),牛巴贝斯虫(***),驽巴贝斯虫(***)以及东方巴贝斯(***)虫中被报道.研究结果表明新疆巴贝斯虫rap-1a基因座包含至少16个rap-1a基因,根据3’和中间的变异区,rap-1a基因分为两类,5’保守区是理想的疫苗研究区域.

关键词：兽医学巴贝斯虫棒状体相关蛋白1 多基因家族分子特征

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硬蜱生防真菌制剂的研究及应用

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微生物学报 2012年第8期52卷 948-953页

作者：孙明王晓燕罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部草食动物疫病重点实验室、甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 兰州大学第二医院神经内科兰州730030

昆虫病原真菌作为一种很有潜力的生物控制因子,已在农业害虫生物防治领域得到广泛的应用,而在兽医外寄生虫病防治的研究才刚刚起步。针对目前用于蜱化学药物防治的药效持久期短的技术难点,建立和改进蜱虫的防治体系,降低环境污染,减少... 详细信息

昆虫病原真菌作为一种很有潜力的生物控制因子,已在农业害虫生物防治领域得到广泛的应用,而在兽医外寄生虫病防治的研究才刚刚起步。针对目前用于蜱化学药物防治的药效持久期短的技术难点,建立和改进蜱虫的防治体系,降低环境污染,减少或禁用化学农药势在必行,开发高效、稳定的生物农药已成为当务之急。作者等结合蜱生物防治的初步研究成果,特别是针对栖息土壤环境中的昆虫病原微生物对蜱的致病力筛选及其生防制剂进行探讨,以促进这一研究领域的可持续发展,这对于保护环境、维持生态平衡、发展无污染的绿色畜牧业产品以及对畜牧业的可持续发展具有极为重要的意义。

关键词：蜱昆虫病原真菌生防制剂

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基于环形泰勒虫Tams1基因多态性的二温式-PCR检测方法的建立

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中国农业科学 2012年第20期45卷 4300-4309页

作者：罗金刘光远田占成谢俊仁中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室

【目的】环形泰勒虫作为牛科动物重要的血液原虫对养牛业产生了重大危害。近年来针对该病原Tams1基因的诊断方法及候选疫苗筛选进行了大量工作。但研究证明该基因多态性对诊断及免疫效果存在影响。基于此,本研究对Tams1基因多态性特征... 详细信息

【目的】环形泰勒虫作为牛科动物重要的血液原虫对养牛业产生了重大危害。近年来针对该病原Tams1基因的诊断方法及候选疫苗筛选进行了大量工作。但研究证明该基因多态性对诊断及免疫效果存在影响。基于此,本研究对Tams1基因多态性特征进行了分析,并为该病的诊断建立一种实施有效的检测方法。【方法】参考GenBank中公布的环形泰勒虫Tams1基因的核苷酸序列,设计特异性引物。PCR扩增,获得了846 bp的核苷酸片段。将该基因片段与GenBank中主要的12种已知不同区域虫株的相应氨基酸序列进行比较分析。在保守区设计引物,以Tams1基因标准阳性质粒为模板建立环形泰勒虫病的二温式-PCR检测方法。经优化的方法用于田间样品的检测。【结果】该基因编码281个氨基酸,碱性氨基酸48个,酸性氨基酸42个,疏水性氨基酸100个。系统发生树结果显示,环形泰勒虫甘肃株与安哥拉、土耳其、巴林地方株亲缘关系较近。新疆株与意大利、西班牙地方株关系较近,而与甘肃株亲缘关系相对较远。这一结果通过环形泰勒虫不同国家地方株的氨基酸序列对齐结果可以得到进一步的说明。建立的二温式-PCR检测方法,可检测到0.31 fg.μL-1血液中感染虫体的量。特异性结果表明,仅有环形泰勒虫基因组DNA检测为阳性,其它对照虫种基因组模板均表现为阴性,且与感染牛的其它梨形虫无交叉反应。本实验建立的环形泰勒虫二温式-PCR方法对收集的335份野外样品进行检测,阳性检出率为16.33%,显微镜检测阳性率为2.25%,两者符合率100%。与普通PCR比较,二温式-PCR在敏感性方面没有显著差异,但其特异性更高,且该方法反复升温降温时间消耗短。【结论】环形泰勒虫Tams1基因不同地方株存在明显的差异。其氨基酸序列的多态性特征差异显著。因此该基因作为潜在候选抗原应注重多肽疫苗的设计。二温式-PCR方法具有的良好敏感性和特异性,对环形泰勒虫病的流行可以起到提前检测的效果,提高了疾病的诊断效率。

关键词：环形泰勒虫 Tams1 多态性二温式-PCR 检测方法

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多房棘球蚴感染与宿主相互作用的免疫学机制研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 401-405页

作者：娄忠子李宏民闫鸿斌倪兴维贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

通过感染过程中宿主的固有免疫和获得性免疫的作用,多房棘球蚴可调节一系列虫体与宿主的相互作用效应,这些效应有助于虫体在宿主肝脏内的增殖和成熟,从而完成其生活史;对中间宿主来说,则可限制寄生所导致的病理变化的发展。本文主要针... 详细信息

通过感染过程中宿主的固有免疫和获得性免疫的作用,多房棘球蚴可调节一系列虫体与宿主的相互作用效应,这些效应有助于虫体在宿主肝脏内的增殖和成熟,从而完成其生活史;对中间宿主来说,则可限制寄生所导致的病理变化的发展。本文主要针对多房棘球蚴免疫相关分子在提高寄生虫生存能力等方面与宿主间的免疫应答研究进行综述。

关键词：多房棘球蚴免疫相关分子宿主-虫体相互作用

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长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 551-556页

作者：罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达... 详细信息

根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达纯化后,进行Western-blot试验鉴定其生物学活性。结果,长角血蜱4D8基因的氨基酸序列与青海血蜱、肩突硬蜱的同源性分别为90%、81%。表达的重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白。Western-blot试验证明,该重组蛋白能很好地识别兔抗长角血蜱全蜱阳性血清。结果表明,4D8基因作为一种重要的分子标记基因在蜱的流行病学调查方面有着重要的价值,同时作为潜在的候选抗原基因在疫苗的研究方面也有重要意义。

关键词：长角血蜱 4D8基因克隆原核表达

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马泰勒虫EMA1基因的克隆与生物学特性分析

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中国兽医科学 2012年第4期42卷 352-356页

作者：罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、甘肃省动物寄生虫病重点实验室、农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

根据GenBank上登录的马泰勒虫美国株(AB043618)裂殖子表面蛋白抗原1(EMA1)基因,设计了2对引物,采用PCR技术首次扩增出我国马泰勒虫肇源株EMA1基因。将该基因克隆到pMD19-T载体后,进行序列测定及分析。将鉴定为阳性的克隆重组到原核表达... 详细信息

根据GenBank上登录的马泰勒虫美国株(AB043618)裂殖子表面蛋白抗原1(EMA1)基因,设计了2对引物,采用PCR技术首次扩增出我国马泰勒虫肇源株EMA1基因。将该基因克隆到pMD19-T载体后,进行序列测定及分析。将鉴定为阳性的克隆重组到原核表达载体pET-30a后进行表达,并纯化表达的重组蛋白,进行Western-blotting试验,以鉴定其生物学活性。结果,EMA1基因长819bp,编码272个氨基酸,将该基因编码蛋白的氨基酸序列与GenBank中登录的11种已知梨形虫的相应氨基酸序列进行比较分析,马泰勒虫肇源分离株与已报道的马泰勒虫(马巴贝斯虫)亲缘关系最近,其次是环形泰勒虫和斑羚泰勒虫,而与东方泰勒虫、瑟氏泰勒虫的亲缘关系较远。表达的重组蛋白是分子质量约为38ku的融合蛋白,且表达产物能被马泰勒虫标准阳性血清识别。结果表明,马泰勒虫EMA1作为一种良好的抗原分子,在虫株的分类学研究、流行病学调查以及候选疫苗的研制中有着重要的意义。

关键词：马泰勒虫 EMA1基因克隆系统发育

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甘肃省景泰县羊无浆体病的诊断

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动物医学进展 2012年第4期33卷 114-117页

作者：孙明刘志杰马米玲关贵全罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为建立羊无浆体病简便快捷的病原学检测方法,论文以马米玲等已建立的边缘无浆体MSP5重组抗原间接ELISA检测方法对甘肃省景泰县多地采集的219份田间样品进行羊无浆体ELISA检测,以PCR检测方法进行病原学的检测和验证。同时为进一步验证MSP... 详细信息

为建立羊无浆体病简便快捷的病原学检测方法,论文以马米玲等已建立的边缘无浆体MSP5重组抗原间接ELISA检测方法对甘肃省景泰县多地采集的219份田间样品进行羊无浆体ELISA检测,以PCR检测方法进行病原学的检测和验证。同时为进一步验证MSP5基因在边缘无浆体和羊无浆体之间的保守性,Western blot检测证实边缘无浆体重组蛋白在45ku处与羊无浆体阳性血清反应,与羊其他病原阳性血清均不反应,表明该重组蛋白适合作为羊无浆体病的诊断抗原。在被检的219份样品中,ELISA方法检测阳性率为34.7%(76/219),PCR方法阳性率为30.6%(67/219),证实该地区存在羊无浆体病,与以往调查结果相比,阳性率有所下降。利用边缘无浆体MSP5重组抗原建立的EILSA方法具有良好的特异性和敏感性,可以检测羊无浆体病,为羊无浆体病的血清学诊断及流行病学调查提供了手段。

关键词：羊无浆体病 ELISA PCR 诊断

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18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

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中国兽医杂志 2012年第10期48卷 6-9页

为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序... 详细信息

为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与其他种梨形虫的相应序列进行分析。系统发生树结果显示,泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的关系,他们处于同一分支,其亲缘关系较巴贝斯虫更远。序列对齐分析表明,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变。而马巴贝斯虫和泰勒虫18SrRNA V4高变区核苷酸序列的相似程度较高,与巴贝斯虫在该序列上的差异较大。以上结果表明,泰勒虫种和巴贝斯虫种18SrRNA V4高变区核苷酸序列间的这种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据的本质因素之一。马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫属。

关键词：泰勒虫巴贝斯虫分类学 18S rRNA

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