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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化

湖北农业科学 2011年第15期50卷 3116-3119页

作者：郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药重点开放实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,... 详细信息

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。

关键词：猪戊型肝炎病毒衣壳蛋白 CP239片段原核表达

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绵羊肺炎支原体GH3-3株在改良KM2培养基中的增殖情况

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动物医学进展 2011年第11期32卷 46-48页

作者：许健储岳峰赵萍高鹏程贺英张莹剡根强逯忠新石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心甘肃兰州730046

绵羊肺炎支原体GH3-3MoGH3-3株是我国绵羊支原体肺炎灭活疫苗制苗菌株。为研究MoGH3-3株在改良KM2培养基中的生长及繁殖特性,利用活菌计数方法对其在不同培养阶段的生长滴度(颜色变化单位)进行测定,并绘制生长曲线。结果表明,传代稳定的... 详细信息

绵羊肺炎支原体GH3-3MoGH3-3株是我国绵羊支原体肺炎灭活疫苗制苗菌株。为研究MoGH3-3株在改良KM2培养基中的生长及繁殖特性,利用活菌计数方法对其在不同培养阶段的生长滴度(颜色变化单位)进行测定,并绘制生长曲线。结果表明,传代稳定的MoGH3-3株在改良KM2培养基中培养12h开始进入对数生长期,培养72h进入稳定期,培养120h时进入衰亡期。本研究可为绵羊肺炎支原体培养特性研究和疫苗生产工艺研究提供参考数据。

关键词：绵羊肺炎支原体 MoGH3-3株增殖

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目前我国羊病发生特点及流行趋势

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兽医导刊 2011年第2期 36-39页

作者：逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

我国是养羊大国，根据2009年《中国统计年鉴》资料，2008年底我国羊存栏量为2．8亿只，其中山羊1．5亿只，绵羊1．3亿只；羊肉产量380．3万吨；绵、山羊毛产量41．2万吨，羊绒1．7万吨，养羊业已成为我国畜牧业的重要组成部分，

关键词：流行趋势发生特点羊病羊毛产量组成部分养羊业存栏量畜牧业

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驽巴贝斯虫病PCR检测方法的建立和应用

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中国畜牧兽医 2011年第7期38卷 193-195页

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成沈辉王芳芳孙晓林陈荣贵王海军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心新疆伊犁735000 新疆新源县畜牧兽医站新疆新源830000

根据驽巴贝斯虫(Babesia caballi)18S rRNA基因序列设计1对特异性引物,扩增出452 bp核苷酸片段,建立了检测驽巴贝斯虫病的PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法最低能检出0.01 fg/μL驽巴贝斯虫DNA模板。特异性试验结果显示,在被检测的6... 详细信息

根据驽巴贝斯虫(Babesia caballi)18S rRNA基因序列设计1对特异性引物,扩增出452 bp核苷酸片段,建立了检测驽巴贝斯虫病的PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法最低能检出0.01 fg/μL驽巴贝斯虫DNA模板。特异性试验结果显示,在被检测的6个巴贝斯虫株中,仅驽巴贝斯虫株能扩增出特异性片段,马泰勒虫、双芽巴贝斯虫、莫氏巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、大巴贝斯虫的扩增结果均为阴性。对45份马属动物血样进行检测,本研究建立的PCR方法测得驽巴贝斯虫病的阳性率为26.67%(12/45),与显微镜检测方法进行了比较,结果显示PCR检测方法可显著提高驽巴贝斯虫的检出率。

关键词：驽巴贝斯虫 PCR诊断方法应用

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18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成沈辉中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室

通过泰勒虫和巴贝斯虫18S rRNA V4高变区核苷酸序列的对比,分析两物种之间该序列的结构特征,并确定马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位。参考GenBank中公布的马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)基因序列设计引物,分别获得53... 详细信息

通过泰勒虫和巴贝斯虫18S rRNA V4高变区核苷酸序列的对比,分析两物种之间该序列的结构特征,并确定马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位。参考GenBank中公布的马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)基因序列设计引物,分别获得531bp和452bp的核苷酸片段。该序列克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与GenBank中公布的30种不同原虫的18S rRNA核苷酸序列构建系统发生树。利用clustal x将这些系列对齐,分析泰勒虫及巴贝斯虫核苷酸序列之间的差异。泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的亲缘关系,他们同处于一个分支。序列对齐分析显示,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变。该种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据之一。马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫种。

关键词：泰勒虫核苷酸序列巴贝斯虫梨形虫序列差异分类学

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18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

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中国动物学会原生动物学分会第十六次学术讨论会

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成沈辉中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

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多头带绦虫脑多头蚴cDNA表达文库的构建及初步分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第3期18卷 139-146页

作者：李文卉王建魁盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠罗建勋 RaduBlaga 付宝权甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 兰州市七里河区动物疫病预防控制中心兰州730050 UniversityofAgriculturalSciencesandVeterinaryMedicine Cluj-Napoca400372Romania

从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总RNA，以Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA，利用LambdaZAPIIXR文库构建试剂盒构建了脑多头蚴eDNA表达文库。从构建的原始文库随机挑选单个噬菌斑进行PCR，确定文库重组率和插入外源基因片段大小，鉴定文... 详细信息

从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总RNA，以Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA，利用LambdaZAPIIXR文库构建试剂盒构建了脑多头蚴eDNA表达文库。从构建的原始文库随机挑选单个噬菌斑进行PCR，确定文库重组率和插入外源基因片段大小，鉴定文库质量。结果表明脑多头蚴eDNA表达文库的原始库容量为1．0×10。pfu，扩增后文库滴度为1．6×10^9pfu／mL。随机挑选的165个噬菌斑克隆中，0．25kb以上的克隆155个，重组率为93．9％，对其中0．5kb以上的115个克隆测序共获得104个表达序列标签（EST），分析后得到96个单一EST序列（UniqueEST），其中20个EST与绦虫基因有同源性，38个EST与吸虫基因有同源性，4个EST与线虫基因有同源性，17个EST与其他物种有同源性，其余17个EST没有同源基因。这些EST编码的氨基酸序列有多头带绦虫六钩蚴Tml6抗原、猪带绦虫副肌球蛋白、猪带绦虫免疫原蛋白Ts76等绦虫抗原的同源蛋白以及烯醇化酶等一些酶类、热休克蛋白、肌动蛋白、核糖体蛋白等同源蛋白。

关键词：多头带绦虫脑多头蚴 cDNA表达文库表达序列标签

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杆状病毒/哺乳动物基因转移载体应用于活载体疫苗研究的进展

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中国人兽共患病学报 2010年第3期26卷 272-274页

作者：李志勇殷相平张韵李学瑞李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

近年,高致病性禽流感、猪链球菌等动物疫病频繁暴发流行,不但对畜牧业生产造成巨大经济损失,而且给人民健康带来严重威胁.因此,如何研制并利用安全、有效的基因工程疫苗对预防和控制人兽共患传染病的发生和流行意义重大.

关键词：基因转移载体活载体疫苗哺乳动物杆状病毒高致病性禽流感人兽共患传染病应用基因工程疫苗

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猪圆环病毒的分子生物学研究进展

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中国兽医学报 2010年第6期30卷 862-868页

作者：娄忠子李建强李学瑞柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是在1974年从PK-15传代细胞系(CCL-33)中首次分离到,最先被鉴定为一种细胞培养污染物,[第一段]

关键词：猪圆环病毒病毒起源基因组结构复制模式转录模式分子生物学诊断技术

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山羊支原体山羊肺炎亚种M1601株外膜蛋白的免疫原性

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中国兽医科学 2010年第12期40卷 1228-1231页

作者：赵萍贺英储岳峰高鹏程郭晗张念章赵海燕逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

通过免疫印迹试验对山羊支原体山羊肺炎亚种M1601株外膜蛋白及M1601株全菌蛋白进行了免疫原性分析,并与绵羊肺炎支原体抗血清和丝状支原体山羊亚种抗血清进行了比较,以筛选M1601株特异性的外膜蛋白。结果表明,存在于外膜蛋白中的分子质... 详细信息

通过免疫印迹试验对山羊支原体山羊肺炎亚种M1601株外膜蛋白及M1601株全菌蛋白进行了免疫原性分析,并与绵羊肺炎支原体抗血清和丝状支原体山羊亚种抗血清进行了比较,以筛选M1601株特异性的外膜蛋白。结果表明,存在于外膜蛋白中的分子质量分别为60.0和49.7 ku的蛋白是其主要的免疫原性蛋白,也是山羊支原体山羊肺炎亚种区别于丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体的主要特异性抗原,这一结论为山羊传染性胸膜肺炎的诊断和疫苗研制奠定了良好的理论基础。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种外膜蛋白免疫原性

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