检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘永安李学瑞刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/草食动物疫病重点开放实验室

牛结核病（Bovine tubereulosis）作为一种人畜共患传染病,表现为慢性消耗性症状,可对养牛业以及公共卫生安全造成极其严重的危害。牛结核病在世界范围内传播流行,主要由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis,***）引起,作为曾经的OIE B类... 详细信息

牛结核病（Bovine tubereulosis）作为一种人畜共患传染病,表现为慢性消耗性症状,可对养牛业以及公共卫生安全造成极其严重的危害。牛结核病在世界范围内传播流行,主要由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis,***）引起,作为曾经的OIE B类传染性动物疫病,在世界范围内受到高度重视。Smith等于1898年第一次明确了牛分枝杆菌与其它分枝杆菌的重大区别,使得科研工作者能够更加全面的探究牛结核

关键词：牛分枝杆菌耐药性检测牛结核病

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0型FMDV衣壳抗原的耐酸改造及其在昆虫细胞中的表达

0型FMDV衣壳抗原的耐酸改造及其在昆虫细胞中的表达

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：解银丽李志勇张志东赵付荣常惠芸张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为筛选与0型FMDV衣壳政酸感性相关的位点,通过突变相关酸敏感性位点以提高衣壳蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的表达量.本研究以牛源0型FMDV ON株为研究对象开展耐酸性毒株的筛选工作,筛选得到存在于P1上的5个错义突变位点.然后经... 详细信息

为筛选与0型FMDV衣壳政酸感性相关的位点,通过突变相关酸敏感性位点以提高衣壳蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的表达量.本研究以牛源0型FMDV ON株为研究对象开展耐酸性毒株的筛选工作,筛选得到存在于P1上的5个错义突变位点.然后经过耐酸改造,利用杆状病毒表达系统获得表达0型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒rBac-P12A3C.外源蛋白的表达检测结果表明,表达产物能够被0型FMDV多克隆抗体识别.兔疫电镜观察到了直径约27nm的正六边形颗拉.用蛋白样品rBac-P12A3C对BALB/c小鼠肌肉注射兔疫,通过液相阻断ELISA的方法检测0型口蹄疫病毒的抗体效价,最后取小鼠脾脏利用ELISPOT的方法检测细胞因子IL-4和IFN-γ的水平.结果表明蛋白样品rBac-P12A3C可以激发小鼠的体液兔疫反应,同时还可以很好的激发小鼠的细胞兔疫反应.本研究为后期研制出FMD的基因工程亚单位疫苗奠定了基础.

关键词：口蹄疫病毒衣壳抗原耐酸改造昆虫细胞蛋白表达

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒宁夏株ORF5基因遗传进化分析

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甘肃畜牧兽医 2016年第3期46卷 97-98页

作者：李知新刘光远张学军周海宁闫小芹田进梅赵燕张和平宁夏动物疾病预防控制中心宁夏银川750011 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为了解宁夏地区感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的基因型和遗传变异情况，收集2008~2014年宁夏4个地区临床疑似发病猪的血清和组织，病毒核酸提取后用特异性引物进行RT-PCR扩增、凝胶电泳和测序，鉴定9份阳性样品。并与国内外猪繁殖与... 详细信息

为了解宁夏地区感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的基因型和遗传变异情况，收集2008~2014年宁夏4个地区临床疑似发病猪的血清和组织，病毒核酸提取后用特异性引物进行RT-PCR扩增、凝胶电泳和测序，鉴定9份阳性样品。并与国内外猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒代表毒株进行序列比和遗传进化分析。结果表明，9个毒株的ORF5基因中7株属于美洲Ⅳ型，2株属于美洲Ⅰ型。说明宁夏流行的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒均属于美洲型，但病毒亚型之间已发生变异，为PRRSV遗传进化分析和疫病防控提供了新的参考。

关键词：猪猪繁殖障碍综合征病毒 ORF5 遗传进化

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牛支原体P48蛋白的表达及间接血凝检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2015年第3期45卷 241-246页

作者：简莹娜储岳峰赵萍陈胜利贺英秦明明潘玮玮刘永生逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体... 详细信息

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体抗体的间接血凝试验。重组P48蛋白致敏红细胞的最佳质量浓度是20~40μg/mL,牛支原体超免疫血清抗体效价达1∶2 048~1∶4 096。该方法对牛肺疫、牛巴氏杆菌病、牛病毒性腹泻病、布氏杆菌病、结核病、口蹄疫、牛生殖道支原体感染、里奇氏支原体感染、大肠杆菌病阳性血清的检测结果均为阴性。该方法的特异性为100%,敏感性为93.33%。与国外商品化的牛支原体ELISA试剂盒相比,平均符合率为96.15%。对833份田间血清和1 084份乳清进行检测,阳性率分别是15.37%和19.56%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强和重复性好,可用于牛支原体抗体水平检测、牛支原体病的辅助诊断和流行病学调查。

关键词：牛支原体重组P48蛋白可溶性表达间接血凝试验抗体检测

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细菌规律成簇间隔短回文序列相关机制的研究进展

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 644-646页

作者：王立燕刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

近年来，在许多细菌和古细菌中发现一种新的基因干扰途径一规律成簇间隔短回文序列（Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats，CRISPR），该序列是许多细菌和古细菌用来保护自己免受噬菌体、接合质粒和其他转座因子（Mob... 详细信息

近年来，在许多细菌和古细菌中发现一种新的基因干扰途径一规律成簇间隔短回文序列（Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats，CRISPR），该序列是许多细菌和古细菌用来保护自己免受噬菌体、接合质粒和其他转座因子（Mobilegeneticelements，MGEs）干扰的一段DNA序列，其转录的RNA序列与相关蛋白结合在一起可使入侵的特异性核酸发生降解。目前CRISPR已被开发为一种基因编辑工具，

关键词：回文序列古细菌成簇机制干扰途径 DNA序列 RNA序列转座因子

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细菌群体感应种类及其信号分子的研究进展

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中国预防兽医学报 2015年第4期37卷 318-320页

作者：王立燕刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

细菌的群体感应（Quorum sensing,QS）效应为存在于细菌中,通过响应细菌细胞的密度变化而调节基因表达的机制。随着细菌细胞数目的增加,细菌通过QS的作用产生、释放类激素分子-自诱导物（Autoinducers,AI）并积聚在细菌细胞的外环境中,... 详细信息

细菌的群体感应（Quorum sensing,QS）效应为存在于细菌中,通过响应细菌细胞的密度变化而调节基因表达的机制。随着细菌细胞数目的增加,细菌通过QS的作用产生、释放类激素分子-自诱导物（Autoinducers,AI）并积聚在细菌细胞的外环境中,细菌就是通过这种被称作AI的信号分子的浓度变化来进行信息交流[1]。AI是随着细菌细胞密度的增大而增大的,当AI积聚达到一定的阈值时,又反过来调控细菌内的一些基因的表达，导致一个信号转导级联反应开始，并最终使机体行为发生改变[2]。

关键词：细菌细胞信号分子群体感应种类基因表达密度变化细胞数目信息交流

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鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的原核表达及纯化

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中国畜牧兽医 2015年第4期42卷 871-876页

作者：肖星星柳纪省殷相平中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

本试验旨在表达并纯化鞭毛蛋白,为研究并获得高效蛋白佐剂奠定基础。用PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fljB、fljB’和fliC,将扩增产物克隆至pMD19-T Simple Vector上,构建了克隆质粒pMD19-fljB、pMD19-fljB’和pMD19-fliC。克隆质... 详细信息

本试验旨在表达并纯化鞭毛蛋白,为研究并获得高效蛋白佐剂奠定基础。用PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fljB、fljB’和fliC,将扩增产物克隆至pMD19-T Simple Vector上,构建了克隆质粒pMD19-fljB、pMD19-fljB’和pMD19-fliC。克隆质粒经双酶切后将片段克隆至pET-30a中,构建原核表达质粒pET30a-fljB、pET30a-fljB’fliC和pET30a-fliC。经PCR、酶切及测序鉴定后将阳性表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达后的菌体经超声处理取上清,用Ni柱进行纯化。Western blotting证实了表达的蛋白能与豚鼠抗鞭毛蛋白血清发生特异性反应。通过优化表达条件,鞭毛蛋白fljB、fliC和fljB’fliC均以可溶性表达,纯化得到的鞭毛蛋白为后续评价其佐剂效应奠定基础。

关键词：鞭毛蛋白原核表达纯化

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一致性检验比较两种弓形虫抗体检测试剂盒

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甘肃畜牧兽医 2016年第1期46卷 81-82,84页

作者：李知新刘光远赵燕田进梅张学军张和平吴润甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 宁夏动物疾病预防控制中心宁夏银川750011

比较两个弓形虫抗体检测试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选可合理使用的商品化试剂盒。对510份猪血清分别进行弓形虫抗体IHA和ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析,用x^2检验分析差异... 详细信息

比较两个弓形虫抗体检测试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选可合理使用的商品化试剂盒。对510份猪血清分别进行弓形虫抗体IHA和ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析,用x^2检验分析差异性。两种试剂盒联合检出79份阳性,阳性符合率为67.52%,阴性符合率为95.17%,总符合率为88.82%。x^2检验差异显著(x^2=228.23,p=0.00);u检验值为15.89,两种产品的一致性为中度一致(Kappa值=0.66)。所以弓形虫病IHA检测试剂盒可作为现场收益流行病学调查,而弓形虫Ig G抗体ELISA检测试剂盒适合辅助临床检测和诊断。x^2检验比较两种试剂盒具有局限性。u检验排除偶然性造成的一致程度,与Kappa检验结合可比较一致性。弓形虫抗体检测要根据实况选择不同的试剂盒。

关键词：弓形虫 Kappa检验 x2检验 u检验 IHA ELISA

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O型口蹄疫病毒衣壳酸敏感性位点的筛选

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中国畜牧兽医 2015年第4期42卷 823-829页

作者：解银丽马琪秦晓东殷相平柳纪省张志东李志勇中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

为筛选与O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳酸敏感性相关的位点,本研究以牛源O型FMDV ON株为研究对象开展耐酸性毒株筛选工作。通过给予pH 6.0酸性环境连续诱变,筛选获得6株耐酸性毒株。将诱变病毒与亲本病毒衣壳蛋白编码区P1区序列比对后发现7... 详细信息

为筛选与O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳酸敏感性相关的位点,本研究以牛源O型FMDV ON株为研究对象开展耐酸性毒株筛选工作。通过给予pH 6.0酸性环境连续诱变,筛选获得6株耐酸性毒株。将诱变病毒与亲本病毒衣壳蛋白编码区P1区序列比对后发现7个核苷酸突变,即共同存在于6株耐酸毒株P1区的错义突变A1334G(Y445C)、A1643G(Q548R)、A1822G/A1823C(N608A)及同义突变G1371A,另有仅存在于耐酸毒株m2P1区的错义突变C1849T(P617S)和仅存在于耐酸毒株m1P1区的同义突变G468T。本研究为O型FMDV酸敏感性分子机制的揭示及病毒衣壳酸稳定性的提高奠定了基础。

关键词： O型口蹄疫病毒衣壳酸敏感性耐酸位点

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猪嵴病毒CH441株VP1基因的克隆与序列分析

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华北农学报 2015年第2期30卷 72-77页

作者：祝俊鹏杨彬兰喜柳纪省马小军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为了深入研究嵴病毒（swKoV）主要结构蛋白基因 VP1，根据 GenBank中已发表的猪嵴病基因序列设计特异性引物，采用 RT-PCR方法扩增猪嵴病毒 CH441株 VP1基因，并对其进行克隆与测序分析。结果表明，swKoV CH441株的 VP1基因为762 bp，与... 详细信息

为了深入研究嵴病毒（swKoV）主要结构蛋白基因 VP1，根据 GenBank中已发表的猪嵴病基因序列设计特异性引物，采用 RT-PCR方法扩增猪嵴病毒 CH441株 VP1基因，并对其进行克隆与测序分析。结果表明，swKoV CH441株的 VP1基因为762 bp，与 GenBank已发表的嵴病毒属的15株嵴病毒序列的 VP1基因相比较，swKoV CH441株的VP1基因与其他各毒株 VP1基因的核苷酸同源性为81.5%~90.2%，氨基酸同源性为86.6%~96.9%，进化分析显示，swKoV CH441株与 GS-1株之间的亲缘关系较近。生物信息学分析显示，VP1蛋白理论等电点（ pI）为4.40，理论分子质量为26.9782 kDa；其序列上共发现18个磷酸化位点，分别为Ser（7）、Thr（6）和Tyr（5），而蛋白的磷酸化与信号转导有关，预测该蛋白为一重要的信号转导分子；无信号肽和跨膜区。为进一步开展 swKoV CH441株 VP1基因在遗传变异等方面的研究奠定了理论基础。

关键词： VP1 基因克隆 DNA测序序列分析

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