检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术进展 2013年第4期3卷 252-256,F0002页

作者：钟鲁龙易咏竹丁农张金卫柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018 湖州市农业科学院浙江湖州313000

本研究利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕中表达猪α干扰素。首先优化并合成猪α干扰素基因,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393的多角体基因启动子下游,与线性化的Bm-BacPAK6DNA共转染至Bm-N细胞,在细胞内进行同源重组后,纯化得到重组病... 详细信息

本研究利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕中表达猪α干扰素。首先优化并合成猪α干扰素基因,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393的多角体基因启动子下游,与线性化的Bm-BacPAK6DNA共转染至Bm-N细胞,在细胞内进行同源重组后,纯化得到重组病毒。Western杂交结果显示,在蚕血淋巴中可检测到猪α干扰素表达。用微量细胞病变抑制法在Vero/VSV GFP系统上进行干扰素活性测定,结果表明重组猪α干扰素有抗病毒活性,效价达到106U/mL以上,证明在家蚕幼虫体内成功表达了有活性的猪α干扰素。

关键词：猪干扰素抗病毒活性家蚕杆状病毒真核表达

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山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(M1601株)的研制

山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(M1601株)的研制

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：赵萍贺英储岳峰高鹏程张轩逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

用实验室试制的三批山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(M1601株),分别从安全性、最小免疫剂量、免疫持续期、保存期等方面进行了研究,结果表明该疫苗对不同生理状况的山羊均安全,不论羔羊还是成年羊,最小免疫剂量均为3ml,免疫持续期为6个月,... 详细信息

用实验室试制的三批山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(M1601株),分别从安全性、最小免疫剂量、免疫持续期、保存期等方面进行了研究,结果表明该疫苗对不同生理状况的山羊均安全,不论羔羊还是成年羊,最小免疫剂量均为3ml,免疫持续期为6个月,保存期为12个月。

关键词：山羊传染性胸膜肺炎疫苗

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山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(M1601株)的研制

山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗(M1601株)的研制

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

作者：赵萍贺英储岳峰高鹏程张轩逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

关键词：山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗免疫效果风险管理

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感染与非感染利士曼原虫的长角血蜱microRNA差异表达分析

感染与非感染利士曼原虫的长角血蜱microRNA差异表达分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成袁晓松王芳芳郭锦霞王素艳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

本研究利用高通量测序技术分别对实验室条件下培养的清洁长角血蜱(LHL01)及感染硕大利氏曼原虫的长角血蜱(FHL02)进行microRNA序列检测.生物信息学统计两者之间差异表达的microRNA信息以及Blast分析差异表达microRNA与利氏曼原虫相关基... 详细信息

本研究利用高通量测序技术分别对实验室条件下培养的清洁长角血蜱(LHL01)及感染硕大利氏曼原虫的长角血蜱(FHL02)进行microRNA序列检测.生物信息学统计两者之间差异表达的microRNA信息以及Blast分析差异表达microRNA与利氏曼原虫相关基因的匹配特性并利用qPCR方法验证该microRNA与相关靶标基因的互作关系.结果显示,LHL01和FHL02模板中分别检测到15,342,278和15,090,145条clean-reads序列,其中214个microRNA差异表达,69microRNA个在感染蜱虫中表现为表达上调.进一步分析显示,4个nicroRNA表达差异倍数极显著.靶标基因预测结果表明,蜱源miR-1637可以和硕大利什曼原虫Mhom/GT基因的3’-非编码区进行不完全互补,符合动物microRNA与靶标基因匹配的各项参数指标.推测该基因可能是miR-1637的靶标基因.且qPCR检测结果与高通量测序结果一致(即利氏曼原虫对长角血蜱的感染可引起miR-1637的表达上调).由此表明高通量测序技术对于宿主病原入侵相关microRNA的筛选是可行,以上研究为进一步研究miR-1637与利什曼原虫入侵蜱的作用机制提供了依据.

关键词：兽医学长角血蜱差异表达高通量测序

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微小扇头蜱不同发育阶段miRNA的动态分析

微小扇头蜱不同发育阶段miRNA的动态分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

本研究对获得的高质量微小扇头蜱卵、幼蜱以及成蜱RNA模板分别构建microRNA文库.高通量测序技术检测其序列,并利用生物信息学方法鉴定微小扇头蜱各个发育阶段microRNA的表达丰度及样品间的差异表达分子.结果显示,分别从卵、幼蜱及成蜱... 详细信息

本研究对获得的高质量微小扇头蜱卵、幼蜱以及成蜱RNA模板分别构建microRNA文库.高通量测序技术检测其序列,并利用生物信息学方法鉴定微小扇头蜱各个发育阶段microRNA的表达丰度及样品间的差异表达分子.结果显示,分别从卵、幼蜱及成蜱中获得18,162,337、8,090,736及ll,807,326条cleanreads.其中5,132条miRNA序列高度保守,并且预测得到了47条候选新miRNA.相比之下,在P-value＜0.01的条件下筛选得到成蜱中存在l,203条差异表达的miRNA序列,其中728条表达上调,475条表达下调.为了验证测序数据的可靠性,应用qRT-PCR对候选的新miRNA序列进行验证.另一方面,将预测到的40,613已注释的miRNA转录本作为候选靶标基因,GO注释和KEGG通路分析显示,差异表达的microRNA主要参与宿主的生理发育过程,包括信号转导、细胞间及细胞外的通信等.本研究为全面了解微小扇头蜱miRNAs特征及潜在靶标提供了数据平台,为了解动物寄生虫复杂的生物学特征及miRNA在微小扇头蜱发育中的功能提供了依据,对研究相关蜱种在人和动物健康方面有着重要的意义.

关键词：兽医学微小扇头蜱高通量测序分子生物学动态监测

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长角血蜱卵中miR:275荧光定量PCR标准曲线的建立

长角血蜱卵中miR:275荧光定量PCR标准曲线的建立

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：王芳芳刘光远罗金袁小松田占成谢俊仁王素艳郭锦霞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为了研究miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况,采用实时相对荧光定量PCR,构建miR-275、内参基因的标准质粒和标准曲线.根据成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,通过qRT-PCR检测miR-275在长角血蜱卵中的表达量.... 详细信息

为了研究miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况,采用实时相对荧光定量PCR,构建miR-275、内参基因的标准质粒和标准曲线.根据成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,通过qRT-PCR检测miR-275在长角血蜱卵中的表达量.将克隆出的约70bp左右的miR-275片段插入到pGEM-T Easy载体中,成功构建了原核表达载体,转化***,对鉴定的阳性克隆进行序列测定,并用标准化的阳性质粒进行绝对荧光定量PCR标准曲线的制备.结果显示,本实验建立的miR-275和β-actin标准曲线斜率分别为M=-2.982,M=-3.038,回归系数分别为R2=0.999,R2=0.997,说明线性关系良好、产物溶解曲线峰值单一、无引物二聚体及引物特异性高;重复性实验结果显示所构建的重组质粒Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5％,表明标准曲线重复性好、稳定性高.本研究建立的方法简单、准确、敏感、特异性强,成功构建的miRNA标准曲线为后续miR-275在卵中功能的研究奠定了良好基础.

关键词：兽医学长角血蜱荧光定量PCR 标准曲线基因序列

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Hlo:miR:275在长角血蜱卵中的表达动态变化

Hlo:miR:275在长角血蜱卵中的表达动态变化

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

基于microRNA的重要性及其在寄生虫和寄生虫病防控方面的潜在应用价值,本研究就hlo-miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况进行了分析.根据数据库中hlo-miR-275的成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时根据Gene... 详细信息

基于microRNA的重要性及其在寄生虫和寄生虫病防控方面的潜在应用价值,本研究就hlo-miR-275在长角血蜱卵不同发育时期的表达变化情况进行了分析.根据数据库中hlo-miR-275的成熟体序列信息,设计特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时根据GeneBank中长角血蜱β-actin基因编码区保守序列,设计特异性引物进行扩增.将克隆出的约70bp左右的hlo-miR-275、β-actin片段插入到pGEM-T Easy载体中,成功构建了原核表达载体,转化***,对鉴定的阳性克隆进行序列测定,并用标准化的阳性质粒进行绝对荧光定量PCR标准曲线的建立;计算hlo-miR-275标准拷贝数,通过SPSS软件分析其在长角血蜱卵不同发育时期的表达显著性差异.本实验建立的miR-275和β-actin标准曲线斜率分别为M=-2.982,M=-3.038,回归系数分别为R2=0.999,R2=0.997,说明线性关系良好;产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;重复性实验结果显示所构建的重组质粒Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5％,说明标准曲线重复性好,稳定性高.本研究建立了hlo-miR-275、β-actin的标准曲线,为研究hlo-miR-275在长角血蜱中的生物学意义奠定了基础,也为研究miR-275在其它近源物种中的作用提供了有价值的参考.

关键词：兽医学长角血蜱荧光定量PCR 标准曲线动态变化

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Bantam在长角血蜱不同变态发育时期表达谱及代谢通路分析

Bantam在长角血蜱不同变态发育时期表达谱及代谢通路分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成袁晓松王芳芳郭锦霞王素艳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

本研究参考miRBase数据库中Bantam序列,设计特异性引物,RT-PCR方法获得Bantam序列并进行生物信息学分析.利用qRT-PCR分析长角血蜱不同变态发育过程中Bantam的表达谱特征.预测其靶标基因,Cytoscape_v2.8软件模拟B antam与潜在靶标基因在... 详细信息

本研究参考miRBase数据库中Bantam序列,设计特异性引物,RT-PCR方法获得Bantam序列并进行生物信息学分析.利用qRT-PCR分析长角血蜱不同变态发育过程中Bantam的表达谱特征.预测其靶标基因,Cytoscape_v2.8软件模拟B antam与潜在靶标基因在代谢通路中的相互作用.Bantam序列高度保守,长角血蜱与果蝇有较近的亲缘关系.其表达丰度在卵中最高,幼蜱阶段次之,而在成蜱阶段最低.比较而言,卵中的表达丰度和蜱发育的其他阶段表达丰度差异显著(P＜0.05),幼蜱,若蜱以及成蜱之间仅有较小差异.代谢通路结果显示,Bantam可对多个靶基因进行转录后调控.同时一个靶基因也可能受到多个miRNA分子的调控.不同物种来源的Bantam序列高度保守,并在蜱不同变态发育时期具有一定的时序性.参与多个基因的表达调控过程,亦协同其他miRNA分子对靶基因功能的发挥起着重要的作用.

关键词：兽医学长角血蜱变态发育基因表达谱

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狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化、原核表达及纯化

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中国人兽共患病学报 2012年第9期28卷 932-937页

作者：鞠美芳殷相平柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

目的有效检测狂犬病毒抗原。方法本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子。将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+)分别双酶切、胶回... 详细信息

目的有效检测狂犬病毒抗原。方法本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子。将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+)分别双酶切、胶回收后连接并转化至Rosetta(DE3)菌株。挑选阳性重组表达菌经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。同时对最佳表达条件进行了研究,重组菌在30℃、IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值。结果狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区通过密码子优化后能够在大肠杆菌中成功表达,表达产物具有良好的反应原性。结论该项研究为后续检测狂犬病毒抗原的ELISA试剂盒的研发建立基础。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化原核表达

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多房棘球蚴感染与宿主相互作用的免疫学机制研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 401-405页

作者：娄忠子李宏民闫鸿斌倪兴维贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

通过感染过程中宿主的固有免疫和获得性免疫的作用,多房棘球蚴可调节一系列虫体与宿主的相互作用效应,这些效应有助于虫体在宿主肝脏内的增殖和成熟,从而完成其生活史;对中间宿主来说,则可限制寄生所导致的病理变化的发展。本文主要针... 详细信息

通过感染过程中宿主的固有免疫和获得性免疫的作用,多房棘球蚴可调节一系列虫体与宿主的相互作用效应,这些效应有助于虫体在宿主肝脏内的增殖和成熟,从而完成其生活史;对中间宿主来说,则可限制寄生所导致的病理变化的发展。本文主要针对多房棘球蚴免疫相关分子在提高寄生虫生存能力等方面与宿主间的免疫应答研究进行综述。

关键词：多房棘球蚴免疫相关分子宿主-虫体相互作用

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