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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：骆学农侯俊玲张少华刘振勇巩伟周邦信才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室

猪囊虫病是由猪带绦虫的幼虫—猪囊虫感染猪或人而引起的一种人兽共患的寄生虫病。人绦虫主要以神经性脑囊虫的发病率最高,常引发癫痫、失明等症状。猪囊虫病不仅造成养猪业巨大的经济损失,而且也

关键词：猪带绦虫免疫效力基因工程减虫率 TSOL18

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人体带绦虫病诊断方法研究进展

人体带绦虫病诊断方法研究进展

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十二次全国学术会议暨第三次国际寄生虫学学术研讨会

作者：贾万忠王玉朝闫鸿斌郭爱疆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

带绦虫寄生于人的小肠内,不仅严重影响人的身体健康,而且患者成为囊尾蚴病的重要传染源。带绦虫患者及时而准确的诊断和驱虫治疗对控制囊尾蚴病的流行具有十分重要的意义。本文就目前人体带绦虫感染或寄生的诊断方法和未来发展方向进行...

带绦虫寄生于人的小肠内,不仅严重影响人的身体健康,而且患者成为囊尾蚴病的重要传染源。带绦虫患者及时而准确的诊断和驱虫治疗对控制囊尾蚴病的流行具有十分重要的意义。本文就目前人体带绦虫感染或寄生的诊断方法和未来发展方向进行综述。用于人绦虫病临床诊断的方法主要包括虫体形态学观察,粪便或肛门拭子涂片显

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猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：张少华骆学农贾万忠郭爱疆景志忠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

囊尾蚴病(Cysticercosis)是危害严重的食源性人兽共患病之一。利用重组蛋白和合成肽作为替代抗原,是解决该病诊断抗原来源问题的一条理想途径。目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并鉴定其抗原特性,建立猪囊尾蚴间接ELISA检测方法... 详细信息

囊尾蚴病(Cysticercosis)是危害严重的食源性人兽共患病之一。利用重组蛋白和合成肽作为替代抗原,是解决该病诊断抗原来源问题的一条理想途径。目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并鉴定其抗原特性,建立猪囊尾蚴间接ELISA检测方法。方法通过RT-PCR从猪带绦虫囊尾蚴mRNA中扩增出TS-CC18ORF,将TS-CC18 ORF亚克隆到表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株,采用Ni-FF亲和层析柱提纯表达蛋白。Tricine-SDS—PAGE及Western blotting分析抗原特性。以TS-CC18作为包被抗原,优化各种ELISA反应条件,并与全囊虫层析抗原ELISA进行诊断效果比较。结果测序确证TS-CC18ORF大小约为261bp,与GenBank上发表的AF356330核苷酸相似性为85.1%,氨基酸相似性为73.6%。Tricine-SDS-PAGE表明,重组菌经0.4 mmol/L IPTG诱导6 h,可稳定表达可溶性TS-CC18重组蛋白,其相对分子质量约16 kD。Western blotting检测诱导的蛋白能与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应,与细颈囊尾蚴、旋毛虫、弓形虫病猪血清无交叉反应。确定的TS-CC18抗原最佳包被量为10μg/mL,待检血清最佳稀释度为1:50,兔抗猪IgG-HRP的工作浓度为1:6000,作用时间为60 min。结果判定以P/N≥12.0为阳性,P/N<2.0为阴性。以全囊虫层析抗原ELISA检测结果为参照标准,该方法的相对敏感性达88%,相对特异性为100%,总符合率为97.4%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃至少可放置6个月。结论成功建立了猪囊尾蚴TS-CC18间接ELISA抗体检测方法,其特异性、敏感性及稳定性良好,对于快速诊断猪囊尾蚴病及血清流行病学调查具有应用价值。

关键词：猪囊尾蚴 TS-CC18抗原原核表达间接ELISA

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犬科动物棘球绦虫感染检测方法研究进展

犬科动物棘球绦虫感染检测方法研究进展

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十二次全国学术会议暨第三次国际寄生虫学学术研讨会

作者：贾万忠闫鸿斌王玉朝郭爱疆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

本文概述了犬科动物(终末宿主)感染棘球绦虫的检测方法,以及这些检测方法的优缺点和今后发展方向。世界卫生组织(WHO)和动物卫生组织(OIE)推荐的常规的检测方法"槟榔碱泻下法"和"剖检法",可作为犬科动物感染棘球绦...

本文概述了犬科动物(终末宿主)感染棘球绦虫的检测方法,以及这些检测方法的优缺点和今后发展方向。世界卫生组织(WHO)和动物卫生组织(OIE)推荐的常规的检测方法"槟榔碱泻下法"和"剖检法",可作为犬科动物感染棘球绦虫检测方法的"金标准",但费时费力且检出率低。正在研究和开发的一些新方法如粪抗原-ELISA

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猪病原抗原免疫识别关键分子基因结构与多样性研究

猪病原抗原免疫识别关键分子基因结构与多样性研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：景志忠莫斯科冯海燕李玩生王生富房永祥陈国华曾爽贾怀杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

机体获得性免疫主要与抗原递呈细胞(APCs)和T、B淋巴细胞上的许多免疫识别关键分子如MHC、T细胞受体(TCR)和CD4/8分子等密切相关,本研究以中国合作猪的这些分子为对象,在核酸水平分析其基因组、功能分子基因结构及其多样性,探讨与病原... 详细信息

机体获得性免疫主要与抗原递呈细胞(APCs)和T、B淋巴细胞上的许多免疫识别关键分子如MHC、T细胞受体(TCR)和CD4/8分子等密切相关,本研究以中国合作猪的这些分子为对象,在核酸水平分析其基因组、功能分子基因结构及其多样性,探讨与病原抗原复杂性的统一。(1)、克隆和鉴定了猪MHCⅠ、MHCⅡ类分子的12个完整基因组序列和14个全长基因,包括SLA-1、2、3和DRA、DQA、DQB、DRB基因等。基因组序列分析发现经典SLAⅠ和Ⅱ类含有1个5′UUR、8个外显子(SLAⅠ类)、4个外显子(DRA和DQA)/5个外显子(DQB)/6个外显子(DRB)和1个3′UTR,具有十分丰富的遗传多样性。基因间的差异主要存在于与抗原肽结合部位有关的部分序列,其他部位序列相对比较保守。(2)、分别克隆和鉴定了猪TCR的α、β、γ和δ链基因,分别获得其36、34、8、5个转录本,均含有特异性识别、结合抗原的V区、D/J区和C区,主要差异在V区,表现出明显的遗传多态性,与pMHC-Ag的多样性相对应。(3)、克隆鉴定了CD4基因、CD8α/β链基因,在基因序列上均含有胞外区、跨膜区和胞浆区基因结构,其中胞外区含有编码识别和结合pMHCⅡ/Ⅰ-Ag的序列结构。

关键词：合作猪 SLAⅠ/Ⅱ类分子 T细胞受体 CD4/8分子多样性

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猪带绦虫/囊尾蚴病研究

猪带绦虫/囊尾蚴病研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：才学鹏骆学农张少华侯俊玲郭爱疆刘振勇中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室

人神经脑囊尾蚴病(NCC)是一种最严重的囊虫病,是由于食入猪带绦虫病患者排出的绦虫虫卵而导致的粪源性感染。猪带绦虫作为一种主要的人兽共患寄生虫病,人是其唯一的终末宿主,此时人是绦虫病患者,而猪和人都可作为其中间宿主,感染其幼虫... 详细信息

人神经脑囊尾蚴病(NCC)是一种最严重的囊虫病,是由于食入猪带绦虫病患者排出的绦虫虫卵而导致的粪源性感染。猪带绦虫作为一种主要的人兽共患寄生虫病,人是其唯一的终末宿主,此时人是绦虫病患者,而猪和人都可作为其中间宿主,感染其幼虫而成为囊虫病患者。近年来,尽管在绦虫病和猪囊虫病的诊断、治疗和免疫预防等方

关键词：囊尾蚴病猪带绦虫囊虫病

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高效液相色谱法测定白牦牛乳中VC的含量

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中兽医医药杂志 2009年第6期28卷 33-35页

作者：和燕玲景志忠甘肃农业大学甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

白牦牛(whiteyak)是我国甘肃省天祝县特有的畜种资源。白牦牛乳洁白浓香,营养丰富,具有较高的营养价值,对白牦牛乳中维生素含量的研究具有重要的营养学意义和价值。有关维生素的分析方法较多,包括药典中的标准方法——碘量法、比色法、... 详细信息

白牦牛(whiteyak)是我国甘肃省天祝县特有的畜种资源。白牦牛乳洁白浓香,营养丰富,具有较高的营养价值,对白牦牛乳中维生素含量的研究具有重要的营养学意义和价值。有关维生素的分析方法较多,包括药典中的标准方法——碘量法、比色法、电位滴定法、化学法、气相色谱法、高效液相色谱法和微生物法等,[第一段]

关键词：高效液相色谱法牦牛乳维生素含量 VC 测定营养价值电位滴定法气相色谱法

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长角血蜱成蜱免疫家兔模型的建立及对生长发育的影响

长角血蜱成蜱免疫家兔模型的建立及对生长发育的影响

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：谢俊仁刘光远田占成龚真莉刘建刚张丽艳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室

每隔2周用长角血蜱成蜱定量感染家兔,成功构建了具有不同抵抗力的家兔免疫模型。ELISA检测结果表明,家兔血清中的抗体效价从初次叮咬后第3周开始呈阳性,随着叮咬次数的增加抗体水平逐渐地上升,第11周时达到高峰。具有一定抵抗力的家兔... 详细信息

每隔2周用长角血蜱成蜱定量感染家兔,成功构建了具有不同抵抗力的家兔免疫模型。ELISA检测结果表明,家兔血清中的抗体效价从初次叮咬后第3周开始呈阳性,随着叮咬次数的增加抗体水平逐渐地上升,第11周时达到高峰。具有一定抵抗力的家兔对长角血蜱成蜱的吸血和生长发育影响显著,其抗体水平与长角血蜱成蜱在兔体的吸血周期、死亡率成正相关,与雌蜱的饱血脱落率、饱血体重成负相关。结果进一步证明,蜱的唾液腺是其主要的免疫器官之一。家兔抗体水平的持续期足以使长角血蜱完成一个世代,可以满足试验需求,是抗蜱免疫研究理想的阳性对照模型。同时,血清中特异性抗体的效价也可以作为判定动物对长角血蜱抵抗力强弱的重要指标之一。

关键词：长角血蜱成蜱免疫模型生长发育

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青海血蜱核糖体蛋白L23a基因克隆与分析

青海血蜱核糖体蛋白L23a基因克隆与分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：高金亮罗建勋李有全樊瑞泉赵海平关贵全刘军龙殷宏家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所

通过对青海血蜱cDNA表达文库进行筛选获得了一个阳性克隆(Hq22)。利用5′RACE技术克隆到了该阳性克隆的全长cDNA序列。BLASTN/P(NCBI)分析表明其编码产物为蜱的核糖体蛋白L23a(Rp123a)。RT-PCR分析表明该基因在蜱的不同发育阶段和不同... 详细信息

通过对青海血蜱cDNA表达文库进行筛选获得了一个阳性克隆(Hq22)。利用5′RACE技术克隆到了该阳性克隆的全长cDNA序列。BLASTN/P(NCBI)分析表明其编码产物为蜱的核糖体蛋白L23a(Rp123a)。RT-PCR分析表明该基因在蜱的不同发育阶段和不同组织中广泛表达。根据青海血蜱Rp123a的序列信息,成功克隆了长角血蜱和微小牛蜱的Rp123a。序列分析表明蜱的Rp123a基因高度保守。在大肠杆菌中表达的青海血蜱Rp123a重组蛋白不能刺激动物产生抗蜱免疫保护性。

关键词：青海血蜱核糖体蛋白克隆与分析

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旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达及抗原性分析

旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达及抗原性分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：盖文燕李文卉王鸿盛姚菊霞曲自刚王艳华张德林付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsSerPIN)基因序列设计引物,从中国河南猪旋毛虫分离株肌幼虫总RNA应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,克隆到pMD-18T载体并测序鉴定。对重组质粒pMD-18T-TsSerPIN进行限制性酶切,获取目的基因片段... 详细信息

根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsSerPIN)基因序列设计引物,从中国河南猪旋毛虫分离株肌幼虫总RNA应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,克隆到pMD-18T载体并测序鉴定。对重组质粒pMD-18T-TsSerPIN进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-TsSerPIN,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定TsSerPIN重组蛋白的抗原性。构建的重组表达质粒pET30a-TsSerPIN阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确。含有pET30a-TsSerPIN重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为42.5kDa,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot和ELISA结果表明TsSerPIN重组抗原可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。

关键词：旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂重组抗原抗原性

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