检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2013年第7期43卷 701-706页

作者：李慧霞朱学亮刘振勇窦永喜李辉骆学农才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET... 详细信息

为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET-95和pET-103,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析后,用纯化的两种重组蛋白进行iELISA方法研究。结果显示,ORF95和ORF103大小分别为483bp和570bp,重组菌经1mmol/L IPTG诱导5h后,分别在30ku和35ku处有高水平的融合表达,且均以包涵体形式存在。两种目的蛋白以10ng+20ng混合作为包被抗原时,该iELISA方法检测羊痘自然感染血清、弱毒疫苗免疫羊血清和阴性血清的D450nm有明显差异,且与口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、羊口疮病毒无交叉反应。因此,该方法能有效排除羊痘弱毒疫苗免疫造成的干扰,可特异性检测羊痘野毒感染的血清样品。

关键词：山羊痘病毒绵羊痘病毒 ORF95基因 ORF103基因间接酶联免疫吸附试验

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旋毛虫组织蛋白酶B基因TsCB1的克隆与生物信息学分析

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中国兽医科学 2013年第7期43卷 661-667页

作者：谢志宙李文卉曲自刚刘静宜高小磊岳龙张德林付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了研究旋毛虫组织蛋白酶B的功能,对GenBank中旋毛虫基因组数据库和EST数据库进行检索,获得旋毛虫组织蛋白酶B的cDNA序列并设计引物。以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,进行RT-PCR,将PCR产物克隆到pMD18-T载体后测序并进行生物信息学分析。... 详细信息

为了研究旋毛虫组织蛋白酶B的功能,对GenBank中旋毛虫基因组数据库和EST数据库进行检索,获得旋毛虫组织蛋白酶B的cDNA序列并设计引物。以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,进行RT-PCR,将PCR产物克隆到pMD18-T载体后测序并进行生物信息学分析。结果表明,成功克隆到旋毛虫组织蛋白酶B基因(TsCB1)的cDNA序列,TsCB1cDNA含有1个由1 449个核苷酸组成的完整的开放阅读框,编码482个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量理论值为55.1ku,理论等电点为7.66。TsCB1第1～35位氨基酸残基为信号肽序列,有2个潜在的N-糖基化位点,具有1个生长调节素B结构域和半胱氨酸蛋白酶结构域,半胱氨酸残基活性位点被丝氨酸残基所替换,同源性分析表明与其他线虫组织蛋白酶B的一致性在60%左右。

关键词：旋毛虫组织蛋白酶B 克隆生物信息学分析

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细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)的研究进展

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中国兽医科学 2013年第11期43卷 1206-1210页

作者：刘全元闫鸿斌娄忠子李立史万贵刘聪暖殷宏贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046

论述了细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)的分子遗传标记特征及变异情况、宿主范围、地理分布、流行病学意义,分析了G3基因型研究中存在的挑战,预测了G3基因型的未来研究方向,旨在给从事该领域研究的学者提供丰富的分子流行病学信息,为棘球... 详细信息

论述了细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)的分子遗传标记特征及变异情况、宿主范围、地理分布、流行病学意义,分析了G3基因型研究中存在的挑战,预测了G3基因型的未来研究方向,旨在给从事该领域研究的学者提供丰富的分子流行病学信息,为棘球蚴病分子流行病学调查和防治策略的制定提供理论依据和技术指导。

关键词：细粒棘球绦虫 G3基因型 cox1基因 nad1基因流行病学

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土壤中弓形虫半套式PCR检测方法的建立

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甘肃农业大学学报 2013年第5期48卷 19-23,31页

作者：孟鹏叶强王萌张德林赵晋军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

根据NCBI上公布的弓形虫RH株的529bp基因序列(登录号:AF146527)用Primer Premier 5.0设计3条特异性引物TX1、TX2和TX3,建立土壤中弓形虫的半套式PCR检测方法,并将引物TX1与TX3扩增产物克隆到pMD18-T载体上进行测序.结果表明:该方法能扩... 详细信息

根据NCBI上公布的弓形虫RH株的529bp基因序列(登录号:AF146527)用Primer Premier 5.0设计3条特异性引物TX1、TX2和TX3,建立土壤中弓形虫的半套式PCR检测方法,并将引物TX1与TX3扩增产物克隆到pMD18-T载体上进行测序.结果表明:该方法能扩增出约350bp的片段,TX1与TX3扩增片段约520bp,克隆到pMD18-T载体上的521bp片段与所选取的弓形虫RH株的目的基因序列相似性100%.该检测方法特异性强,以犬新孢子虫、牛微小隐孢子虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、牛链球菌、猪链球菌、蒙氏肠球菌基因组为模板均未扩增出条带;灵敏性高,检测极限为20fg弓形虫DNA;在22份土壤样品中检出3份阳性样品.

关键词：土壤弓形虫 529 bp基因序列半套式PCR

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幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆表达及活性测定

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中国兽医科学 2013年第3期43卷 283-288页

作者：蔡靓李克生杜惠芬付宝权李文卉曲自刚谢志宙甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省医学科学研究院医学生物中心甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B(UreB)的免疫学活性,采用PCR方法扩增Hp UreB基因,经双酶切构建表达载体pET28a-UreB,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经过IPTG诱导进行表达,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清抗体效价,并... 详细信息

为研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B(UreB)的免疫学活性,采用PCR方法扩增Hp UreB基因,经双酶切构建表达载体pET28a-UreB,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经过IPTG诱导进行表达,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清抗体效价,并使用感染患者血清进行Western-blot鉴定。结果显示,扩增的Hp UreB基因序列与GenBank中的26 695标准株序列相比较核苷酸序列同源性达到96.73%,氨基酸序列同源性高达99.30%,SDS-PAGE分析发现表达的重组蛋白分子质量约为66ku,以可溶性形式存在。Western-blot结果显示重组UreB能被Hp感染患者血清特异性识别,同时,用纯化后的UreB蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,表明UreB具有很好的免疫原性。试验证明表达出具有生物活性的UreB蛋白,为Hp快速检测方法的研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位原核表达免疫原性

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多房棘球绦虫脂肪酸结合蛋白功能初步分析

多房棘球绦虫脂肪酸结合蛋白功能初步分析

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十四次全国学术会议暨第五次国际寄生虫学学术研讨会

作者：郑亚东骆学农侯俊玲才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

由于缺乏相关的酶类,多房棘球绦虫不能从头合成长链脂肪酸,需要完全从宿主获取。脂肪酸结合蛋白(Fatty acid-binding protein,FABP)是一种小脂质伴侣分子,可能在寄生虫脂肪代谢中发挥作用。在本研究中,我们利用基因组和转录组数据分析... 详细信息

由于缺乏相关的酶类,多房棘球绦虫不能从头合成长链脂肪酸,需要完全从宿主获取。脂肪酸结合蛋白(Fatty acid-binding protein,FABP)是一种小脂质伴侣分子,可能在寄生虫脂肪代谢中发挥作用。在本研究中,我们利用基因组和转录组数据分析了多房棘球绦虫FABPs的基因组结构和阶段表达特征;通过结合实验确定了重组FABPs(rFABPs)与脂肪酸的结合能力;并且应用Griess方法,评价了rFABP3对巨噬细胞免疫功能的影响。研究结果表明,多房棘球绦虫具有5个FABPs基因座,分别为FABP1,FABP2,FABP3,FABP4和FABPS,编码4种不同的FABPs(FABP2和FABP3编码相同的FABP)。与哺乳动物相比,多房棘球绦虫FABP基因的结构不典型,含有1个或没有内含子。分子系统发育学分析表明,现有的FABP基因结构可能在多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫虫种形成之前就已经形成。FABP2/3和FABP4在泡球蚴、原头蚴和泡球蚴发育早期都有表达,但是FABP2/3在泡球蚴中呈现高水平表达。多房棘球绦虫FABPs可以与顺式十八碳四烯酸结合,但不与DAUDA和视黄醇结合。尽管缺乏信号肽,FABP3却存在于囊液中。研究结果还表明,rFABP3既不能激活小鼠骨髓来源的巨噬细胞产生NO,也不能抑制脂多糖激活的小鼠骨髓来源的巨噬细胞产生NO,但与热灭活单核李氏杆菌(heat-killed Listeria monocytogenes,用它单独处理时检测不到NO)共同处理后,则会以剂量依赖的方式诱导产生NO。以上研究结果表明,多房棘球绦虫FABPs可能在控制寄生虫/宿主微环境中发挥一定的作用。

关键词：多房棘球绦虫脂肪酸结合蛋白脂肪酸巨噬细胞 NO

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豆状囊尾蚴烯醇酶在毕赤酵母中的高效表达及其功能分析

豆状囊尾蚴烯醇酶在毕赤酵母中的高效表达及其功能分析

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十四次全国学术会议暨第五次国际寄生虫学学术研讨会

作者：张少华骆学农侯俊玲郑亚东尤亚南才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

烯醇酶作为一种多功能蛋白,与多种病原的致病性关系密切。本研究根据豆状囊尾蚴烯醇酶Tpeno基因序列及毕赤酵母密码子偏好性设计特异性引物,PCR扩增Tpeno编码基因,构建pPIC9K-Tpeno真核表达载体,电转化Pichiapastoris GS115宿主菌;甲醇... 详细信息

烯醇酶作为一种多功能蛋白,与多种病原的致病性关系密切。本研究根据豆状囊尾蚴烯醇酶Tpeno基因序列及毕赤酵母密码子偏好性设计特异性引物,PCR扩增Tpeno编码基因,构建pPIC9K-Tpeno真核表达载体,电转化Pichiapastoris GS115宿主菌;甲醇诱导表达后经SepharoseS300层析纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot分析。采用分光光度法检测磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)生成速率,测定Tpeno对底物的分解活性和与人纤溶酶原的结合活性;免疫组化及间接免疫荧光分析Tpeno的组织分布。结果表明:Tpeno在酵母中可高效稳定表达,纯化后的目的产物可达15.6 mg/升培养液,且可与抗His-Tpeno单抗1D7特异性反应。酶反应动力学结果表明,Tpeno能够识别并水解2-PGA/PEP,且表现为底物及时间依赖关系。Tpeno能特异结合人纤溶酶原,同时其活性可被赖氨酸类似物ε-氨基己酸所抑制,表明Tpeno为人纤溶酶原的特异受体,赖氨酸残基在二者相互作用中发挥重要作用。免疫组化表明,Tpeno蛋白主要分布于囊尾蚴囊壁表面。间接免疫荧光观察钙小体外表面可见强荧光信号。以上结果表明,Tpeno具有糖酵解酶、纤溶酶原受体及钙小体相关蛋白的特性,在虫体生长发育、移行及适应宿主生存方面可能发挥重要作用,在囊尾蚴病的防治中有潜在的应用价值。

关键词：豆状囊尾蚴烯醇酶真核表达载体多功能性组织定位

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狮棘球绦虫(Echinococcus felidis)生物学特性研究进展

狮棘球绦虫(Echinococcus felidis)生物学特性研究进展

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：刘聪暖娄忠子范彦雷闫鸿斌李立贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

本文旨在论述狮棘球绦虫的分子遗传标记特征,种地位的确立,种系发生,鉴定方法,宿主范围,地理分布,流行病学特征及未来研究方向等,为从事该领域研究的学者和临床工作者提供背景知识,并对棘球蚴病的临床流行病学调查和防治工作提供依据和... 详细信息

本文旨在论述狮棘球绦虫的分子遗传标记特征,种地位的确立,种系发生,鉴定方法,宿主范围,地理分布,流行病学特征及未来研究方向等,为从事该领域研究的学者和临床工作者提供背景知识,并对棘球蚴病的临床流行病学调查和防治工作提供依据和指导.

关键词：狮棘球绦虫种系发生分子遗传标记流行病学生物学特性

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豆状囊尾蚴烯醇酶在毕赤酵母中的高效表达及其功能分析

豆状囊尾蚴烯醇酶在毕赤酵母中的高效表达及其功能分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：张少华骆学农侯俊玲郑亚东尤亚南才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

本研究根据豆状囊尾蚴烯醇酶Tpeno基因序列及毕赤酵母密码子偏好性设计特异性引物,PCR扩增Tpeno编码基因,构建pPIC9K-Tpeno真核表达载体,电转化Pichiapastoris Gs 115宿主菌;甲醇诱导表达后经Sepharose S300层析纯化,并进行SDS-PAGE和We... 详细信息

本研究根据豆状囊尾蚴烯醇酶Tpeno基因序列及毕赤酵母密码子偏好性设计特异性引物,PCR扩增Tpeno编码基因,构建pPIC9K-Tpeno真核表达载体,电转化Pichiapastoris Gs 115宿主菌;甲醇诱导表达后经Sepharose S300层析纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot分析.采用分光光度法检测磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)生成速率,测定Tpeno对底物的分解活性和与人纤溶酶原的结合活性;免疫组化及间接免疫荧光分析Tpeno的组织分布.结果表明,Tpeno具有糖酵解酶、纤溶酶原受体及钙小体相关蛋白的特性,在虫体生长发育、移行及适应宿主生存方面可能发挥重要作用,在囊尾蚴病的防治中有潜在的应用价值.

关键词：豆状囊尾蚴毕赤酵母烯醇酶真核表达载体组织定位

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细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)研究进展

细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)研究进展

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：刘全元闫鸿斌娄忠子李立史万贵刘聪暖殷宏贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046

论述细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)的分子遗传标记特征及变异情况、宿主范围、地理分布、流行病学意义,分析G3基因型研究中所存在的挑战,预测G3基因型的未来研究方向,给从事该领域研究的学者提供丰富的分子流行病学信息,为棘球蚴病分子... 详细信息

论述细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)的分子遗传标记特征及变异情况、宿主范围、地理分布、流行病学意义,分析G3基因型研究中所存在的挑战,预测G3基因型的未来研究方向,给从事该领域研究的学者提供丰富的分子流行病学信息,为棘球蚴病分子流行病学调查和防治策略的制定提供理论依据和技术指导.

关键词：兽医学细粒棘球绦虫基因型流行病学

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