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2014年全国养羊生产与学术研讨会

作者：张克山刘永杰成伟伟尚佑军逯忠新刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

天然免疫又称为非特异性免疫、固有免疫是机体与生俱来的抵抗体外病原体侵袭、清除体内抗原性异物的第一道屏障[1]。细胞天然免疫是机体天然免疫的关键组成部分,随着人们对巨噬细胞、NK细胞及树突状细胞(DCs)等天然免疫细胞的深入研究,... 详细信息

天然免疫又称为非特异性免疫、固有免疫是机体与生俱来的抵抗体外病原体侵袭、清除体内抗原性异物的第一道屏障[1]。细胞天然免疫是机体天然免疫的关键组成部分,随着人们对巨噬细胞、NK细胞及树突状细胞(DCs)等天然免疫细胞的深入研究,加上天然免疫具有即时性且缺乏记忆的特点,天然免疫得到越来越广泛的重视和深入的研究。病毒成功侵入机体必须抑制甚至破坏宿主的天然免疫应答以争取获得足够的时

关键词：羊传染性脓疱病毒口疮病毒天然免疫应答宿主免疫应答

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转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州 730046

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成... 详细信息

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链DNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RNA聚合酶的作用下转录,由一分子DNA模板可得到100～1000拷贝转录本,在15～30min内可将靶序列扩增1010左右.TINA是比较敏感的核酸扩增技术，其检测比较简便，适合高通量筛选，在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。本文就转录介导的扩增技术在诊断中的应用进行论述.

关键词：转录介导扩增技术 RNA聚合酶逆转录酶快速检测

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不同饲养模式下肉羊疫病特点及综合防控

不同饲养模式下肉羊疫病特点及综合防控

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2010年全国养羊生产与学术研讨会

作者：张克山尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室，兰州 730046

我国养羊区域分布有农区、牧区、半农半牧区，饲养方式有散养(放养)、半舍饲和舍饲3种。本文就肉羊3种不同饲养模式疫病特点及综合防控分别做以概述，以期对业内同行有所帮助。

关键词：饲养模式肉羊疫病特点综合防控区域分布

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羊传染病四季发病特点及其防制

羊传染病四季发病特点及其防制

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中国畜牧兽医学会养羊学分会2012全国养羊生产与学术研讨会议

作者：张克山尚佑军逯忠新刘湘涛家畜疫病病原生物学国家重点实验室，中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室，国家口蹄疫参考实验室，兰州 730046

本文首先阐述了一年四季羊发生传染病的特点，简要介绍了四季常见的传染病的种类，并根据不同季节的发病状态从疫苗免疫、用药方面提出了相应的防控措施。

关键词：羊传染病发病特点防控对策

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羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析

羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析

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2010年全国养羊生产与学术研讨会

作者：张克山何继军尚佑军郑海学靳野刘永杰刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室，甘肃 730046

羊传染性脓疱严重威胁肉羊产业的健康发展和人民群众的身体健康。选取湖北某羊场疑似传染性脓疱病毒，经电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定鉴定为羊传染性脓疱病毒。序列遗传进化分析表明研究鉴定的传染性脓疱病毒... 详细信息

羊传染性脓疱严重威胁肉羊产业的健康发展和人民群众的身体健康。选取湖北某羊场疑似传染性脓疱病毒，经电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定鉴定为羊传染性脓疱病毒。序列遗传进化分析表明研究鉴定的传染性脓疱病毒与2007年分离于中国台湾毒株(DQ904351)同源性达100％，与印度2004到2005年分离于绵羊(DQ263306、DQ263305)、山羊(DQ263304、DQ263303)的传染性脓疱病毒同属于1个进化分支。提交并公布于enBank的B2L基因序列为分子流行病学研究积累了资料。

关键词：羊传染性脓疱病毒湖北株病毒鉴定分子特征序列遗传进化流行病学

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连环恒温扩增技术及其在临床诊断中的应用

连环恒温扩增技术及其在临床诊断中的应用

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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室子兰州 730046

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即... 详细信息

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即可完成核酸扩增反应.如果再设计两条环状引物Loop F和Loop B,可加速扩增反应.该方法既可对DNA进行扩增,也可对RNA进行扩增.作为一种简便、快速、高的特异的基因扩增法，LAMP法在食品卫生质量检验、动物胚胎早期鉴定、临床疾病诊断等领域展现了广阔的应用前景.本文就连环恒温扩增技术在临床诊断中的应用进行论述.

关键词：连环恒温扩增技术临床诊断 DNA聚合酶特异引物

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口蹄疫O/A型嵌合病毒的构建与拯救

口蹄疫O/A型嵌合病毒的构建与拯救

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：杨帆郑海学靳野郭建宏何继军杨亚民吕律刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州 730046

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口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因重组杆状病毒的构建与表达

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甘肃农业大学学报 2007年第4期42卷 5-10页

作者：马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅刘在新杨孝朴甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州7300761 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状... 详细信息

通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状病毒骨架Bac-N-Blue共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染Sf9昆虫细胞,通过间接ELISA方法,检测细胞培养基上清液中表达的口蹄疫病毒抗原.结果表明,口蹄疫病毒基因片段3ABC正确克隆到杆状病毒载体上,重组病毒可在昆虫细胞中表达目的蛋白.

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒 Sf9细胞

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A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列的测定及其基因特征分析

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安徽农业科学 2013年第2期41卷 640-641,700页

作者：谢毅牟一娇朱琳刘强赵兴绪甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[目的]测定A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列并分析其基因特征,为研究我国最近发生的A型口蹄疫病毒的致病性、流行规律以及筛选适用的疫情防控疫苗株奠定分子基础。[方法]应用RT-PCR方法,分段扩增、克隆A/HeN/1/2009株基因,并... 详细信息

[目的]测定A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列并分析其基因特征,为研究我国最近发生的A型口蹄疫病毒的致病性、流行规律以及筛选适用的疫情防控疫苗株奠定分子基础。[方法]应用RT-PCR方法,分段扩增、克隆A/HeN/1/2009株基因,并进行基因测序;借助DNAStar分子生物学软件,从分子流行病学角度分析A/HeN/1/2009株与参考毒株之间可能的遗传衍化关系。[结果]该毒株基因组全长8 171 nts[不包括poly(C)区段和poly(A)尾巴],其中5'-UTR和3'-UTR分别为1 080、92 nts,蛋白编码区为6 999 nts。分析A/HeN/1/2009株遗传衍化关系显示,该毒株划为东南亚拓扑型Laos03系的VN09亚系,同源性依次为87.3%～91.8%、93.7%～94.5%和96.9%～98.4%。[结论]VP1中A24V、N85R、S196T,3A中I61V、T128S、E147G和A134V在该毒群的进化过程中扮演重要角色;A/SH/1/2009株VP1 140-160基序为RSD。

关键词：口蹄疫病毒 A HeN 1 2009株全基因组东南亚拓扑型

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ASFV解旋酶D1133L蛋白表达和抗体检测方法的建立及初步应用

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江西农业学报 2021年第6期33卷 1-6页

作者：侯景申超超张大俊杨博史喜绢张婷杨泽晓张克山郑海学李丹党文刘湘涛四川农业大学动物医学院四川成都611130 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133... 详细信息

为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133L的抗体应答情况。结果显示:成功表达纯化了D1133L蛋白,以此为抗原建立了ELISA抗体检测方法,该方法特异性高,灵敏性强,其检测结果与市售试剂盒检测结果的符合率达100%。家猪在感染ASFV后,针对D1133L的抗体在第5天可被检测到,在第7天抗体水平达到顶峰。

关键词： ASFV 解旋酶 D1133L 抗体检测应用

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