检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2025年第2期45卷 80-93页

作者：李翡翡徐国铭茹毅陈曙晖冯汉青西北师范大学生命科学学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046 兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730046

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引发的急性且高度传染性的动物疾病,其致死率极高,对全球的生猪产业造成了巨大的经济损失,并严重阻碍了产业的健康发展。ASFV属于Asfarviridae... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引发的急性且高度传染性的动物疾病,其致死率极高,对全球的生猪产业造成了巨大的经济损失,并严重阻碍了产业的健康发展。ASFV属于Asfarviridae科的DNA虫媒病毒,深入研究其抗原表位对开发检测方法和疫苗至关重要。随着抗原表位不断被发现,基于酶联免疫吸附技术和免疫层析技术的血清学检测方法已被广泛应用于检测猪血清中的抗体,用以快速评估猪群的疫病状态。已有研究通过筛选和鉴定如p30、p54、p72和CD2v等在ASFV感染过程中诱导特异性抗体反应的蛋白质,利用单克隆抗体和生物信息学工具,定义了众多线性和构象表位,为诊断检测方法和疫苗的开发奠定了基础。然而,病毒基因组的复杂性给疫苗和抗病毒药物的研发带来了巨大挑战,商业化的ASFV疫苗和治疗药物尚未问世,研究人员不断探索包括亚单位疫苗在内的多种疫苗策略,并通过基因编辑技术,开发出了一些有潜力的候选疫苗,但仍需进行更深入的研究以提高疫苗的安全性和有效性。因此,对国内外ASFV抗原表位研究、相关抗体检测技术及抗ASF疫苗研发方面的最新进展进行总结,旨在为开发新型高效检测技术和病毒疫苗提供参考及启示。

关键词：非洲猪瘟病毒疫苗抗原表位诊断检测

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产气荚膜梭菌β2毒素抗体竞争ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：赵佳慧马祎芳李学瑞高鹏程狄娜郑福英储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

为检测产气荚膜梭菌（Cp）β2毒素抗体，合成产气荚膜梭菌β2毒素基因并插入pET-32a载体，诱导表达后得到Cp β2毒素重组蛋白，以纯化的Cp β2毒素重组蛋白为包被抗原，Cp β2毒素单抗2A4为竞争性抗体与绵羊血清竞争性反应，HRP-山羊抗... 详细信息

为检测产气荚膜梭菌（Cp）β2毒素抗体，合成产气荚膜梭菌β2毒素基因并插入pET-32a载体，诱导表达后得到Cp β2毒素重组蛋白，以纯化的Cp β2毒素重组蛋白为包被抗原，Cp β2毒素单抗2A4为竞争性抗体与绵羊血清竞争性反应，HRP-山羊抗鼠IgG为二抗，建立并优化Cp β2毒素抗体的竞争ELISA检测方法。结果显示，蛋白包被浓度为1.5 μg/mL，待检血清不稀释，二抗1∶20 000稀释，避光显色15 min为最优反应条件。所建方法的阴性临界值为31.44%，阳性临界值为37.65%，检测阳性血清敏感度为1∶64，批间、批内试验变异系数均小于10%。与Cp的α、β1、ε毒素，腐败梭菌以及大肠杆菌阳性血清均无非特异性反应。检测200份临床绵羊血清样品，该竞争ELISA方法与间接ELISA方法的阳性符合率为85.7%，阴性符合率为95.9%，总符合率为92%。检测100份牛血清，符合率为100%。结果表明，本试验所建方法具有良好的重复性、特异性和敏感性，可以用于检测动物体内是否存在针对Cp β2毒素的抗体，为评估动物是否感染Cp提供了有效手段，并在Cp的流行病学调查及疫苗免疫效果评价中具有广阔的应用前景。

关键词：产气荚膜梭菌 β 重组蛋白单克隆抗体竞争ELISA 抗体检测

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基于可见光测定的山羊支原体山羊肺炎亚种抗原定量

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4874-4886页

作者：葛家振高鹏程田彤彤吴晓妮李倩倩田可昕宋国栋郑福英储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum ***,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)的病原,可用灭活疫苗和荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)间接血凝试剂进行预防和血清学检测,但高昂的培养成本和复杂的抗原定量一直困扰着生产人员。为解决生产实际中出现的这些问题,本研究基于Mccp代谢组学的前期理论基础,通过改变初始pH值的方法,初步筛选出初始p H值为7.8的可以同时提高2种抗原产量的糖发酵培养基。利用紫外可吸收光谱可识别酚红,以及十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)可与阴离子荚膜多糖结合的理论依据,建立了利用紫外光谱分析Mccp达到的培养阶段,以及利用CTAB沉淀法相对定量发酵液荚膜多糖抗原产量的方法。通过紫外图谱观察的方法可对应Mccp生长曲线进行指导生产,大大节省传统颜色变化单位(color change unit,CCU)法的监测时间,提高了原肉眼观察方法的精确度。建立的CTAB沉淀法可在5 h内完成对CPS含量的监测,与传统的差值法相比大大缩短了时间,并且其准确度得到苯酚-硫酸法的验证。本研究优化的一种培养基和建立的两种相关性比较方法,可有效降低Mccp生产成本,提高生产效率,这些方法已在本实验室的研究阶段得到应用,为进一步改进CCPP灭活疫苗和荚膜多糖的生产工艺以及快速定量提供了实验数据。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种改良培养基荚膜多糖紫外图谱 CTAB沉淀法

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单链DNA退火蛋白介导细菌基因组同源重组的机制及应用研究进展

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生物技术通报 2025年第1期41卷 39-48页

作者：尹号尤留超韩瑞高鹏程付磊储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

基因组编辑技术是研究细菌等微生物在基因功能、耐药机制及致病机制等方面的重要工具,而同源重组是细菌基因组编辑的重要方式之一,传统的细菌内源性重组途径存在效率低下的问题,而一种来自噬菌体的单链DNA退火蛋白(SSAP)表现出了远超内... 详细信息

基因组编辑技术是研究细菌等微生物在基因功能、耐药机制及致病机制等方面的重要工具,而同源重组是细菌基因组编辑的重要方式之一,传统的细菌内源性重组途径存在效率低下的问题,而一种来自噬菌体的单链DNA退火蛋白(SSAP)表现出了远超内源性重组途径的基因组编辑效率,该蛋白具有单链DNA结合活性、介导基因组定向重组的特点,使其成为目前极具潜力的基因组编辑工具。本文主要对同源重组基本原理、噬菌体源SSAP介导的同源重组途径的基本元件、重组机制模型以及应用策略展开概述,旨在为进一步解析单链DNA退火蛋白介导的同源重组过程提供帮助,为研究更多细菌基因功能、致病机制以及开发工程菌株提供技术支撑,也为缺乏基因编辑方法的细菌提供技术参考。

关键词：细菌单链DNA退火蛋白同源重组机制应用

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羊痘病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制与初步应用

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畜牧兽医学报 2025年

作者：何印娣石正旺石鑫泰陈婕廖焕程张帆罗俊聪朱昱茜席韬李帅鹏王川田宏郑海学甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

旨在建立一种快速、简便、特异、灵敏的羊痘病毒抗体的通用型胶体金检测方法。通过原核表达、纯化获得羊痘病毒122重组蛋白，并制备122蛋白多克隆抗体。将122蛋白与胶体金偶联，作为金标抗原，再将122蛋白及兔多克隆抗体包被在硝酸纤维... 详细信息

旨在建立一种快速、简便、特异、灵敏的羊痘病毒抗体的通用型胶体金检测方法。通过原核表达、纯化获得羊痘病毒122重组蛋白，并制备122蛋白多克隆抗体。将122蛋白与胶体金偶联，作为金标抗原，再将122蛋白及兔多克隆抗体包被在硝酸纤维素膜（NC）上，分别作为检测线（T线）和质控线（C线），经条件优化，研制成检测羊痘病毒抗体的胶体金免疫层析试纸条。结果表明，成功获得122重组蛋白，大小约为32 ku，胶体金试纸条可在12 min特异性检测到羊痘病毒抗体；与其他常见家畜疫病病原阳性血清无交叉反应；检测SPPV、LSDV和GTPV阳性血清的灵敏度分别为1:64、1:128和1:128，与市售羊痘抗体间接ELISA诊断试剂盒（效价1:128、1:256和1:256）的敏感性相当；对130份临床血清样品的检测与商品化试剂盒检测结果进行比较，两者的kappa值为0.93，为高度一致。本研究成功研制了羊痘病毒抗体通用型胶体金免疫层析试纸条，具有较高的敏感性和特异性，且具有成本低、检测快速、操作简便、结果容易判断等特点，对羊痘现场检测具有实际应用价值。

关键词：羊痘病毒 122蛋白多克隆抗体胶体金试纸条

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基于天蚕素D的新型抗病毒多肽对猪繁殖呼吸综合征病毒的抑制作用

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生物工程学报 2025年

作者：臧浩月彭婕郭慧琛孙世琪曾巧英周静静甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

由猪繁殖呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus， PRRSV）引发的猪繁殖呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome， PRRS）是目前危害养猪业的主要疾病之一。本研究旨在设计优化天然抗菌肽，筛选具有显著抑制PRRSV活性的抗病毒多肽，为PRRS防控制剂的研发提供新思路。将天蚕素D（cecropin D， CD）为母肽，通过氨基酸替换策略设计了CD-2、CD-3、CD-4这3个衍生物，利用固相合成技术合成CD及其衍生物，并使用质谱（mass spectrometry， MS）和反相高效液相色谱（reversed-phase high performance liquid chromatography， RP-HPLC）进行多肽的序列鉴定、纯化和纯度分析。通过圆二色谱研究多肽二级结构，使用CellTiter 96?AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒(CellTiter 96?AQueous one solution cell proliferation assay， MTS)测定多肽细胞毒性。通过蛋白免疫印迹（Western blotting， WB）、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction， RT-qPCR）以及间接免疫荧光（indirect immunofluorescence assay， IFA）研究多肽对PRRSV的抗病毒活性及作用阶段。MS以及RP-HPLC结果表明，CD及其衍生物被成功合成，且纯度高达95%。圆二色谱分析结果显示，CD衍生物在细胞膜模拟环境中表现出更稳定且丰富的α螺旋结构。MTS结果表明，所有被测多肽在100 μg/mL的工作浓度下的细胞毒性可忽略。多肽抗PRRSV的作用阶段试验结果显示，衍生多肽在病毒侵入阶段的抗病毒活性较母肽显著增强，说明通过引入赖氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，增强了衍生肽的疏水作用和正电荷，进而增强了衍生多肽在侵入阶段的抗PRRSV活性。以上结果为抗病毒多肽的应用及结构优化提供了理论基础，可为PRRSV的防控提供新的思路。

关键词：抗菌肽抗病毒活性阳离子氨基酸疏水性氨基酸猪繁殖呼吸综合征病毒

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口蹄疫病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达与鉴定

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南京农业大学学报 2025年

作者：李志要尹双辉郭慧琛鲍恩东南京农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

[目的]预防和控制严重影响畜牧业发展的口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）灭活苗在其病毒增殖生产过程中依然存在病毒泄露风险，研发具有与病毒粒子结构相似，且不含有核酸的病毒样颗粒（Virus-like particles，VLPs）... 详细信息

[目的]预防和控制严重影响畜牧业发展的口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）灭活苗在其病毒增殖生产过程中依然存在病毒泄露风险，研发具有与病毒粒子结构相似，且不含有核酸的病毒样颗粒（Virus-like particles，VLPs）、并通过毕赤酵母真核表达系统进行表达，来生产成本更加低廉的理想FMDV VLPs疫苗。[方法]为此，本研究首先将FMDV的VP0、VP3和VP1表达盒插入到同一个pPink-HC质粒上，再电转毕赤酵母以制备FMDV VLPs。[结果]试验结果显示，重组菌经过甲醇诱导后，蛋白免疫印记（Western blot，WB）可以检测到目的蛋白的表达；破碎离心后上清液经过蔗糖梯度离心可以分离得到纯化后的VLPs；通过动态光散射法（Dynamic light scattering，DLS）和透射电子显微镜（Transmission electron microscope，TEM）检测，可以观察到直径为30 nm的球形颗粒；通过ELISA检测，VLPs呈现出良好反应，这充分表明所制备的VLPs具备抗原性。VLPs经过ELISA检测后具有良好的反应，说明制备的VLPs具有抗原性。[结论]上述结果说明，采用单独表达VP0、VP3和VP1的方式在毕赤酵母中可成功制备FMDV VLPs，这为FMD疫苗的发展及其他小RNA病毒样颗粒的制备提供了实验依据。

关键词：口蹄疫病毒病毒样颗粒真核表达毕赤酵母

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南非2型口蹄疫病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

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病毒学报 2025年第3期 856-867页

作者：石鑫泰朱昱茜石正旺罗俊聪席韬张帆何印娣李帅鹏郑海学田宏中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃农业大学动物医学院

本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并... 详细信息

本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并在硝酸纤维素膜上固定VP1蛋白及其单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab），分别形成检测线（T线）和质量控制线（C线）。通过一系列优化试验，胶体金标记VP1蛋白的最适p H、标记量分别为8.0和24μg/m L,C线的喷膜浓度为1.5 mg/m L,T线的喷膜浓度为0.2 mg/m L，可在12～15 min内完成检测，用于检测FMDV-SAT2抗体。结果显示，研制的胶体金试纸条与塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）、O型口蹄疫病毒（FMDV-O）、A型口蹄疫病毒（FMDV-A）的灭活血清以及南非1型口蹄疫病毒（FMDV-SAT1）、南非3型口蹄疫病毒（FMDV-SAT3)VP1蛋白免疫的兔血清均无交叉反应；与南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白（FMDV-SAT2-VP1）免疫的兔血清的反应灵敏度可达1∶64；对110份FMDV-O型和50份FMDV-A型阳性猪血清样品进行检测，所有检测结果均显示为阴性；该试纸条在室温（18℃～25℃）和冷藏（4℃）环境下可分别保持稳定6个月和9个月。结果表明，本研究研发的胶体金免疫层析试纸条展现出高度的灵敏性和特异性，同时具备检测快速、操作便捷、结果直观等特点，对FMDV-SAT2的现场检测具有实际应用价值。

关键词：南非2型口蹄疫病毒胶体金试纸条抗体检测方法

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三种表达口蹄疫病毒抗原蛋白的DNA质粒及其mRNA在不同细胞系中表达效率分析

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生物工程学报 2025年

作者：江丽馨柳海云刘一凡麻玉清孙世琪郑泽中郭慧琛华南农业大学兽医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

口蹄疫是目前全球范围内最重要的动物传染病之一，所有偶蹄动物均易感。疫苗免疫是口蹄疫防控的首要选择。mRNA疫苗可以在体外快速设计合成和大规模生产，且能够诱导高效的保护性免疫应答，具有开发速度快、易制备、生物安全风险低等优... 详细信息

口蹄疫是目前全球范围内最重要的动物传染病之一，所有偶蹄动物均易感。疫苗免疫是口蹄疫防控的首要选择。mRNA疫苗可以在体外快速设计合成和大规模生产，且能够诱导高效的保护性免疫应答，具有开发速度快、易制备、生物安全风险低等优点。其中，非编码区的设计是增强mRNA疫苗表达和效力的关键。为了获取获得高效的FMD mRNA疫苗，本研究体外合成了3种具有不同非编码区的口蹄疫P12A3C DNA与对应的mRNA，通过比较其在不同时间点和细胞系中的表达量差异，发现mRNA P12A3C-UTR3表达量优异且普适性最好。本研究为口蹄疫mRNA疫苗的研制奠定了基础，也为高效mRNA的序列设计提供了理论依据。

关键词：口蹄疫病毒非复制型mRNA 非编码区蛋白表达

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A型塞内卡病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸条的制备及初步应用

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畜牧兽医学报 2025年

作者：李帅鹏石正旺陈婕罗俊聪朱昱茜石鑫泰席韬张帆何印娣郑海学张小丽田宏甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

本研究拟建立一种快速、准确、简便的A型塞内卡病毒（Senecavirus A， SVA）抗体胶体金检测方法，用于SVA的感染诊断。通过原核系统表达纯化获得SVA VP2重组蛋白，并制备VP2蛋白多克隆抗体；将VP2蛋白与胶体金偶联形成金标抗原。随后，... 详细信息

本研究拟建立一种快速、准确、简便的A型塞内卡病毒（Senecavirus A， SVA）抗体胶体金检测方法，用于SVA的感染诊断。通过原核系统表达纯化获得SVA VP2重组蛋白，并制备VP2蛋白多克隆抗体；将VP2蛋白与胶体金偶联形成金标抗原。随后，将VP2蛋白和VP2多克隆抗体分别包被在硝酸纤维素膜（NC膜）上作为检测线（T线）和质控线（C线），优化反应体系制备试纸条。结果表明，制备的试纸条检测口蹄疫病毒O型、口蹄疫病毒A型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、非洲猪瘟病毒阳性血清及健康猪（SPF）血清时，均无交叉反应，特异性良好；对SVA阳性血清的检测灵敏度达1:64，通过对150份猪临床血清样品进行试纸条和病毒中和试验的平行检测，两者的Kappa值为0.88，表明两种方法高度一致。综上所述，本研究成功开发了SVA抗体检测试纸条，可在10～15 min内完成检测，具有快速、准确、简便等优点，为临床定性检测及现场快速诊断塞内卡病毒病提供了有效工具。

关键词：塞内卡病毒抗体 VP2蛋白胶体金免疫层析试纸条

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