检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2011年第5期27卷 394-397,402页

作者：徐娜李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)俗称猪蓝耳病,是由病毒引起的一种高度接触性传染病,可导致母猪晚期流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率。该病毒已在全世... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)俗称猪蓝耳病,是由病毒引起的一种高度接触性传染病,可导致母猪晚期流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率。该病毒已在全世界范围内广泛流行,给养殖业造成了重大的经济损失。目前,传统的疫苗无法提供完全的保护作用,开发研制新型疫苗已迫在眉睫。PRRSV基因组长约15kb,有8个不同程度的开放阅读框(ORFS),即ORF1-ORF7。该病毒具有3个重要的结构蛋白,即E蛋白,M蛋白和N蛋白,这三种蛋白分别由病毒基因ORF5,ORF6和ORF7编码。本试验构建了含猪繁殖与呼吸综合征病毒E+M+N基因的重组腺病毒。首先用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因、M基因和N基因,将三者用口蹄疫病毒2A序列串联起来,将连接好的E+M+N基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将获得的重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,获得了插有外源基因的重组腺病毒质粒pAd/E+M+N;最后,经PacⅠ酶切线性化后转染HEK-293细胞,成功地得到含有E+M+N基因的重组腺病毒,为重组腺病毒活载体疫苗的研究奠定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸系统综合征病毒 E+M+N基因重组腺病毒

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猪圆环病毒Ⅱ型的研究进展

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生物技术通报 2010年第6期26卷 22-26页

作者：徐娜李宝玉娄忠子柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus type2,PCV-2)是引起猪圆环病毒病(porcine circovirus desease,PCVD)的主要病原,在猪群中广泛存在。本病毒可以单独或者与其它病原混合感染猪只,引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、育肥猪皮炎与... 详细信息

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus type2,PCV-2)是引起猪圆环病毒病(porcine circovirus desease,PCVD)的主要病原,在猪群中广泛存在。本病毒可以单独或者与其它病原混合感染猪只,引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、育肥猪皮炎与肾病综合征(PDNS)等一系列较为复杂的疾病,严重威胁猪只的健康。经过10余年持续不断的努力,各国对PCV-2的研究日益深入,对病毒的相关特性也有了较为清晰的认识。对病毒的病原学、流行病学、致病机理、临床症状、病理变化、诊断和防制对策等方面的研究进展进行了简要综述。

关键词：猪圆环病毒病原学致病机理诊断防制

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乙型肝炎病毒的研究进展

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中国农学通报 2010年第18期26卷 6-11页

作者：常晓依兰喜白银梅柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是目前己知的感染人的最小DNA病毒之一,由HBV所引起的乙型肝炎是一种流行久远、传播广泛、危害严重的传染性疾病。目前,全世界约有4亿多人携带HBV,平均每年约有100万人死于HBV相关的肝癌。在中国,... 详细信息

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是目前己知的感染人的最小DNA病毒之一,由HBV所引起的乙型肝炎是一种流行久远、传播广泛、危害严重的传染性疾病。目前,全世界约有4亿多人携带HBV,平均每年约有100万人死于HBV相关的肝癌。在中国,每年约有50万人死于HBV感染导致的晚期肝硬化和肝癌,文章从乙肝病毒的特征,基因组结构,变异与分型,复制和转录模式,发病机制,检测指标等方面进行了综述。

关键词：乙肝病毒基因组结构复制模式转录模式发病机制

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猪繁殖与呼吸综合征病毒M+N基因重组腺病毒载体的构建

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生物技术通报 2010年第10期26卷 168-171页

作者：徐娜李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

本研究构建了M+N基因的重组腺病毒载体。首先用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因和N基因,将两者用口蹄疫病毒2A序列串联起来,将连接好的M+N基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经筛选获得了重... 详细信息

本研究构建了M+N基因的重组腺病毒载体。首先用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因和N基因,将两者用口蹄疫病毒2A序列串联起来,将连接好的M+N基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经筛选获得了重组质粒pAdTrack-CMV/M+N;然后在大肠杆菌BJ5183内将此重组质粒和腺病毒骨架载体pAdEasy-1进行同源重组,获得了插有外源基因的重组腺病毒质粒pAd/M+N;最后,经PacⅠ酶切线性化后转染HEK-293细胞,成功获得含有M+N基因的重组腺病毒,为重组腺病毒活载体疫苗的研究奠定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸系统综合征病毒 M+N基因重组腺病毒

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口蹄疫诊断技术的研究进展

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生物技术通报 2010年第5期26卷 70-73页

作者：刘明徐娜李志勇柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

口蹄疫是偶蹄动物的一种急性,热性,高度接触性传染病,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失。本文综述了目前口蹄疫诊断技术的研究进展,其中包括了病毒分离技术等传统的诊断方法,以及血清学诊断方法,还介绍了环介导等温扩增技术等... 详细信息

口蹄疫是偶蹄动物的一种急性,热性,高度接触性传染病,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失。本文综述了目前口蹄疫诊断技术的研究进展,其中包括了病毒分离技术等传统的诊断方法,以及血清学诊断方法,还介绍了环介导等温扩增技术等几种新的诊断技术。

关键词：口蹄疫诊断技术研究进展

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转基因植物疫苗研究进展

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生物技术通报 2010年第4期26卷 28-32页

作者：李杨李志勇柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

疫苗是当今世界上控制及预防疾病发生的有效方法,利用植物作为生物反应器生产转基因疫苗,成本低廉,方便安全等特点,被认为新型疫苗的研究热点。从4个方面综述了转基因疫苗的研究概况,分析了其优点及不足,并对其未来的发展进行了展望。

关键词：转基因植物疫苗研究进展

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猪繁殖与呼吸综合症诊断技术的研究进展

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中国农学通报 2010年第9期26卷 13-17页

作者：徐娜李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸综合征是目前养猪业中一种严重的病毒性传染病,分布广泛且对养猪业造成巨大损失。就该病的临床症状,病理变化,血清学,分子生物学等诊断与检测方法的研究进展进行综述。

关键词：猪生殖和呼吸系统综合征病毒临床诊断病理组织学检查病毒分离血清学诊断分子生物学诊断

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猪γ-干扰素的克隆表达及单抗的潜在应用

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生物技术通报 2010年第1期26卷 173-179页

作者：娄忠子兰喜李建强李学瑞李志勇殷相平柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

以刀豆素A(ConA)刺激长白猪外周血单个核细胞(PBMC),提取的总RNA为模板,采用一步法RT-PCR扩增出包含猪γ-干扰素(PoIFN-γ)完整基因的片段。将完整的PoIFN-γ基因亚克隆到pET-32a(+)上,构建pET-IFN-γ融合表达载体,转化入Rosetta(DE3)后... 详细信息

以刀豆素A(ConA)刺激长白猪外周血单个核细胞(PBMC),提取的总RNA为模板,采用一步法RT-PCR扩增出包含猪γ-干扰素(PoIFN-γ)完整基因的片段。将完整的PoIFN-γ基因亚克隆到pET-32a(+)上,构建pET-IFN-γ融合表达载体,转化入Rosetta(DE3)后IPTG诱导表达,得到大小约为36.8kD的目的蛋白。将目的蛋白检测及纯化后免疫后BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,最终筛选出3株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞。ELISA叠加试验显示,3株单抗针对相同或邻近的PoIFN-γ抗原表位,制备的腹水中单抗间接ELISA效价为1×104。选取单抗IF-2株进行单抗的潜在应用研究,Westernblotting分析结果显示单抗IF-2株能与融合表达蛋白产生特异性反应,与pET-32a(+)标签蛋白无反应;间接免疫荧光检测(IFA)发现,在采用腺病毒表达系统表达PoIFN-γ的HEK-293细胞中散在大量特异性荧光。

关键词：猪γ-干扰素融合表达单克隆抗体潜在应用

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RNA干扰抑制口蹄疫病毒复制研究进展

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动物医学进展 2010年第3期31卷 82-86页

作者：徐娜刘明李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

鉴于现有疫苗和抗病毒药物在治疗口蹄疫方面存在的局限性,寻找新型抗病毒策略势在必行,而RNA干扰正是一种有益的尝试。RNA干扰通过沉默哺乳动物细胞中的基因表达,可有效的阻断口蹄疫病毒在宿主体内的复制。论文以口蹄疫病毒引起宿主细... 详细信息

鉴于现有疫苗和抗病毒药物在治疗口蹄疫方面存在的局限性,寻找新型抗病毒策略势在必行,而RNA干扰正是一种有益的尝试。RNA干扰通过沉默哺乳动物细胞中的基因表达,可有效的阻断口蹄疫病毒在宿主体内的复制。论文以口蹄疫病毒引起宿主细胞病变、RNA干扰的机制及RNA干扰抑制FMDV在宿主细胞内复制为内容,探讨如何更加有效地防控口蹄疫。

关键词：口蹄疫病毒 RNA干扰抑制病毒复制

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猪圆环病毒2型cap基因与猪γ-干扰素基因双表达载体的构建及稳定表达

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畜牧与兽医 2010年第12期42卷 67-72页

作者：娄忠子杨彬兰喜李学瑞李志勇殷相平李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪,γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-γ中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表... 详细信息

通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪,γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-γ中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表达载体pBud-IFNPCV。重组质粒转染BHK-21细胞后进行Zeocin^(TM)抗性筛选建立细胞系,阳性细胞通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测cap和PoIFN-γ在BHK-21细胞中的表达。结果显示,试验中筛选出1株Zeocin^(TM)抗性阳性BHK-21细胞,cap和PoIFN-γ均在该细胞中获得稳定高效表达,这将为猪圆环病毒病的防治提供新的方法。

关键词：猪圆环病毒病 cap 干扰素基因表达载体的构建 BHK-21细胞重组真核表达载体间接免疫荧光 Cap 双表达载体基因亚克隆核衣壳蛋白质粒转染阳性细胞抗性筛选克隆载体高效表达 PCR方法 Western 细胞系

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