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畜牧兽医学报 2025年第4期56卷 1575-1593页

作者：尤留超尹号陶政宇黄蓉付磊储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000

布鲁氏菌病是一种重要的呈世界性流行的人兽共患病,给畜牧业造成巨大经济损失的同时,还严重威胁人类健康与公共卫生安全。布鲁氏菌可应用多种策略逃逸免疫系统,不仅可抵抗吞噬细胞的杀菌作用,还可使宿主细胞形成有利于自身存活的微环境... 详细信息

布鲁氏菌病是一种重要的呈世界性流行的人兽共患病,给畜牧业造成巨大经济损失的同时,还严重威胁人类健康与公共卫生安全。布鲁氏菌可应用多种策略逃逸免疫系统,不仅可抵抗吞噬细胞的杀菌作用,还可使宿主细胞形成有利于自身存活的微环境,最终发展为慢性感染,这些策略给防控布鲁氏菌病带来了不小的挑战,作为进一步理解并防控布鲁氏菌病的前提,布鲁氏菌的毒力过程、胞内存活、免疫逃逸等一直是人们关注的重点,因此,本文从布鲁氏菌主要毒力因子、胞内存活和免疫逃避机制等方面,阐述其毒力因子及胞内存活机制研究进展,以期通过阐释布鲁氏菌致病机制为将来研发新型安全、高效的防控产品提供参考。

关键词：布鲁氏菌毒力因子胞内存活致病机制

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牛种布鲁氏菌MgtC蛋白在抵抗低Mg^(2+)环境中的生物学功能研究

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畜牧兽医学报 2025年第1期56卷 365-377页

作者：王恒泰吕浪蒋卉程君生刘铭赫储岳峰许健李朋丁家波中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国兽医药品监察所北京100081 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000

MgtC蛋白在多种胞内寄生菌中是一个重要的毒力因子并表现出抵抗低Mg^(2+)环境的能力。布鲁氏菌是一种重要的胞内寄生菌,但是关于MgtC蛋白在布鲁氏菌中的生物学功能报道较少。为了全面阐述MgtC在布鲁氏菌中的生物学特性,本文研究了牛种... 详细信息

MgtC蛋白在多种胞内寄生菌中是一个重要的毒力因子并表现出抵抗低Mg^(2+)环境的能力。布鲁氏菌是一种重要的胞内寄生菌,但是关于MgtC蛋白在布鲁氏菌中的生物学功能报道较少。为了全面阐述MgtC在布鲁氏菌中的生物学特性,本文研究了牛种布鲁氏菌MgtC蛋白对低Mg^(2+)环境的适应性及其它可能的生物学功能。构建牛种布鲁氏菌(S2308株)的mgtC基因缺失突变株S2308ΔmgtC,同时采用质粒回补方式构建回补株S2308ΔmgtC(pBBR1MCS-mgtC),随后对其开展低/高Mg^(2+)环境中生长曲线测定,ATP含量测定,胞内存活,环境应激,生物被膜检测和小鼠攻毒试验等研究,全面分析MgtC在牛种布鲁氏菌中的生物学功能。结果显示:成功构建缺失株S2308ΔmgtC及其回补株S2308ΔmgtC(pBBR1MCS-mgtC)。牛种布鲁氏菌S2308在低Mg^(2+)环境中,mgtC基因转录水平显著上调(P<0.05),与亲本株和回补菌株相比,缺失株S2308ΔmgtC在低Mg^(2+)环境中的生长曲线(P<0.001)、膜结构完整性(P<0.05)、生物被膜形成能力(P<0.01)均低于与亲本菌株和回补菌株,而菌体内ATP含量均高于亲本菌株和回补菌株(P<0.001)。此外,mgtC基因的缺失不影响牛种布鲁氏菌在巨噬细胞内的存活以及对小鼠的致病能力。在低Mg^(2+)环境下,牛种布鲁氏菌通过MgtC保证细菌ATP正常水解,维持自身正常生理活动和膜结构的完整性,但是MgtC对牛种布鲁氏菌的毒力和致病性无明显影响,本研究为深入了解牛种布鲁氏菌提供了数据支撑。

关键词：牛种布鲁氏菌S2308 mgtC 低Mg^(2+)环境生物学功能

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单链DNA退火蛋白介导细菌基因组同源重组的机制及应用研究进展

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生物技术通报 2025年第1期41卷 39-48页

作者：尹号尤留超韩瑞高鹏程付磊储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

基因组编辑技术是研究细菌等微生物在基因功能、耐药机制及致病机制等方面的重要工具,而同源重组是细菌基因组编辑的重要方式之一,传统的细菌内源性重组途径存在效率低下的问题,而一种来自噬菌体的单链DNA退火蛋白(SSAP)表现出了远超内... 详细信息

基因组编辑技术是研究细菌等微生物在基因功能、耐药机制及致病机制等方面的重要工具,而同源重组是细菌基因组编辑的重要方式之一,传统的细菌内源性重组途径存在效率低下的问题,而一种来自噬菌体的单链DNA退火蛋白(SSAP)表现出了远超内源性重组途径的基因组编辑效率,该蛋白具有单链DNA结合活性、介导基因组定向重组的特点,使其成为目前极具潜力的基因组编辑工具。本文主要对同源重组基本原理、噬菌体源SSAP介导的同源重组途径的基本元件、重组机制模型以及应用策略展开概述,旨在为进一步解析单链DNA退火蛋白介导的同源重组过程提供帮助,为研究更多细菌基因功能、致病机制以及开发工程菌株提供技术支撑,也为缺乏基因编辑方法的细菌提供技术参考。

关键词：细菌单链DNA退火蛋白同源重组机制应用

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南非2型口蹄疫病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

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病毒学报 2025年

作者：石鑫泰朱昱茜石正旺罗俊聪席韬张帆何印娣李帅鹏郑海学田宏中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃农业大学动物医学院

本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并... 详细信息

本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并在硝酸纤维素膜上固定VP1蛋白及其单克隆抗体（Monoclonal antibody,mAb），分别形成检测线（T线）和质量控制线（C线）。通过一系列优化试验，胶体金标记VP1蛋白的最适pH、标记量分别为8.0和24μg/mL,C线的喷膜浓度为1.5 mg/mL,T线的喷膜浓度为0.2 mg/mL，可在12～15 min内完成检测，用于检测FMDV-SAT2抗体。结果显示，研制的胶体金试纸条与塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）、O型口蹄疫病毒（FMDV-O）、A型口蹄疫病毒（FMDV-A）的灭活血清以及南非1型口蹄疫病毒（FMDV-SAT1）、南非3型口蹄疫病毒（FMDV-SAT3）VP1蛋白免疫的兔血清均无交叉反应；与南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白（FMDV-SAT2-VP1）免疫的兔血清的反应灵敏度可达1:64；对110份FMDV-O型和50份FMDV-A型阳性猪血清样品进行检测，所有检测结果均显示为阴性；该试纸条在室温（18℃～25℃）和冷藏（4℃）环境下可分别保持稳定6个月和9个月。结果表明，本研究研发的胶体金免疫层析试纸条展现出高度的灵敏性和特异性，同时具备检测快速、操作便捷、结果直观等特点，对FMDV-SAT2的现场检测具有实际应用价值。

关键词：南非2型口蹄疫病毒胶体金试纸条抗体检测方法

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非洲猪瘟病毒R298L基因缺失毒株的构建及其致病性与免疫原性评价

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中国兽医科学 2025年第3期55卷 285-290页

作者：范许许李伟伟朱兆宇裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰郑海学朱紫祥中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)R298L基因的功能,解析ASFV的致病机制,为基因缺失减毒疫苗的研发提供候选毒株,首先利用同源重组技术构建R298L基因缺失的非洲猪瘟病毒株ASFV-ΔR298L,随后通过动物实验在猪体内比较ASFV-ΔR298L与亲本毒株ASF... 详细信息

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)R298L基因的功能,解析ASFV的致病机制,为基因缺失减毒疫苗的研发提供候选毒株,首先利用同源重组技术构建R298L基因缺失的非洲猪瘟病毒株ASFV-ΔR298L,随后通过动物实验在猪体内比较ASFV-ΔR298L与亲本毒株ASFV CN/GS/2018致病性和免疫应答水平的差异。结果表明,感染亲本毒株的动物发热严重,在感染后13 d内全部死亡,解剖学观察显示多器官发生严重的病变,而感染ASFV-ΔR298L重组病毒的动物发热水平显著下降,在观察期内全部存活,组织器官未发生病变,并且在后期产生较高水平的中和抗体。以上数据为解析R298L病毒蛋白的功能和阐明非洲猪瘟病毒的致病机制提供了理论依据,为基因缺失候选疫苗的研制提供了参考。

关键词：非洲猪瘟病毒 R298L基因缺失毒株致病性免疫保护

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寨卡病毒感染致病机制及其防控策略的研究进展

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中国兽医科学 2025年

作者：巩俊佑段翔瀚郑海学葛朝明兰州大学第二医院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院

寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）是一种人畜共患的虫媒黄病毒，ZIKV疫情及其临床不良预后引发了全世界的关注。本文综述了当前对ZIKV病原学的认识，讨论了病毒蛋白与宿主相互作用以及致病性的机制，总结了抗病毒化合物和疫苗开发的进展及... 详细信息

寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）是一种人畜共患的虫媒黄病毒，ZIKV疫情及其临床不良预后引发了全世界的关注。本文综述了当前对ZIKV病原学的认识，讨论了病毒蛋白与宿主相互作用以及致病性的机制，总结了抗病毒化合物和疫苗开发的进展及公共卫生应对的措施，以期为防控工作提供有益参考。

关键词：寨卡病毒病原学致病机制防控策略

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CRISPR-Cas9介导的TRIM3基因敲除细胞系的建立及其应用

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中国兽医科学 2025年

作者：裴丹诗范许许朱兆宇王一卓何路任青峰李熙忠郑海学李伟伟万博河南农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

本研究旨在探究宿主蛋白TRIM3对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。利用CRISPR/Cas9系统构建了TRIM3基因敲除的BHK21细胞系，并借助CCK8试剂盒检测了该基因的缺失对细胞活力的影响，结果表明，TRIM3敲除对细胞生长状态无明显影响。将FMDV... 详细信息

本研究旨在探究宿主蛋白TRIM3对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。利用CRISPR/Cas9系统构建了TRIM3基因敲除的BHK21细胞系，并借助CCK8试剂盒检测了该基因的缺失对细胞活力的影响，结果表明，TRIM3敲除对细胞生长状态无明显影响。将FMDV分别感染野生型和TRIM3敲除型的BHK21细胞，通过Q-PCR、Western-blot和TCID50等多种方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况，结果表明，TRIM3缺失能够显著抑制FMDV的复制。为了进一步验证TRIM3的表型功能，用慢病毒包装系统构建了TRIM3过表达细胞系。结果显示，过量表达TRIM3能够促进FMDV的复制。综上所述，本研究通过CRISPR/Cas9系统成功构建了TRIM3基因敲除细胞系和过表达细胞系，首次证明了TRIM3能够正向调控FMDV的复制，为后续探究TRIM3调控FMDV复制的具体机制奠定了基础。

关键词： TRIM3 口蹄疫病毒细胞系

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布鲁氏菌BP26蛋白原核表达及双抗原夹心ELISA方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：席韬罗俊聪朱昱茜林永玉陈婕张帆石鑫泰何印娣李帅鹏徐继英田宏郑海学西北民族大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法，用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列，通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等，构建了pET-28a-BP26和pMAL-c2x-BP26两个载体，利用大肠杆... 详细信息

以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法，用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列，通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等，构建了pET-28a-BP26和pMAL-c2x-BP26两个载体，利用大肠杆菌表达蛋白，亲和层析纯化目的蛋白。采用Western-blot方法分析目的蛋白反应活性，以His-BP26作为包被抗原，HRP标记的MBP-BP26作为检测抗原，经过优化，建立了一种双抗原夹心ELISA方法。结果显示，根据统计学分析，双抗原夹心ELISA临界值为0.35；经检验，该方法与口蹄疫病毒-O型、牛结节皮肤病病毒、牛传染性腹泻病毒的抗体阳性血清以及赤羽病病毒多抗均无交叉反应，敏感性可达1∶640；批间及批内变异系数均小于10％。用该方法对40份已知虎红平板凝集试验检测背景的羊血清进行检测，结果检出8份阳性，32份阴性。由此说明，本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好，可区分BP26基因缺失疫苗免疫，用于布鲁氏菌病的血清学调查和临床诊断。

关键词：布鲁氏菌 BP26 原核表达双抗原夹心ELISA

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西藏地区藏羊隐孢子虫的分子流行病学调查

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中国兽医科学 2025年第4期55卷 507-511页

作者：孔皓月张月玥马平平牟文杰邹扬郭亚琼王帅张少华华南农业大学兽医学院广东广州510640 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

为了探究西藏高海拔地区藏羊隐孢子虫感染的流行情况,本研究从西藏自治区日喀则市岗巴县的集约化养殖场收集了藏羊粪便样品共420份,使用巢式PCR方法对隐孢子虫SSU rRNA基因进行扩增;利用gp60基因对隐孢子虫阳性样本进行亚型鉴定。结果显... 详细信息

为了探究西藏高海拔地区藏羊隐孢子虫感染的流行情况,本研究从西藏自治区日喀则市岗巴县的集约化养殖场收集了藏羊粪便样品共420份,使用巢式PCR方法对隐孢子虫SSU rRNA基因进行扩增;利用gp60基因对隐孢子虫阳性样本进行亚型鉴定。结果显示,所检地区藏羊隐孢子虫的总感染率为9.0%(38/420)。SSU rRNA基因分析显示,藏羊感染的隐孢子虫虫种为肖氏隐孢子虫和泛在隐孢子虫。差异分析表明,隐孢子虫感染率在不同年龄和性别间表现出统计学上的显著差异(P<0.05)。gp60基因分析显示,22份肖氏隐孢子虫样品成功扩增18份,存在4个亚型家族,分别是ⅩⅩⅢh(n=8)、ⅩⅩⅢl(n=6)、ⅩⅩⅢe(n=2)和ⅩⅩⅢd(n=2);而所有泛在隐孢子虫样本均被鉴定为Ⅻa型(n=16)。由于Ⅻa亚型能够感染人类及多种动物,这表明该地区藏羊携带的隐孢子虫可能存在人兽共患的潜在风险,该地区应采取有效的防控措施。

关键词：藏羊隐孢子虫基因亚型人兽共患

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猪CD40L的可溶性表达及其生物学活性检测

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中国兽医科学 2025年第3期55卷 389-395页

作者：贺艳艳郭慧琛孙世琪穆素雨敬晓棋榆林学院生命科学学院陕西榆林719000 中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为探讨可溶性猪CD40L(第113—261位氨基酸)对猪外周血单核细胞(PBMC)的活化作用,将构建好的含猪CD40L基因的质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的重组CD40L蛋白偶联FITC后与PBMC进行原位杂交,同时使用荧光显微镜和流式细胞仪分析研究CD... 详细信息

为探讨可溶性猪CD40L(第113—261位氨基酸)对猪外周血单核细胞(PBMC)的活化作用,将构建好的含猪CD40L基因的质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的重组CD40L蛋白偶联FITC后与PBMC进行原位杂交,同时使用荧光显微镜和流式细胞仪分析研究CD40L蛋白刺激B细胞的生物学活性。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组CD40L蛋白大小约14 kDa,确定最佳表达条件为16℃、D_(600 nm)值为1.1、0.5 mmol/L IPTG诱导12 h;流式细胞仪分析表明,重组CD40L蛋白能与PBMC表面的CD40蛋白分子结合,重组CD40L蛋白可以明显活化B细胞(P<0.001)。结论:CD40L具有促进B细胞活化的生物学活性,CD40L能促进免疫细胞反应,具有免疫调节作用。本研究为CD40L在重要家畜物种和人类疾病动物模型中的作用奠定了基础。

关键词：猪CD40L 原核表达生物学活性

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