检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2023年第11期53卷 1341-1347页

作者：赵登率张大俊史喜绢杨行郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室、国家非洲猪瘟区域实验室甘肃兰州730046

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)和猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪病毒性传染病,对全球养猪业造成严重危害。随着PRRSV与ASFV的流行,增加了二者混合感染的可能性。前期工作已表明PRRSV在体外可以抑制ASFV复制。然而,ASFV是否影响PRRSV体外复制尚不可知。因此,本研究通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫印迹试验(Western-blot)检测了PRRSV疫苗株JXA1-R和ASFV弱毒株混合感染后PRRSV在猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)和猪骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)的复制水平以及CD163的mRNA水平。结果显示,混合感染抑制了PRRSV的复制水平,并降低CD163的mRNA水平。本研究证明ASFV可抑制PRRSV在体外的复制,并抑制CD163的mRNA水平。该结果为PRRSV和ASFV混合感染的防控提供了理论依据。

关键词：非洲猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染抑制

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DNA损伤修复酶OGG1/MTH1抑制剂对非洲猪瘟病毒复制的影响

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生物工程学报 2024年第7期40卷 2136-2149页

作者：张小强樊洁杨吉飞付竞生吴梦丽邵程祥关贵全殷宏刘志杰牛庆丽中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家非洲猪瘟区域实验室(兰州) 甘肃兰州730046 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 西北民族大学基础医学院甘肃兰州730030

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种动物疫病。2018年传入我国后迅速波及国内多个省份,给我国养猪业带来了巨大的冲击。由于对ASFV致病机制了解有限,导致ASF疫苗及抗病毒药... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种动物疫病。2018年传入我国后迅速波及国内多个省份,给我国养猪业带来了巨大的冲击。由于对ASFV致病机制了解有限,导致ASF疫苗及抗病毒药物的研发遇到了极大挑战。本课题组前期研究发现,ASFV感染能引起宿主细胞内的氧化损伤应答,并且DNA氧化损伤修复酶在ASFV的感染中发挥重要作用,因此本研究采用RNA干扰、RT-q PCR、Western blotting、红细胞吸附(hemadsorption,HAD)、流式细胞技术等生物学方法,验证8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(8-oxoguanine DNA glycosylase 1,OGG1)/8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶1(8-oxoguanine nucleoside triphos-phatase,MTH1)小分子抑制剂对ASFV复制的影响,以评估靶向DNA氧化损伤修复酶的抗ASFV感染效果。本研究为抗非洲猪瘟药物的研发提供了借鉴及参考。

关键词：非洲猪瘟抗病毒药物碱基切除修复 8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1) 8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶1(MTH1)

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稳定表达猪BRD4-BD1/2蛋白的猪肺泡巨噬细胞传代细胞系的构建及其用于ASFV增殖的效果观察

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畜牧兽医学报 2024年第10期55卷 4646-4659页

作者：吴梦丽孙华林杨吉飞赵亚茹关贵全殷宏牛庆丽中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的复制,为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响,通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD1/2结构域,利用慢病毒表达系统成功构建稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系,分析ASFV在3D4/21-BRD4-BD1/2细胞系与WT细胞系之间的复制差异。首先,以家猪基因BRD4-BD1/2为靶标,构建了含有3x Flag标签的重组质粒pLVX-IRES-puro-3x Flag-BRD4-BD1/2,并将其与质粒pMD2.G和pSPAX2共同转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染3D4/21细胞后通过嘌呤霉素药物筛选,成功获得了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染3D4/21-BRD4-BD1/2细胞后CP204L和B602L基因的转录水平以及相应蛋白表达水平,并通过HAD50测定评价ASFV的复制能力。研究结果表明:成功构建了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。与3D4/21-WT细胞系相比,BRD4-BD1/2稳定表达细胞系能够显著促进ASFV复制。本研究提供了深入研究BRD4蛋白在ASFV复制中功能的生物材料,并为ASFV疫苗候选株的开发提供了理论基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 BRD4 BD1/2 3D4/21细胞稳定表达细胞系

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宿主蛋白RPSA在非洲猪瘟病毒复制过程中的作用研究

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1149-1156页

作者：邵程祥张忠辉孙华林赵亚茹杨吉飞关贵全殷宏武军元牛庆丽塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家非洲猪瘟区域实验室甘肃兰州730046 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

本研究旨在探究宿主RPSA蛋白对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)复制的影响,以及病毒蛋白B602L与RPSA之间的相互作用。利用RPSA重组质粒pcDNA3.1-Flag-RPSA转染293T细胞,通过免疫荧光检测B602L和RPSA蛋白的亚细胞定位,通... 详细信息

本研究旨在探究宿主RPSA蛋白对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)复制的影响,以及病毒蛋白B602L与RPSA之间的相互作用。利用RPSA重组质粒pcDNA3.1-Flag-RPSA转染293T细胞,通过免疫荧光检测B602L和RPSA蛋白的亚细胞定位,通过免疫共沉淀(Co-IP)验证它们之间的相互关系。通过荧光定量PCR和Western-blot分析ASFV感染IPAM细胞在不同时间点RPSA的表达差异。此外,通过在IPAM细胞中过表达或干扰RPSA的表达,分析RPSA对ASFV复制的影响。研究结果表明,ASFV感染IPAM细胞后,RPSA蛋白的表达随时间延长而逐渐增加,表明RPSA蛋白可能在病毒感染中发挥作用。通过过表达RPSA可抑制病毒复制,而干扰RPSA则导致病毒复制增强,进一步表明RPSA在ASFV复制过程中发挥重要作用。最后,Co-IP和亚细胞定位结果证明病毒蛋白B602L与宿主蛋白RPSA之间存在相互作用。综上所述,本研究揭示了宿主蛋白RPSA在ASFV复制过程中的作用,为进一步研究病毒与宿主之间的相互作用机制奠定了基础,也有助于深入了解ASFV的感染机制为疾病控制提供新的线索。

关键词：非洲猪瘟病毒 B602L RPSA 相互作用

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