检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2024年第11期54卷 1421-1429页

作者：方春艳杨发誉朱紫祥郑海学包世俊魏衍全张石磊甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730070 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为筛选高效抑制猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的小分子抑制剂,首先利用流式细胞分析技术结合小分子药物库筛选出对PRV具有高效抑制活性的小分子药物,并利用CCK-8法检测其对PK15细胞活力的影响。其次,利用Western-blot检测PRV ... 详细信息

为筛选高效抑制猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的小分子抑制剂,首先利用流式细胞分析技术结合小分子药物库筛选出对PRV具有高效抑制活性的小分子药物,并利用CCK-8法检测其对PK15细胞活力的影响。其次,利用Western-blot检测PRV g B蛋白、TCID_(50)测定PRV滴度等方法检测小分子药物对PRV的抑制作用。最后,利用Western-blot检测小分子药物抑制PRV生命周期的具体阶段。结果显示,流式细胞术分析筛选出的对PRV抑制最明显的3种小分子药物中,Cyanosafracin B、Staurosporine对PK15细胞有很强的细胞毒性,而衣康酸4-辛酯(4-OI)在300μmol/L的浓度下对PK15细胞基本无毒性。4-OI对不同MOI的PRV均表现出较强的抑制作用,表现为PRV子代病毒滴度的降低、PRV g B蛋白的表达水平下降,并呈剂量依赖性。4-OI及其靶蛋白Nuclear factor erythroid 2-related factor 2(NRF2)能够抑制PRV在细胞内的复制,而不影响PRV吸附PK15细胞及其内化过程。本研究表明4-OI是一种潜在的高效抑制PRV的小分子药物,为PRV防控提供了新的参考依据。

关键词：药物筛选衣康酸4-辛酯(4-OI) 猪伪狂犬病病毒(PRV) 抗病毒作用

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非洲马瘟病毒VP7蛋白的可溶性表达及抗体阻断ELISA方法的初步建立

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中国兽医科学 2024年第10期54卷 1318-1326页

作者：徐婧户鑫兵宋昱庆张鸿歌田占成关贵全罗建勋殷宏魏衍全独军政甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为了实现非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白的可溶性表达,制备其特异性单克隆抗体,建立AHSV VP7阻断ELISA抗体检测方法,通过对编码AHSV VP7蛋白的基因序列进行突变设计与密码子优化,以大肠杆菌表达系统表达可溶性VP7蛋白并进行纯化,免疫BALB/c... 详细信息

为了实现非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白的可溶性表达,制备其特异性单克隆抗体,建立AHSV VP7阻断ELISA抗体检测方法,通过对编码AHSV VP7蛋白的基因序列进行突变设计与密码子优化,以大肠杆菌表达系统表达可溶性VP7蛋白并进行纯化,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得VP7蛋白单克隆抗体。通过细胞免疫荧光和Western-blot鉴定单克隆抗体的特异性,并建立AHSV VP7阻断ELISA方法。结果显示,利用大肠杆菌表达系统成功表达了可溶性重组AHSV VP7蛋白,将纯化的VP7蛋白免疫小鼠筛选制备了2株稳定分泌VP7蛋白单克隆抗体的细胞株,分别为3F7和7H8。经鉴定证明这2株VP7单克隆抗体不仅能与大肠杆菌重组表达的VP7蛋白反应,而且也与BHK-21细胞表达的具有天然构象的重组VP7蛋白反应,具有良好的特异性和反应性。以重组VP7蛋白和单克隆抗体7H8分别为包被抗原和阻断抗体建立了AHSV VP7阻断ELISA方法,检测了277份马血清样本,结果与商品化进口AHSV抗体检测试剂盒测定结果一致。本研究在大肠杆菌表达系统中实现了AHSV VP7蛋白的可溶性表达,制备获得了VP7特异性单克隆抗体,并建立了AHSV VP7阻断ELISA方法,为我国有效防控非洲马瘟的传入提供了技术储备。

关键词：非洲马瘟病毒 VP7蛋白可溶性表达单克隆抗体阻断ELISA

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流感病毒跨种传播与感染致病机制研究进展

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兰州大学学报（医学版） 2023年第5期49卷 1-7页

作者：陈化兰朱启运徐帅动物疫病防控全国重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150000 动物疫病防控全国重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730000 动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730000

A型流行性感冒病毒(influenza A virus,IAV)属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae),是单股负链分节段的RNA病毒。IAV基因组由8个节段构成,分别是聚合酶碱性蛋白2(polymerase basic protein 2,PB2)、聚合酶碱性蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)、聚合酶酸性蛋白(polymerase acid protein,PA)、血凝素(hemagglutinin,HA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)、基质(matrix,M)蛋白和非结构蛋白(nonstructural protein,NS)节段。根据HA和NA的遗传性和抗原性的不同,可以将IAV分为18种HA亚型(H1-H18)和11种NA亚型(N1-N11)。

关键词： A型流行性感冒病毒跨种传播致病性天然免疫

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功能化铁蛋白纳米颗粒疫苗的研究进展

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农业生物技术学报 2024年第4期32卷 903-910页

作者：张荣魏彦明茹毅甘肃农业大学动物医学院中农威特生物科技股份有限公司甘肃省病原生物学基础学科研究中心/中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室

在众多的纳米载体中，蛋白质纳米颗粒由于其生物相容性及设计的灵活性，是疫苗纳米载体生物技术中的研究热点。与分离的蛋白质亚基相比，蛋白质纳米颗粒疫苗更容易被抗原提呈的树突状细胞吸收。铁蛋白是一种普遍存在的铁储存和解毒蛋白... 详细信息

在众多的纳米载体中，蛋白质纳米颗粒由于其生物相容性及设计的灵活性，是疫苗纳米载体生物技术中的研究热点。与分离的蛋白质亚基相比，蛋白质纳米颗粒疫苗更容易被抗原提呈的树突状细胞吸收。铁蛋白是一种普遍存在的铁储存和解毒蛋白，可以保护细胞免受铁诱导的氧化损伤，化学和热稳定性良好，具有可逆的组装、拆卸及展示抗原的能力。铁蛋白不仅是实用的纳米反应器和纳米载体，也是有效的疫苗开发平台。本文综述了铁蛋白的结构和功能特性、自组装、新的生物工程策略、铁蛋白纳米颗粒的生产、纯化和功能化，并讨论了铁蛋白在疫苗开发领域的应用进展及前景。本文为纳米生物技术在疫苗研制中的应用提供理论支持。

关键词：铁蛋白纳米颗粒基因融合自组装疫苗

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稳定表达猪BRD4-BD1/2蛋白的猪肺泡巨噬细胞传代细胞系的构建及其用于ASFV增殖的效果观察

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畜牧兽医学报 2024年第10期55卷 4646-4659页

作者：吴梦丽孙华林杨吉飞赵亚茹关贵全殷宏牛庆丽中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的复制,为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响,通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD1/2结构域,利用慢病毒表达系统成功构建稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系,分析ASFV在3D4/21-BRD4-BD1/2细胞系与WT细胞系之间的复制差异。首先,以家猪基因BRD4-BD1/2为靶标,构建了含有3x Flag标签的重组质粒pLVX-IRES-puro-3x Flag-BRD4-BD1/2,并将其与质粒pMD2.G和pSPAX2共同转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染3D4/21细胞后通过嘌呤霉素药物筛选,成功获得了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染3D4/21-BRD4-BD1/2细胞后CP204L和B602L基因的转录水平以及相应蛋白表达水平,并通过HAD50测定评价ASFV的复制能力。研究结果表明:成功构建了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。与3D4/21-WT细胞系相比,BRD4-BD1/2稳定表达细胞系能够显著促进ASFV复制。本研究提供了深入研究BRD4蛋白在ASFV复制中功能的生物材料,并为ASFV疫苗候选株的开发提供了理论基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 BRD4 BD1/2 3D4/21细胞稳定表达细胞系

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牛种布鲁氏菌ArsR2蛋白的原核表达及磷酸化位点鉴定

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动物医学进展 2024年第9期45卷 39-44页

作者：刘科蒙耿好苏梦茹许健支飞杰储岳峰新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

用原核表达系统表达并纯化牛种布鲁氏菌S2308株ArsR2蛋白,软件分析该蛋白相关信息,质谱鉴定该蛋白修饰位点。以牛种布鲁氏菌S2308株基因组为模板,通过PCR扩增arsR2基因,构建pET-32a-ArsR2重组质粒,经测序正确后,转化至大肠埃希氏菌感受... 详细信息

用原核表达系统表达并纯化牛种布鲁氏菌S2308株ArsR2蛋白,软件分析该蛋白相关信息,质谱鉴定该蛋白修饰位点。以牛种布鲁氏菌S2308株基因组为模板,通过PCR扩增arsR2基因,构建pET-32a-ArsR2重组质粒,经测序正确后,转化至大肠埃希氏菌感受态细胞BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析法进行ArsR2蛋白的纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;对牛种布鲁氏菌ArsR2蛋白的理化性质和磷酸化位点进行预测,通过质谱鉴定ArsR2蛋白的修饰位点。结果显示,成功表达并纯化ArsR2蛋白,ArsR2蛋白无跨膜区,存在磷酸化修饰,质谱鉴定出ArsR2蛋白具有2个磷酸化位点。表明原核表达的牛种布鲁氏菌S2308株ArsR2蛋白存在磷酸化修饰位点,为探究该蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：布鲁氏菌 arsR2基因原核表达蛋白纯化

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非洲马瘟病毒VP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体制备

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 357-363页

作者：范亚亚王轩莹户鑫兵田占成关贵全罗建勋殷宏郑玉姝独军政河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AH... 详细信息

为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AHSVS6,转染Sf9昆虫细胞;构建了重组质粒pFastBac-AHSVS6,拯救获得含有AHSV S6基因的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明,在Sf9昆虫细胞中成功表达分子质量大小为60 ku的AHSV VP5重组蛋白。采用组氨酸标签纯化树脂对重组VP5蛋白进行纯化,将其与弗氏佐剂乳化后3次免疫新西兰大白兔收集血清,获得了针对AHSV VP5蛋白的多克隆抗体,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验验证了该抗体的特异性。本试验利用杆状病毒表达系统成功表达了AHSV全长VP5重组蛋白,成功制备出特异的VP5蛋白多克隆抗体,这为进一步研究AHSV VP5蛋白的功能及研制亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：非洲马瘟病毒 VP5蛋白杆状病毒表达系统多克隆抗体免疫荧光

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宿主蛋白BST-2抑制非洲猪瘟病毒体外复制的研究

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中国兽医科学 2024年第2期54卷 143-150页

作者：赵美玉杨行史喜绢张大俊赵登率陈玲玲别鑫恬闫文倩陈国辉赵思越李平郑海学栗孟飞张克山甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室甘肃兰州730000

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的高致死率传染病。骨髓基质细胞抗原2(BST-2,也称为Tetherin/HM1.24/CD317)被鉴定为一种抑制包膜病毒释放的新型宿主限制因子,它可以将病... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的高致死率传染病。骨髓基质细胞抗原2(BST-2,也称为Tetherin/HM1.24/CD317)被鉴定为一种抑制包膜病毒释放的新型宿主限制因子,它可以将病毒颗粒结合到细胞表面,随后在溶酶体中进行内化和降解,从而抑制病毒复制。因此,它对宿主的抗病毒作用十分重要。本实验室前期研究表明,怀孕猪血清会促进ASFV的复制。ITRAQ分析表明,BST-2蛋白属于下调前十的蛋白之一。为探究宿主蛋白BST-2与ASFV复制之间的关系,本试验通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对BST-2表达的影响;构建并合成了BST-2真核表达质粒以及siRNA干扰序列,通过RT-qPCR、Western-blot去探究外源过表达BST-2及敲低BST-2对ASFV体外复制的调控作用。结果显示,外源过表达BST-2显著抑制了ASFV的复制,敲低BST-2促进了ASFV的复制。本研究通过对BST-2进行过表达和敲低,证实了BST-2作为一种宿主抗病毒分子能抑制ASFV的体外复制,为进一步深入研究宿主蛋白抗ASFV功能提供了新的途径,也为ASF的防控提供了新思路。

关键词：非洲猪瘟病毒 BST-2 天然免疫宿主蛋白抑制体外复制

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马源性免疫球蛋白的研究应用进展

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中国兽医科学 2024年第1期54卷 115-123页

作者：周玉娟吴强储岳峰刘子越贾涛中国生物技术股份有限公司北京100024 成都蓉生药业有限责任公司四川成都610093 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

马源性免疫球蛋白是采用特定抗原主动免疫马匹后产生的较高滴度的能够中和这种抗原的抗体(主要成分是IgG),通过胃蛋白酶消化,切掉与种属间免疫原性相关的Fc段,仅纯化出具有中和活性的F(ab’)2片段,发挥特异性免疫作用,用于预防和治疗以... 详细信息

马源性免疫球蛋白是采用特定抗原主动免疫马匹后产生的较高滴度的能够中和这种抗原的抗体(主要成分是IgG),通过胃蛋白酶消化,切掉与种属间免疫原性相关的Fc段,仅纯化出具有中和活性的F(ab’)2片段,发挥特异性免疫作用,用于预防和治疗以传染病为主的许多疾病。本文对马源性免疫球蛋白的结构和功能、马源性免疫球蛋白在冠状病毒感染等传染病的防治中发挥的作用进行了综述,以便为积极发挥马源性免疫球蛋白的优势总结经验,并为突破马源性免疫球蛋白研发应用中存在的瓶颈问题提供参考和建议。

关键词：马源性免疫球蛋白免疫感染抗体作用机制

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基于响应面法优化脂质纳米颗粒的配方及表征

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中国兽医科学 2024年第10期54卷 1399-1407页

作者：麻玉清柳海云郭伟江丽馨孙世琪王晓强马全英郭慧琛兰州交通大学化学化工学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 兰州交通大学生物与制药工程学院甘肃兰州730070

脂质纳米颗粒是目前最有应用前景的药物载体之一,本研究旨在解决原材料配方对脂质纳米颗粒自组装的影响,优化其配方。首先,以包封率为评价指标,通过单因素试验确定膜材比、脂质浓度和DMG-PEG 2000的含量。其次,采用Box-Benhnken响应面... 详细信息

脂质纳米颗粒是目前最有应用前景的药物载体之一,本研究旨在解决原材料配方对脂质纳米颗粒自组装的影响,优化其配方。首先,以包封率为评价指标,通过单因素试验确定膜材比、脂质浓度和DMG-PEG 2000的含量。其次,采用Box-Benhnken响应面分析法优化脂质纳米颗粒制备工艺,并对其进行表征评价。结果表明,通过单因素试验确定的三因素分别是:膜材比、脂质浓度和DMG-PEG 2000含量。三因素的三水平分别为:膜材比选择1∶1、2∶1、3∶1,脂质浓度选择15、20、25 mmol/L,DMG-PEG2000含量选择5%、7%、9%。通过Box-Benhnken响应面分析法得出:当脂质纳米颗粒的膜材比为2∶1,脂质浓度为20 mmol/L,DMG-PEG2000含量为7%时,其脂质纳米颗粒的包封率为(94.8±0.15)%,粒径为(43.77±0.25)nm,聚合物分散指数(polymer dispersity index,PDI)为(0.14±0.04),Zeta电位为(-0.44±0.15)m V。利用透射电镜观察该脂质纳米颗粒的形态为球形结构、分散均匀。稳定性试验显示4℃放置28 d,脂质纳米颗粒的平均粒径、PDI和包封率无显著变化,说明该脂质纳米颗粒稳定性良好。本研究为制备一种高效的脂质纳米颗粒提供了参考依据。

关键词：脂质纳米颗粒 Box-Benhnken响应面法单因素包封率

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