检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年第4期 507-511页

作者：孔皓月张月玥马平平牟文杰邹扬郭亚琼王帅张少华华南农业大学兽医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

为了探究西藏高海拔地区藏羊隐孢子虫感染的流行情况，本研究从西藏自治区日喀则市岗巴县的集约化养殖场收集了藏羊粪便样品共420份，使用巢式PCR方法对隐孢子虫SSU rRNA基因进行扩增；利用gp60基因对隐孢子虫阳性样本进行亚型鉴定。结... 详细信息

为了探究西藏高海拔地区藏羊隐孢子虫感染的流行情况，本研究从西藏自治区日喀则市岗巴县的集约化养殖场收集了藏羊粪便样品共420份，使用巢式PCR方法对隐孢子虫SSU rRNA基因进行扩增；利用gp60基因对隐孢子虫阳性样本进行亚型鉴定。结果显示，所检地区藏羊隐孢子虫的总感染率为9.0%(38/420)。SSU rRNA基因分析显示，藏羊感染的隐孢子虫虫种为肖氏隐孢子虫和泛在隐孢子虫。差异分析表明，隐孢子虫感染率在不同年龄和性别间表现出统计学上的显著差异（P<0.05）。gp60基因分析显示，22份肖氏隐孢子虫样品成功扩增18份，存在4个亚型家族，分别是ⅩⅩⅢh(n=8)、ⅩⅩⅢl(n=6)、ⅩⅩⅢe(n=2)和ⅩⅩⅢd(n=2)；而所有泛在隐孢子虫样本均被鉴定为Ⅻa型（n=16）。由于Ⅻa亚型能够感染人类及多种动物，这表明该地区藏羊携带的隐孢子虫可能存在人兽共患的潜在风险，该地区应采取有效的防控措施。

关键词：藏羊隐孢子虫基因亚型人兽共患

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非洲猪瘟病毒H108R蛋白的制备及其免疫原性评价

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畜牧兽医学报 2025年第3期56卷 1344-1354页

作者：张越茹毅郝荣增杨锐赵陇和李亚军杨洋张荣蒋成辉郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 中农威特生物科技股份有限公司兰州730046

本研究旨在制备ASFV H108R蛋白,通过免疫小鼠评价该蛋白的免疫原性,为该蛋白作为疫苗候选抗原的研究提供理论依据。利用生物信息学工具分析H108R蛋白的结构及基本理化性质,选择编码蛋白33~108 AA的基因序列串联融合到原核表达载体,转化... 详细信息

本研究旨在制备ASFV H108R蛋白,通过免疫小鼠评价该蛋白的免疫原性,为该蛋白作为疫苗候选抗原的研究提供理论依据。利用生物信息学工具分析H108R蛋白的结构及基本理化性质,选择编码蛋白33~108 AA的基因序列串联融合到原核表达载体,转化后经IPTG诱导表达,用镍亲和层析纯化目标蛋白质。免疫小鼠利用流式细胞术检测脾脏活化的CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞,分离小鼠血清测定特异性抗体滴度,利用Western blot和IFA鉴定多克隆抗体的特异性。并用试剂盒检测血清中细胞因子含量,将血清与ASFV-GFP病毒孵育评估抗体是否能抑制病毒的复制。生物信息学分析表明H108R蛋白为亲水性蛋白质,有跨膜区,无信号肽,蛋白二三级结构中存在较多α-螺旋。SDS-PAGE、Western blot显示IPTG诱导后,成功表达纯化H108R蛋白。蛋白免疫小鼠后能够诱导小鼠脾脏T细胞的活化,刺激机体产生更高水平的细胞因子。免疫制备的多克隆抗体效价为1∶128000,能与ASFV-GFP病毒特异性结合,与病毒孵育后能明显抑制病毒的复制。本研究成功表达制备了ASFV H108R蛋白,免疫能够诱导脾脏T淋巴细胞活化,引起细胞因子水平升高,制备的多克隆抗体能够明显抑制病毒的复制,具有较好的免疫原性,为深入研究H108R蛋白的生物学功能及疫苗研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) H108R蛋白多克隆抗体免疫原性

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基于遗传密码子扩展技术的口蹄疫病毒VP1蛋白位点特异性荧光标记

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中国兽医科学 2025年第4期 427-434页

作者：郝荣增卢炳州杨洋毛玉涵王姿逸赵陇和李亚军茹毅郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

将荧光标记分子引入细胞内表达的口蹄疫病毒（FMDV）结构蛋白VP1的特异性氨基酸位点，从而实现在活细胞内对蛋白质的动态可视化标记。先对VP1蛋白中非天然氨基酸（UAA）插入位点进行筛选，利用遗传密码子扩展技术将UAA定点插入到VP1蛋... 详细信息

将荧光标记分子引入细胞内表达的口蹄疫病毒（FMDV）结构蛋白VP1的特异性氨基酸位点，从而实现在活细胞内对蛋白质的动态可视化标记。先对VP1蛋白中非天然氨基酸（UAA）插入位点进行筛选，利用遗传密码子扩展技术将UAA定点插入到VP1蛋白，并通过生物正交点击化学反应引入荧光分子，观察细胞内的荧光标记蛋白；进一步通过间接免疫荧光试验验证荧光标记的蛋白。结果显示，成功筛选出VP1蛋白中UAA插入效率较高的氨基酸突变位点，并可以通过UAA控制VP1蛋白的表达。证实荧光分子染料DIBO-Alexa Fluor-488与VP1蛋白上的UAA发生点击化学反应可以进行活细胞染色，同时进行间接免疫荧光染色，可以观察到2种染色结果存在共定位趋势。本研究采用新方法实现了活细胞内FMDV VP1蛋白特异位点的荧光标记，为VP1蛋白功能研究和在细胞内示踪FMDV的感染及复制过程奠定了基础。

关键词：蛋白质标记口蹄疫病毒 VP1蛋白点击化学非天然氨基酸

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宿主蛋白HERC4影响口蹄疫病毒复制的作用研究

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中国兽医科学 2025年第4期 435-440页

作者：郑东东冯涛郝荣增杨彪晏子龙齐晓兰郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响，首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系，通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功，然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4... 详细信息

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响，首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系，通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功，然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白表达质粒，制备了HERC4基因过表达细胞，随后在HERC4基因敲除细胞和过表达细胞中，分别利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量和病毒滴度测定方法检测了HERC4蛋白对FMDV复制的影响，结果表明，HERC4蛋白对FMDV复制有影响，敲除可以抑制病毒复制，过表达可以促进病毒复制。该研究结果为后续开展HERC4蛋白调控FMDV复制机制研究奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒宿主蛋白HERC4 基因敲除基因过表达

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猪瘟与口蹄疫二联疫苗的制备及其免疫效果评价

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中国预防兽医学报 2025年第02期 172-178页

作者：高洁袁红焦云娟李坤李平花杨宇轩黄书伦郭海洋邱酉飞包慧芳孙普李冬刘在新卢曾军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室 WOAH/国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心新疆农业大学动物医学学院

为研制猪瘟（CSF）与口蹄疫（FMD）二联疫苗并评价其免疫效果，本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化，采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白（r E2）的表达与纯化效果，采用wester... 详细信息

为研制猪瘟（CSF）与口蹄疫（FMD）二联疫苗并评价其免疫效果，本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化，采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白（r E2）的表达与纯化效果，采用western blot检测r E2与His-Tag单克隆抗体（MAb）的反应原性。结果显示，在约50 ku处出现目的蛋白条带，纯化后在约50 ku处出现单一条带。western blot结果显示在50 ku处出现特异性条带。表明，r E2获得了表达且纯化效果较好，反应原性较强。将纯化后的r E2与灭活的口蹄疫病毒（FMDV）O/Tibet/99株混合后经ISA 201佐剂乳化制备二联疫苗，将小鼠分为4组：CSFV E2+FMDV（20μg+1μg）组、CSFV E2（20μg）组、FMDV（1μg）组及PBS阴性对照组。于第1 d和21 d分别将相应疫苗以肌肉注射方式免疫6周龄～8周龄的各组雌性BALB/c小鼠，首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d采血，利用ELISA检测各组小鼠血清中的抗体水平；利用流式细胞术检测免疫后42 d各组小鼠血液中CD3+/CD4+T淋巴细胞、CD3+/CD8+T淋巴细胞和CD19+B淋巴细胞的占比；采用ELISA检测免疫后42 d各组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平。抗体检测结果显示，与PBS组相比，E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠产生的针对两种病毒的抗体水平均显著和极显著升高（P<0.05、P<0.01、P<0.0001）;E2+FMDV组与E2组和FMDV组小鼠血清中CSFV和FMDV的抗体水平均无显著差异（P>0.05）。流式细胞术结果显示，E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠CD3+/CD4+T淋巴细胞、CD3+/CD8+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞的占比均显著和极显著高于PBS组（P<0.05、P<0.01、P<0.0001）;E2+FMDV组与E2组小鼠上述指标均无显著差异；与FMDV组相比，E2+FMDV组小鼠CD3+/CD4+T淋巴细胞的占比极显著升高（P<0.01），而另外两个指标均无显著差异。ELISA检测结果显示，3个实验组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平均显著和极显著高于PBS组（P<0.05、P<0.01）,E2+FMDV组与二者单独免疫组小鼠IFN-γ的分泌水平均无显著差异。上述结果表明，E2+FMDV二联疫苗对小鼠的免疫效果与单独免疫E2亚单位疫苗和FMDV灭活疫苗的免疫效果相当，CSFV E2蛋白与FMDV灭活病毒的联合免疫是可行的。综上，本研究首次制备的CSFV E2+FMDV二联苗可作为防控CSF和FMD的一种潜在候选疫苗，为这两种病毒二联甚至多联疫苗的研制奠定了实验基础。

关键词：猪瘟 E2蛋白口蹄疫二联疫苗

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绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白原核表达及ELISA方法建立

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中国动物传染病学报 2025年第1期33卷 97-105页

作者：陈思宇张梦洁田睿陈益刘镝钺李文良毛立程子龙杨蕾蕾孙敏张纹纹杜改梅储岳峰王金泉刘茂军新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 金陵科技学院动物科学与食品工程学院南京211169 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF... 详细信息

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF-Tu蛋白,以纯化的rEF-Tu为包被抗原,建立Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,原核表达的EF-Tu蛋白分子质量约为45.4 kDa,与预期相符;Western blot证实具有良好的反应原性;建立的间接ELISA方法最佳优化条件显示,包被抗原浓度为1.25 mg/L,37℃孵育2 h;封闭条件为30 g/L BSA,37℃孵育1 h;待检血清1∶100稀释,37℃孵育45 min;酶标二抗1∶20000稀释,37℃孵育30 min;底物TMB 37℃避光反应15 min;样品OD450值≥0.296时判定为阳性,OD450值≤0.265时判定为阴性,OD 450值0.265~0.296则判为可疑;组内和组间变异系数均低于10%;用该方法与实验室所建Mo全菌蛋白间接ELISA检测方法对233份血清进行检测,两者特异性为90.70%,敏感性为82.69%,符合率约为87.12%。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、重复性及特异性,为Mo的临床诊断、抗体监测等提供简单快速的血清学诊断方法,也为Mo抗体检测试剂盒的开发奠定了基础。

关键词：绵羊肺炎支原体 EF-Tu蛋白原核表达间接ELISA

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结核分枝杆菌免疫逃逸机制研究进展

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科学通报 2024年第4期69卷 531-541页

作者：李娜宋银娟储岳峰兰州大学动物医学与生物安全学院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州730000

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的一种对全球人类健康和经济社会发展具有重大影响的人兽共患病.结核分枝杆菌感染人类已有数千年的历史,在其与人类宿主共同进化的过程中,Mtb已发展... 详细信息

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的一种对全球人类健康和经济社会发展具有重大影响的人兽共患病.结核分枝杆菌感染人类已有数千年的历史,在其与人类宿主共同进化的过程中,Mtb已发展出多种巧妙的策略以逃避宿主的免疫防御,从而建立持续性感染.然而,我们对其免疫逃逸的分子机制以及细菌的毒力因子在Mtb不同感染阶段下发挥的作用了解有限.研究表明,在Mtb感染的早期阶段,肺泡巨噬细胞无法控制Mtb的感染,在进入肺间质后,Mtb可通过调控细胞内感染、损害抗原提呈、破坏巨噬细胞和T细胞功能等手段达到免疫逃逸的目的.本文详细回顾并综述了近年来结核分枝杆菌调控巨噬细胞自噬、凋亡以及适应性免疫应答等过程的分子机制,这些分子机制对于开发新的宿主导向疗法以及保护性疫苗至关重要.

关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞免疫逃逸宿主导向疗法

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布鲁菌导致流产的风险因素与作用机制

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中国兽医科学 2025年第4期 512-519页

作者：刘梦瑶魏东焦磊李彩玉刘东慧权衡周继章陈启伟宫晓炜中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术检定方法及其标准化重点实验室兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心新突发传染病新型疫苗研发全国重点实验室

布鲁菌对胎盘和妊娠子宫具有明显的趋向性，已发现，该病原体能够在滋养层细胞和蜕膜细胞中复制，通过提高内质网应激而诱导细胞凋亡，触发流产。从布鲁菌感染导致流产的风险因素、布鲁菌在滋养层细胞中的生物学过程进行综述，以期为布... 详细信息

布鲁菌对胎盘和妊娠子宫具有明显的趋向性，已发现，该病原体能够在滋养层细胞和蜕膜细胞中复制，通过提高内质网应激而诱导细胞凋亡，触发流产。从布鲁菌感染导致流产的风险因素、布鲁菌在滋养层细胞中的生物学过程进行综述，以期为布鲁菌病的临床诊疗评估及控制该病的风险传播提供科学理论依据。

关键词：布鲁菌风险因素胎盘滋养层炎症反应

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2017-2022年中国口蹄疫流行状况分析

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微生物学报 2023年第10期63卷 3955-3966页

作者：何继军马维民吕律靳野杨亚民杨帆曹伟军刘永杰吴锦艳张向乐朱紫祥郭建宏刘在新刘湘涛郑海学兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

【目的】分析近年来中国口蹄疫流行和传播特点,研判口蹄疫流行趋势。【方法】以2017‒2022年间中国报告发生的口蹄疫疫情为研究对象,从疫情的“三间分布”、生产环节分布、流行毒株分子流行病学分析及溯源等方面,对近6年的疫情情况进行... 详细信息

【目的】分析近年来中国口蹄疫流行和传播特点,研判口蹄疫流行趋势。【方法】以2017‒2022年间中国报告发生的口蹄疫疫情为研究对象,从疫情的“三间分布”、生产环节分布、流行毒株分子流行病学分析及溯源等方面,对近6年的疫情情况进行系统梳理。【结果】2017‒2022年间中国共有15个省份报告发生口蹄疫疫情54次。总体形势稳定:Asia 1型口蹄疫维持无疫状态;2019‒2022年连续4年未发生A型口蹄疫疫情;田间以散发O型口蹄疫为主。六年间报告牛口蹄疫疫情36次,羊疫情1次,猪疫情17次。分子流行病学研究表明,O/Mya-98、O/Ind-2001、O/CATHAY、O/PanAsia和A/Sea-97这5个流行毒株同时流行,且与同时期周边国家(缅甸、老挝和越南等)口蹄疫毒株遗传关系密切。流行病学调查结果显示,疫情(尤其是牛疫情,占比66.7%)主要发生在流通(57%)、散养(32%)等免疫薄弱环节。【结论】对内强化疫苗免疫和流通动物管控,对外严防境外毒株传入仍是今后中国口蹄疫防控的重要任务。

关键词：口蹄疫流行病学防控

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基于可见光测定的山羊支原体山羊肺炎亚种抗原定量

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4874-4886页

作者：葛家振高鹏程田彤彤吴晓妮李倩倩田可昕宋国栋郑福英储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum ***,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)的病原,可用灭活疫苗和荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)间接血凝试剂进行预防和血清学检测,但高昂的培养成本和复杂的抗原定量一直困扰着生产人员。为解决生产实际中出现的这些问题,本研究基于Mccp代谢组学的前期理论基础,通过改变初始pH值的方法,初步筛选出初始p H值为7.8的可以同时提高2种抗原产量的糖发酵培养基。利用紫外可吸收光谱可识别酚红,以及十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)可与阴离子荚膜多糖结合的理论依据,建立了利用紫外光谱分析Mccp达到的培养阶段,以及利用CTAB沉淀法相对定量发酵液荚膜多糖抗原产量的方法。通过紫外图谱观察的方法可对应Mccp生长曲线进行指导生产,大大节省传统颜色变化单位(color change unit,CCU)法的监测时间,提高了原肉眼观察方法的精确度。建立的CTAB沉淀法可在5 h内完成对CPS含量的监测,与传统的差值法相比大大缩短了时间,并且其准确度得到苯酚-硫酸法的验证。本研究优化的一种培养基和建立的两种相关性比较方法,可有效降低Mccp生产成本,提高生产效率,这些方法已在本实验室的研究阶段得到应用,为进一步改进CCPP灭活疫苗和荚膜多糖的生产工艺以及快速定量提供了实验数据。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种改良培养基荚膜多糖紫外图谱 CTAB沉淀法

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