检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年第06期 719-724页

作者：朱兆宇范许许裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰郑海学李伟伟郜原甘肃农业大学生命科学技术学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室河南农业大学动物医学院

本研究利用反向遗传技术构建O型口蹄疫病毒（FMDV）3D蛋白突变毒株rFMDV-M403A，并分析了其生物学特征。结果表明，重组病毒在传代过程中氨基酸能稳定突变；病毒滴度显示，突变毒株生长速度较野生毒株有所降低，重组病毒毒力显著低于野... 详细信息

本研究利用反向遗传技术构建O型口蹄疫病毒（FMDV）3D蛋白突变毒株rFMDV-M403A，并分析了其生物学特征。结果表明，重组病毒在传代过程中氨基酸能稳定突变；病毒滴度显示，突变毒株生长速度较野生毒株有所降低，重组病毒毒力显著低于野生毒株；乳鼠感染试验结果显示，突变毒株会使乳鼠存活率提高，肝中病毒载量和组织病变显著降低。该研究对口蹄疫病毒致病机理的认识及制定防控措施具有重要意义，同时，也为后续开发口蹄疫基因工程疫苗奠定了坚实的理论基础。

关键词： O型口蹄疫病毒反向遗传操作 3D蛋白突变生物学特性

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非洲猪瘟病毒抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外复制的研究

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中国兽医科学 2023年第11期53卷 1341-1347页

作者：赵登率张大俊史喜绢杨行郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室、国家非洲猪瘟区域实验室甘肃兰州730046

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)和猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪病毒性传染病,对全球养猪业造成严重危害。随着PRRSV与ASFV的流行,增加了二者混合感染的可能性。前期工作已表明PRRSV在体外可以抑制ASFV复制。然而,ASFV是否影响PRRSV体外复制尚不可知。因此,本研究通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫印迹试验(Western-blot)检测了PRRSV疫苗株JXA1-R和ASFV弱毒株混合感染后PRRSV在猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)和猪骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)的复制水平以及CD163的mRNA水平。结果显示,混合感染抑制了PRRSV的复制水平,并降低CD163的mRNA水平。本研究证明ASFV可抑制PRRSV在体外的复制,并抑制CD163的mRNA水平。该结果为PRRSV和ASFV混合感染的防控提供了理论依据。

关键词：非洲猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染抑制

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宿主蛋白VDAC1抑制口蹄疫病毒复制的机制研究

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中国兽医科学 2024年第12期54卷 1563-1568,I0001页

作者：马柯薛巧刘鹏飞朱紫祥李宏斌刘会胜郑海学兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州1730050 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染偶蹄类动物(如猪、牛和羊)而引起的急性、高度传染性疾病。其非结构蛋白3D^(pol)在FMDV复制和致病过程中发挥着重要作用。为探究宿主蛋白与3D^(pol)蛋白的作用机制,本研究... 详细信息

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染偶蹄类动物(如猪、牛和羊)而引起的急性、高度传染性疾病。其非结构蛋白3D^(pol)在FMDV复制和致病过程中发挥着重要作用。为探究宿主蛋白与3D^(pol)蛋白的作用机制,本研究首先利用酵母双杂交和免疫共沉淀试验鉴定出VDAC1与FMDV3D^(pol)相互作用,再运用过表达VDAC1和抑制剂试验发现VDAC1通过自噬途径抑制3D^(pol)蛋白的表达,最后发现下调VDAC1后对FMDV的复制有促进作用,表明VDAC1靶向3D^(pol)蛋白抑制FMDV复制。本研究揭示了宿主蛋白抑制FMDV复制的新机制,本研究为口蹄疫防控提供了新的方向和靶点。

关键词：口蹄疫病毒 3D^(pol) 宿主蛋白VDAC1 自噬

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宿主OAS2蛋白抑制非洲猪瘟病毒体外复制的研究

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 577-583页

作者：赵思越史喜绢杨行张大俊赵登率陈国辉陈玲玲闫文倩别鑫恬赵美玉李平郑海学张克山郜原甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为了探究宿主蛋白2′,5′-寡腺苷酸合成酶2(OAS2)与非洲猪瘟病毒(ASFV)复制之间的关系,本研究通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对宿主OAS2的调控作用;构建并合成OAS2真核表达质粒以及siRNA干扰... 详细信息

为了探究宿主蛋白2′,5′-寡腺苷酸合成酶2(OAS2)与非洲猪瘟病毒(ASFV)复制之间的关系,本研究通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对宿主OAS2的调控作用;构建并合成OAS2真核表达质粒以及siRNA干扰序列,通过RT-qPCR、Western-blot方法探究在MA-104细胞中外源过表达OAS2及在PAMs细胞中下调OAS2表达对ASFV体外复制的影响。结果显示,ASFV感染PAMs细胞后,OAS2的蛋白水平和转录水平皆上调,并且外源过表达OAS2显著抑制了ASFV的复制,下调OAS2表达促进了ASFV的复制。本研究通过对宿主蛋白OAS2进行过表达和敲低,证实了OAS2可以抑制ASFV体外复制,该结果为进一步研究宿主对ASFV的抗病毒免疫研究提供了理论基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 OAS2 天然免疫抑制

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基于不同冻干保护剂的真空冷冻干燥对口蹄疫病毒样颗粒稳定性的影响

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生物工程学报 2025年

作者：郭伟谢茜茜刘瑞鹏董虎张韵王晓强孙世琪郭慧琛滕志东中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州交通大学生物与制药工程学院甘肃农业大学动物医学院宁夏大学生命科学学院

疫苗免疫是防控传染性疾病的重要手段。由结构蛋白组成的病毒样颗粒(virus-like particles， VLPs)因其良好的安全性和免疫效果成为备受关注的新型疫苗。然而，VLPs与大部分疫苗抗原一样热稳定性不足，这会限制疫苗的广泛应用，增加疫... 详细信息

疫苗免疫是防控传染性疾病的重要手段。由结构蛋白组成的病毒样颗粒(virus-like particles， VLPs)因其良好的安全性和免疫效果成为备受关注的新型疫苗。然而，VLPs与大部分疫苗抗原一样热稳定性不足，这会限制疫苗的广泛应用，增加疫苗失效的风险。本研究旨在利用真空冷冻干燥技术提升A型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus， FMDV)VLPs的稳定性和储存期。通过单因素和组合筛选确定最佳冻干保护剂配方，并通过小鼠试验评估冻干疫苗免疫效果与FMDV VLPs含量之间的对应关系。随后将冻干前、后的FMDV VLPs在4、25、37 ℃分别放置不同时间，以评估其稳定性。结果表明，由7.5%海藻糖、0.1%吐温80、50 mmol/L甘氨酸、1%谷氨酸钠、3%聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone， PVP)组成的1号冻干保护剂在真空冷冻干燥过程中有效保留了FMDV VLPs含量。小鼠免疫试验表明，冻干FMDV VLPs诱导的特异性抗体、免疫球蛋白G1(immunoglobulin G1， IgG1)、白细胞介素-4 (interleukin-4， IL-4)以及中和抗体水平与未冻干FMDV VLPs无明显差异。热处理结果显示，冻干FMDV VLPs在4、25、37 ℃的储存期显著优于未冻干FMDV VLPs。以上结果表明，筛选得到的冻干保护剂配方有效提升了FMDV VLPs疫苗的稳定性，本研究为提高新型亚单位疫苗稳定性提供了重要参考。

关键词：口蹄疫病毒样颗粒真空冷冻干燥冻干保护剂稳定性免疫效果

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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Nup155基因敲除的PK-15细胞系

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中国兽医科学 2025年第5期55卷 569-576页

作者：孙瑜嘉殷娟斌刘瀛李可卿曹轶梅朵红卢曾军赵志荀张强中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心青海大学畜牧兽医科学院

本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构成Nup155基因缺失的PK-15细胞株，并检测敲除Nup155基因后对PK-15细胞的影响。首先设计精确靶向Nup155基因的4条sg RNA，与载体LentiCRISPR v2连接后进行慢病毒包装；再使用2μg/m L嘌呤霉素筛选... 详细信息

本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构成Nup155基因缺失的PK-15细胞株，并检测敲除Nup155基因后对PK-15细胞的影响。首先设计精确靶向Nup155基因的4条sg RNA，与载体LentiCRISPR v2连接后进行慢病毒包装；再使用2μg/m L嘌呤霉素筛选细胞株；通过RT-qPCR和Western-blot来确认细胞中Nup155基因是否被敲除；最终通过CCK8试验检测Nup155基因敲除对PK-15细胞活性的影响。RT-qPCR及Westernblot结果显示，细胞株Nup155基因的m RNA和蛋白表达水平显著降低；CCK8试验结果显示，部分敲除Nup155基因的PK-15细胞活力下降。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了1株Nup155基因部分敲除的PK-15细胞系，并发现部分敲除Nup155基因会显著影响PK-15细胞活力，为深入研究Nup155基因的功能机制提供了理想的细胞模型。

关键词： PK-15细胞基因敲除 Nup155 慢病毒包装

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真空冷冻干燥提升表达A型FMDV结构蛋白大肠杆菌的稳定性

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中国兽医科学 2025年

作者：郭伟刘瑞鹏张佳甜尉嘉锡郭慧琛孙世琪马全英滕志东王晓强兰州交通大学生物与制药工程学院兰州交通大学化学化工学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

为提升表达A型口蹄疫病毒（FMDV）结构蛋白大肠杆菌的稳定性，以大肠杆菌活性为评价指标，在单因素试验基础上采用Box-Behnken响应面法优化冻干保护剂组合。利用Box-Behnken结果进行回归模型拟合，得到最佳冻干保护剂配方为3.192%（质... 详细信息

为提升表达A型口蹄疫病毒（FMDV）结构蛋白大肠杆菌的稳定性，以大肠杆菌活性为评价指标，在单因素试验基础上采用Box-Behnken响应面法优化冻干保护剂组合。利用Box-Behnken结果进行回归模型拟合，得到最佳冻干保护剂配方为3.192%（质量分数，下同）山梨醇、3.094%谷氨酸钠、6.924%乳糖、3%脱脂奶粉和5%海藻糖，并对配方进行了验证。为分析真空冷冻干燥菌种的稳定性，将冻干及未冻干的菌种置于25 ℃和37 ℃放置不同时间，重溶后测定大肠杆菌的活性和表达蛋白的水平，结果显示，在25 ℃和37 ℃条件下，冻干样品相比于未冻干样品显示出更好的活性，表明冷冻干燥可以提高表达A型FMDV结构蛋白大肠杆菌的储存时长和稳定性。本研究为提升原核表达系统的稳定性和储存期提供了新方案。

关键词：口蹄疫病毒大肠杆菌真空冷冻干燥 Box-Benhnken响应面法

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猪圆环病毒3型四川株Cap蛋白的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医 2024年第7期51卷 3056-3066页

作者：欧云文潘琴汪洋代军飞任绍科张洋翟佳佳张杰开江县动物疫病预防控制中心达州636250 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730046 河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室秦皇岛066004

【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段... 详细信息

【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET30a-PCV3-Cap。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,获得具有良好抗原性的重组Cap蛋白。基于纯化的重组Cap蛋白建立间接ELISA方法,确定最佳抗原包被浓度、待检血清最佳稀释比例、酶标抗体稀释比例和阴阳性临界值,对间接ELISA方法的特异性、敏感性、重复性、相关性和符合率进行分析,并对2018-2022年采自川东北地区猪场的351份临床猪血清进行检测,分析该区域PCV3流行情况。【结果】试验成功构建pET30a-PCV3-Cap重组表达载体,实现重组Cap蛋白(1-197位氨基酸)的原核截短表达,蛋白大小约为26 ku,可与PCV3阳性猪血清发生特异性反应;确定最佳抗原包被浓度为1 ng/μL,待检血清最佳稀释比例为1∶100,酶标抗体稀释比例为1∶60000,阴阳性临界值D_(450 nm)为0.684;建立的间接ELISA方法与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪细小病毒1型(PPV1)阳性猪血清均不发生交叉反应,敏感度达1∶1600,批内变异系数和批间变异系数均<10%,与病毒中和试验(VNT)结果呈正相关,与Western blotting方法的阳性符合率为95.8%;2018-2022年川东北地区的351份猪血清样品阳性率为7.12%。【结论】本研究成功截短表达了PCV3四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PCV3间接ELISA方法,为PCV3的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。

关键词：猪圆环病毒3型(PCV3) Cap蛋白截短表达 ELISA

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猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA检测方法的建立和初步应用

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中国兽医科学 2024年第10期54卷 1302-1308页

作者：王婉莹石正旺罗俊聪廖焕程冯露郑海学田宏蔺国珍西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)Ig A抗体,以PEDV重组S蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的小鼠抗猪Ig A单克隆抗体为检测抗体,建立并优化了PEDV Ig A抗体的ELISA检测方法,并评估了其特异性、敏感性、重复性及临床样品检测性能。结果显... 详细信息

为检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)Ig A抗体,以PEDV重组S蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的小鼠抗猪Ig A单克隆抗体为检测抗体,建立并优化了PEDV Ig A抗体的ELISA检测方法,并评估了其特异性、敏感性、重复性及临床样品检测性能。结果显示:该方法抗原最佳包被质量浓度为2μg/m L,酶标抗体的最佳工作浓度为1:25000,血清最佳稀释度为1:50;与猪伪狂犬病病毒、非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、口蹄疫病毒阳性血清均无交叉反应;灵敏度为1:800;批内、批间变异系数均小于10%;与IDEXX商品化试剂盒的检测结果具有高度一致性。结果证明,本研究中建立的PEDV Ig A抗体检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于猪流行性腹泻的临床诊断与防控、流行病学调查以及免疫效果评估。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白 IgA抗体 ELISA

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KLHL家族蛋白的研究进展

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中国兽医科学 2024年第10期54卷 1385-1390页

作者：陈创伟张伟吕岳芹黄梦瑶孙琬珈周嘉慧李敏曹伟军郑海学杨帆中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

本文从Kelch-like(KLHL)家族蛋白的结构特点出发,围绕其在天然免疫、肿瘤等疾病方面的作用展开叙述,旨在为KLHL家族蛋白功能的研究和肿瘤等疾病的预防和治疗提供思路。

关键词： KLHL 结构与功能天然免疫疾病肿瘤

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