检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年

作者：刘泓屹张伟蔡建涛古涛鸣王良锋陈治彤曹伟军郑海学杨帆张桂红华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在探究TRIM7对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响，首先，针对猪源TRIM7基因外显子设计两条单向导RNA（single guide RNA，sgRNA），分别构建至载体PX459中，将成功构建的sgRNA重组质粒转染PK-15细胞，经嘌呤霉素筛选、有限稀释法... 详细信息

本研究旨在探究TRIM7对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响，首先，针对猪源TRIM7基因外显子设计两条单向导RNA（single guide RNA，sgRNA），分别构建至载体PX459中，将成功构建的sgRNA重组质粒转染PK-15细胞，经嘌呤霉素筛选、有限稀释法亚克隆挑取单克隆细胞，经测序及Western-blot 分析鉴定TRIM7基因的敲除情况，获得敲除TRIM7基因的PK-15细胞系。将TRIM7基因敲除细胞和对照细胞中分别感染FMDV，用Western-blot、RT-qPCR和TCID50测定等方法综合评价敲除TRIM7基因后对FMDV复制的影响。同时，在PK-15细胞上过表达TRIM7检测其对病毒复制的影响。结果显示，成功构建TRIM7基因敲除PK-15细胞系，且FMDV在TRIM7基因敲除细胞系中的复制水平均显著低于对照细胞，当过表达TRIM7时则会显著促进病毒的复制，表明TRIM7影响了FMDV 的复制。本研究为深入探索TRIM7的生物学功能及其调控病毒复制的分子机制奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 TRIM7基因细胞系过表达口蹄疫病毒

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因新缺失模式（1+1+111+1+19）的序列特征分析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：焦守德张婧马雪青李平花王健卢曾军王富强孙普中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心中农威特生物科技股份有限公司

基因高度突变和重组致使猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）新型毒株不断增加，应对其持续监测。掌握最新流行PRRSV毒株的遗传演变特点，可为我国PRRS的防控提供分子流行病学数据参考。本研究利用RT-PCR方法和测序技术，获取甘肃地区猪群... 详细信息

基因高度突变和重组致使猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）新型毒株不断增加，应对其持续监测。掌握最新流行PRRSV毒株的遗传演变特点，可为我国PRRS的防控提供分子流行病学数据参考。本研究利用RT-PCR方法和测序技术，获取甘肃地区猪群中最新流行的一株PRRSV全基因组序列，通过MEGA、RDP4和Simplot软件对其进行基因序列分析，基于其ORF5基因、NSP2基因和全长基因构建系统发育树并进行基因全长重组分析，对比ORF5和NSP2基因编码氨基酸的变异特点。成功测定PRRSVGSQY12-2023株全基因组序列，长15 032个核苷酸，基于ORF5基因的系统发育分析揭示其属于NADC30-like（L1C-like）毒株的L1C-D分支，其NSP2蛋白出现了新型缺失模式（1+1+111+1+19），重组分析发现该毒株可能由NADC30株和JXA1株分别为潜在主要和潜在次要亲本重组演化而来。本研究首次发现甘肃地区猪群中流行L1C-D-like PRRSV，并报道了其NSP2基因的新型缺失模式，这为PRRSVs的基因多样性和遗传演化研究提供了新的见解。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 L1C-like猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因缺失模式遗传变异

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猪瘟与口蹄疫二联疫苗的制备及其免疫效果评价

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中国预防兽医学报 2025年第2期47卷 172-178页

作者：高洁袁红焦云娟李坤李平花杨宇轩黄书伦郭海洋邱酉飞包慧芳孙普李冬刘在新卢曾军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 WOAH/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

为研制猪瘟(CSF)与口蹄疫(FMD)二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白(r E2)的表达与纯化效果,采用western blot检测r... 详细信息

为研制猪瘟(CSF)与口蹄疫(FMD)二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白(r E2)的表达与纯化效果,采用western blot检测r E2与His-Tag单克隆抗体(MAb)的反应原性。结果显示,在约50 ku处出现目的蛋白条带,纯化后在约50 ku处出现单一条带。western blot结果显示在50 ku处出现特异性条带。表明,r E2获得了表达且纯化效果较好,反应原性较强。将纯化后的r E2与灭活的口蹄疫病毒(FMDV)O/Tibet/99株混合后经ISA 201佐剂乳化制备二联疫苗,将小鼠分为4组:CSFV E2+FMDV(20μg^(+)1μg)组、CSFV E2(20μg)组、FMDV(1μg)组及PBS阴性对照组。于第1 d和21 d分别将相应疫苗以肌肉注射方式免疫6周龄~8周龄的各组雌性BALB/c小鼠,首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d采血,利用ELISA检测各组小鼠血清中的抗体水平;利用流式细胞术检测免疫后42 d各组小鼠血液中CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞和CD19^(+)B淋巴细胞的占比;采用ELISA检测免疫后42 d各组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平。抗体检测结果显示,与PBS组相比,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠产生的针对两种病毒的抗体水平均显著和极显著升高(P<0.05、P<0.01、P<0.0001);E2+FMDV组与E2组和FMDV组小鼠血清中CSFV和FMDV的抗体水平均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术结果显示,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞及CD19^(+)B淋巴细胞的占比均显著和极显著高于PBS组(P<0.05、P<0.01、P<0.0001);E2+FMDV组与E2组小鼠上述指标均无显著差异;与FMDV组相比,E2+FMDV组小鼠CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞的占比极显著升高(P<0.01),而另外两个指标均无显著差异。ELISA检测结果显示,3个实验组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平均显著和极显著高于PBS组(P<0.05、P<0.01),E2+FMDV组与二者单独免疫组小鼠IFN-γ的分泌水平均无显著差异。上述结果表明,E2+FMDV二联疫苗对小鼠的免疫效果与单独免疫E2亚单位疫苗和FMDV灭活疫苗的免疫效果相当,CSFV E2蛋白与FMDV灭活病毒的联合免疫是可行的。综上,本研究首次制备的CSFV E2+FMDV二联苗可作为防控CSF和FMD的一种潜在候选疫苗,为这两种病毒二联甚至多联疫苗的研制奠定了实验基础。

关键词：猪瘟 E2蛋白口蹄疫二联疫苗

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宿主蛋白RPSA在非洲猪瘟病毒复制过程中的作用研究

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1149-1156页

作者：邵程祥张忠辉孙华林赵亚茹杨吉飞关贵全殷宏武军元牛庆丽塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家非洲猪瘟区域实验室甘肃兰州730046 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

本研究旨在探究宿主RPSA蛋白对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)复制的影响,以及病毒蛋白B602L与RPSA之间的相互作用。利用RPSA重组质粒pcDNA3.1-Flag-RPSA转染293T细胞,通过免疫荧光检测B602L和RPSA蛋白的亚细胞定位,通... 详细信息

本研究旨在探究宿主RPSA蛋白对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)复制的影响,以及病毒蛋白B602L与RPSA之间的相互作用。利用RPSA重组质粒pcDNA3.1-Flag-RPSA转染293T细胞,通过免疫荧光检测B602L和RPSA蛋白的亚细胞定位,通过免疫共沉淀(Co-IP)验证它们之间的相互关系。通过荧光定量PCR和Western-blot分析ASFV感染IPAM细胞在不同时间点RPSA的表达差异。此外,通过在IPAM细胞中过表达或干扰RPSA的表达,分析RPSA对ASFV复制的影响。研究结果表明,ASFV感染IPAM细胞后,RPSA蛋白的表达随时间延长而逐渐增加,表明RPSA蛋白可能在病毒感染中发挥作用。通过过表达RPSA可抑制病毒复制,而干扰RPSA则导致病毒复制增强,进一步表明RPSA在ASFV复制过程中发挥重要作用。最后,Co-IP和亚细胞定位结果证明病毒蛋白B602L与宿主蛋白RPSA之间存在相互作用。综上所述,本研究揭示了宿主蛋白RPSA在ASFV复制过程中的作用,为进一步研究病毒与宿主之间的相互作用机制奠定了基础,也有助于深入了解ASFV的感染机制为疾病控制提供新的线索。

关键词：非洲猪瘟病毒 B602L RPSA 相互作用

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2020—2023年甘肃猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因遗传变异分析

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中国兽医科学 2024年第11期54卷 1482-1490页

作者：焦守德张婧李平花王健韩庆彦张雨星魏达礼王方洲白兴文卢曾军马雪青孙普中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046 甘肃农业大学甘肃兰州730070

为了了解甘肃地区猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及遗传变异情况,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对2020-2023年收集的猪组织样品进行PRRSV ORF5、NSP2和ORF3基因扩增并测序,通过MEGA软件构建遗传进化树进行遗传变异分... 详细信息

为了了解甘肃地区猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及遗传变异情况,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对2020-2023年收集的猪组织样品进行PRRSV ORF5、NSP2和ORF3基因扩增并测序,通过MEGA软件构建遗传进化树进行遗传变异分析。结果显示,共检测了52份猪临床样品,PRRSV核酸阳性率为61.5%(32/52),成功获得了32条ORF5、15条NSP2和14条ORF3基因序列。ORF5基因遗传进化分析表明,2020—2023年甘肃地区猪群中PRRSV流行毒株中存在美洲型1.5谱系(4株)、1.8谱系(24株)、5.1谱系(2株)、8.7谱系(2株);NSP2基因遗传进化分析表明,获得的15条NSP2序列均为1.8谱系;ORF3基因遗传进化分析表明,获得的14条ORF3序列包括1.5谱系(2株)、1.8谱系(11株)、3.5谱系(1株)。基因核苷酸序列与参考毒株的同源性分别为ORF582.3%~99.7%、NSP285.9%~90.0%和ORF389.8%~95.7%;基因编码氨基酸序列与参考毒株的同源性分别为ORF579.6%~99.0%、NSP283.4%~87.7%和ORF385.1%~94.5%。ORF5基因编码的GP5蛋白的信号肽区、高变区、细胞表位区等区域均存在不同程度的变异,其中5株毒株的第33位氨基酸出现了缺失;15株NSP2蛋白氨基酸序列的缺失模式与NADC30株一致。上述结果表明,当前甘肃地区猪群中PRRSV呈现以1.8谱系毒株为优势的美洲型多谱系共循环流行,这对甘肃地区防控PRRSV提供了重要的流行病学数据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 NSP2 ORF3 遗传变异

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骆驼FGF21蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1079-1086页

作者：杨宇轩袁红焦云娟王涛高洁李坤李平花孙普卢曾军白兴文郜原甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省病原生物学基础学科研究中心动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730000

本研究旨在为深入研究骆驼成纤维细胞生长因子21(FGF21)调节糖脂代谢的作用机制提供蛋白和抗体材料。在NCBI数据库中检索骆驼FGF21基因序列(XM_010996368.2),删除信号肽区段后合成携带His标签的FGF21全长基因,通过Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切... 详细信息

本研究旨在为深入研究骆驼成纤维细胞生长因子21(FGF21)调节糖脂代谢的作用机制提供蛋白和抗体材料。在NCBI数据库中检索骆驼FGF21基因序列(XM_010996368.2),删除信号肽区段后合成携带His标签的FGF21全长基因,通过Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点嵌入p ET-28a(+)表达载体,获得重组表达质粒p ET-28a(+)-FGF21-His,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行重组蛋白FGF21的表达,通过镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化的重组蛋白。将重组蛋白FGF21与弗氏佐剂混合乳化后免疫新西兰大白兔,制备家兔源多克隆抗血清,利用protein A亲和层析纯化柱纯化多克隆抗体,利用SDS-PAGE技术分析纯化多克隆抗体的纯度,利用Western-blot和间接ELSIA方法验证纯化多克隆抗体的反应性。结果表明,成功表达并纯化出骆驼重组蛋白FGF21,以其免疫家兔后制备并纯化出抗FGF21的特异性多克隆抗体。本研究为建立ELISA方法检测骆驼FGF21蛋白提供了材料,为阐明FGF21在骆驼糖脂代谢中的功能机制奠定了基础。

关键词： FGF21 骆驼原核表达多克隆抗体

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STING agonist 22免疫增强剂配伍ASFV P30蛋白对猪免疫效果的评价

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1137-1148页

作者：彭勤曹伟军杨帆刘华南茹毅朱紫祥郑海学张桂红华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东省人畜共患病防控重点实验室广东广州510642 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

本试验旨在探究STING agonist 22为候选免疫增强剂,配伍ASFV P30靶标蛋白开展对猪的免疫效果评价,为非洲猪瘟亚单位疫苗免疫增强剂的筛选提供前期实验依据。选取本实验室原核表达ASFV免疫原性较高的P30结构蛋白作为靶标抗原,并结合STING... 详细信息

本试验旨在探究STING agonist 22为候选免疫增强剂,配伍ASFV P30靶标蛋白开展对猪的免疫效果评价,为非洲猪瘟亚单位疫苗免疫增强剂的筛选提供前期实验依据。选取本实验室原核表达ASFV免疫原性较高的P30结构蛋白作为靶标抗原,并结合STINGagonist 22免疫增强剂与ISA201VG佐剂配伍ASFV P30蛋白2次免疫试验猪,比较STING agonist 22免疫增强剂诱导细胞免疫、体液免疫和抗原递呈反应的增强作用。结果显示,与单独201VG佐剂配伍相比,增加STING agonist 22免疫增强剂组免疫试验猪可以显著提早P30介导的抗体应答时间,提高B细胞成熟分化相关转录因子的表达水平,促进DCs成熟并增强其抗原递呈。本研究结果表明,STING agonist 22免疫增强剂配伍ASFV P30蛋白可以明显提高猪的细胞免疫、体液免疫反应及诱导更强的抗原递呈,可作为一种ASF亚单位疫苗的免疫增强剂。

关键词：非洲猪瘟病毒 STING agonist 22 免疫增强剂树突状细胞

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绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白原核表达及ELISA方法建立

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中国动物传染病学报 2025年第1期33卷 97-105页

作者：陈思宇张梦洁田睿陈益刘镝钺李文良毛立程子龙杨蕾蕾孙敏张纹纹杜改梅储岳峰王金泉刘茂军新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 金陵科技学院动物科学与食品工程学院南京211169 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF... 详细信息

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF-Tu蛋白,以纯化的rEF-Tu为包被抗原,建立Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,原核表达的EF-Tu蛋白分子质量约为45.4 kDa,与预期相符;Western blot证实具有良好的反应原性;建立的间接ELISA方法最佳优化条件显示,包被抗原浓度为1.25 mg/L,37℃孵育2 h;封闭条件为30 g/L BSA,37℃孵育1 h;待检血清1∶100稀释,37℃孵育45 min;酶标二抗1∶20000稀释,37℃孵育30 min;底物TMB 37℃避光反应15 min;样品OD450值≥0.296时判定为阳性,OD450值≤0.265时判定为阴性,OD 450值0.265~0.296则判为可疑;组内和组间变异系数均低于10%;用该方法与实验室所建Mo全菌蛋白间接ELISA检测方法对233份血清进行检测,两者特异性为90.70%,敏感性为82.69%,符合率约为87.12%。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、重复性及特异性,为Mo的临床诊断、抗体监测等提供简单快速的血清学诊断方法,也为Mo抗体检测试剂盒的开发奠定了基础。

关键词：绵羊肺炎支原体 EF-Tu蛋白原核表达间接ELISA

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2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用研究

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中国兽医科学 2023年第12期53卷 1537-1543页

作者：刘立元许健张瑜瑜宋银娟支飞杰储岳峰秦建华河北农业大学动物医学院河北保定071001 中国农业科学院、兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室、兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730046 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830091

为了分析细菌培养指示剂2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用,笔者将牛支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、绵羊肺炎支原体、鸡毒支原体、肺炎支原体分别接种于含有TTC的改良Thiaucourt’s液体培养基(TT... 详细信息

为了分析细菌培养指示剂2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用,笔者将牛支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、绵羊肺炎支原体、鸡毒支原体、肺炎支原体分别接种于含有TTC的改良Thiaucourt’s液体培养基(TTC-MTB)和改良Thiaucourt’s固体培养基(TTC-MTA)中,同时以常规酚红指示剂培养基作为对照,观察支原体在2种培养基中的生长情况,并筛选TTC在培养基中的最适指示浓度。结果显示,与常规酚红指示剂相比较,TTC有更为灵敏的培养指示效果;在固体培养基中,TTC指示的支原体红色菌落更有利于菌落的计数及形态的观察;TTC的最佳使用浓度为0.2 mg/mL。本研究可为支原体培养和优化疫苗生产工艺提供参考。

关键词： 2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC) 生长指示剂支原体

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多房棘球绦虫感染的检测方法研究进展

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中国兽医科学 2024年第7期54卷 946-954页

作者：游杰李立孙继文詹舒懿逯文颖周蜓蜓殷宏贾万忠闫鸿斌中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家动物包虫病专业实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730000 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

棘球蚴病是由棘球绦虫的幼虫(中绦期)——棘球蚴引起的一类人兽共患寄生虫病。感染棘球绦虫的终末宿主(犬、狐狸等)是传染源,及时准确检测终末宿主感染状况是防控棘球蚴病的关键环节。本文综述了多房棘球绦虫感染的病原学、分子生物学... 详细信息

棘球蚴病是由棘球绦虫的幼虫(中绦期)——棘球蚴引起的一类人兽共患寄生虫病。感染棘球绦虫的终末宿主(犬、狐狸等)是传染源,及时准确检测终末宿主感染状况是防控棘球蚴病的关键环节。本文综述了多房棘球绦虫感染的病原学、分子生物学和免疫学检测方法的研究进展,以期为终末宿主多房棘球绦虫感染的检测方法研究和试剂盒研发提供指导。

关键词：多房棘球绦虫犬科动物粪DNA 粪抗原分子生物学检测免疫学诊断

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