检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2024年第4期54卷 427-432页

作者：别鑫恬杨行陈国辉史喜绢张大俊赵登率闫文倩陈玲玲何路赵美玉赵思越蔺国珍郑海学张克山王明明西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州州730030 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为探究宿主脂肪酸合成对O型口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,以猪肾细胞PK-15和IBRS-2细胞为模型,监测脂肪酸合成的关键酶抑制剂对FMDV复制的调控作用;通过CCK-8试剂盒检测抑制剂对细胞的毒性作用,筛选合适的抑制剂预处理浓度;用Western-blo... 详细信息

为探究宿主脂肪酸合成对O型口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,以猪肾细胞PK-15和IBRS-2细胞为模型,监测脂肪酸合成的关键酶抑制剂对FMDV复制的调控作用;通过CCK-8试剂盒检测抑制剂对细胞的毒性作用,筛选合适的抑制剂预处理浓度;用Western-blot和实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测添加外源C75和TOFA对FMDV复制的调控作用。结果显示,和对照组相比,添加脂肪酸合成的关键酶抑制剂C75和TOFA后,口蹄疫病毒蛋白水平和转录水平均显著下调。结论,抑制宿主细胞脂肪酸合成会降低FMDV在宿主细胞中的复制效率,这为进一步深入研究FMDV的致病机制开辟了新的方向。

关键词：口蹄疫病毒脂肪酸合成关键酶抑制影响

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流感病毒跨种传播与感染致病机制研究进展

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兰州大学学报（医学版） 2023年第5期49卷 1-7页

作者：陈化兰朱启运徐帅动物疫病防控全国重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150000 动物疫病防控全国重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730000 动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730000

A型流行性感冒病毒(influenza A virus,IAV)属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae),是单股负链分节段的RNA病毒。IAV基因组由8个节段构成,分别是聚合酶碱性蛋白2(polymerase basic protein 2,PB2)、聚合酶碱性蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)、聚合酶酸性蛋白(polymerase acid protein,PA)、血凝素(hemagglutinin,HA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)、基质(matrix,M)蛋白和非结构蛋白(nonstructural protein,NS)节段。根据HA和NA的遗传性和抗原性的不同,可以将IAV分为18种HA亚型(H1-H18)和11种NA亚型(N1-N11)。

关键词： A型流行性感冒病毒跨种传播致病性天然免疫

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非洲马瘟病毒VP2蛋白的截短表达及免疫原性分析

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1087-1095页

作者：王轩莹范亚亚户鑫兵徐婧张鸿歌田占成苟惠天郑玉姝关贵全罗建勋殷宏独军政中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为评价非洲马瘟病毒(AHSV)VP2截短蛋白的免疫原性,以人工合成的含有AHSV S2的全长基因为模板,分别构建重组表达质粒p RSF-S2-502(编码1~502 aa)和p RSF-S2-1056(编码503~1056 aa),分别将其转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达。... 详细信息

为评价非洲马瘟病毒(AHSV)VP2截短蛋白的免疫原性,以人工合成的含有AHSV S2的全长基因为模板,分别构建重组表达质粒p RSF-S2-502(编码1~502 aa)和p RSF-S2-1056(编码503~1056 aa),分别将其转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达。将纯化后的重组蛋白免疫小鼠后,采用间接ELISA测定小鼠血清中特异性抗体水平,用流式细胞术检测小鼠脾T细胞亚群、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞表达IFN-γ的水平。结果显示,与PBS对照组相比,各免疫组小鼠血清中特异性抗体水平均显著升高,脾内CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞水平均显著升高;免疫组小鼠脾CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞表达IFN-γ的水平均升高。结果表明,重组AHSV VP2截短蛋白对小鼠具有较好的免疫原性,为进一步研究VP2蛋白生物学功能及非洲马瘟病毒亚单位疫苗奠定了理论基础。

关键词：非洲马瘟病毒 VP2蛋白截短表达免疫原性

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METTL3表达水平对口蹄疫病毒复制的影响

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1010-1018页

作者：张继燕李伟伟范许许曹雪静朱兆宇裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰张伟王川郑海学甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 河南农业大学动物医学院河南郑州450046 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的... 详细信息

利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的复制。为了进一步验证METTL3的表型功能,利用慢病毒包装系统构建METTL3稳定表达细胞系。用FMDV分别感染野生型和METTL3过表达BHK-21细胞,通过q PCR和TCID50试验测定FMDV在这2株细胞中的复制情况。结果显示,过量表达METTL3促进FMDV的复制。此外,激光共聚焦显微镜试验显示,FMDV感染BHK-21细胞后,METTL3从细胞核迁移至细胞质,其细胞定位的改变表明METTL3可能参与调控FMDV基因组的转录过程。本研究中成功构建了METTL3基因敲除和过表达的BHK-21细胞系,首次发现该分子正向调控FMDV的复制。上述实验结果为进一步开展METTL3在宿主细胞中调控FMDV复制的机制研究奠定了可靠的数据基础。

关键词： METTL3 m6A修饰口蹄疫病毒

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布鲁氏菌效应蛋白BspE基因缺失株的构建及其生物学特性研究

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中国畜牧兽医 2024年第12期51卷 5128-5137页

作者：张思岚支飞杰丁剑宋银娟郑福英付强储岳峰史慧君许健新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046 新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心乌鲁木齐830000

【目的】构建牛种布鲁氏菌(***)A19株效应蛋白BspE基因缺失株,探究其生长特性及在宿主细胞中的生存、黏附及入侵能力,并观察BspE蛋白的亚细胞定位情况。【方法】以牛种布鲁氏菌A19为研究对象,运用同源重组及SacB反向筛选技术构建布鲁氏... 详细信息

【目的】构建牛种布鲁氏菌(***)A19株效应蛋白BspE基因缺失株,探究其生长特性及在宿主细胞中的生存、黏附及入侵能力,并观察BspE蛋白的亚细胞定位情况。【方法】以牛种布鲁氏菌A19为研究对象,运用同源重组及SacB反向筛选技术构建布鲁氏菌效应蛋白BspE基因缺失株A19ΔBspE,并通过质粒回补方法构建其回补株A19CΔBspE,比较3种菌株在体外的生长特性;通过平板计数方法分析BspE基因缺失对布鲁氏菌在细胞内的生存及黏附和入侵细胞能力的影响;通过间接免疫荧光试验检测BspE蛋白在RAW264.7细胞中的定位情况。【结果】菌液PCR结果显示,获得大小为2060 bp的特异性条带,成功构建BspE基因缺失株A19ΔBspE;Western blotting结果显示,获得大小约为14.59 ku的BspE-flag条带,成功构建回补株A19CΔBspE。生长曲线结果显示,在相同的培养条件下,A19ΔBspE与牛种布鲁氏菌A19、A19CΔBspE的生长趋势没有显著差异(P>0.05),均在8 h达对数生长期,32 h进入平台期。胞内增殖试验结果显示,在感染48 h内,A19ΔBspE在RAW264.7细胞中的生存能力与牛种布鲁氏菌A19、A19CΔBspE无显著差异(P>0.05)。细菌黏附和入侵试验结果显示,A19ΔBspE黏附和入侵RAW264.7细胞的能力与牛种布鲁氏菌A19、A19CΔBspE没有显著差异(P>0.05)。间接免疫荧光试验结果显示,BspE蛋白主要分布于核周区域。【结论】本研究证实了BspE基因的缺失不影响布鲁氏菌在体外的生长及在RAW264.7细胞中的生存、黏附及入侵能力,且BspE蛋白主要定位在核周区域,为后续研究布鲁氏菌效应蛋白BspE的生物学功能和致病机制奠定基础。

关键词：布鲁氏菌效应蛋白BspE 突变株生物学特性

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口蹄疫病毒非结构蛋白3A的研究进展

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 441-445页

作者：王家丽杨帆邵文华黄梦瑶曹伟军张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种最具影响、最难控制的动物疫病之一,严重危害着偶蹄动物的健康。FMDV属于单股正链RNA病毒,由结构蛋白和非结构蛋白组成。本文系统总结了口蹄疫病毒非结构蛋白3A的结构和功能特点,有助于进一... 详细信息

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种最具影响、最难控制的动物疫病之一,严重危害着偶蹄动物的健康。FMDV属于单股正链RNA病毒,由结构蛋白和非结构蛋白组成。本文系统总结了口蹄疫病毒非结构蛋白3A的结构和功能特点,有助于进一步研究FMDV的感染机制并为FMD防控提供参考。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3A 结构功能

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非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 350-356页

作者：户鑫兵王轩莹宋昱庆田占成关贵全苟惠天罗建勋殷宏独军政中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列... 详细信息

非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列,利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上,将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中,获得了含有AHSVNS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1,将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSVNS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku,且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠,细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体,其效价达1∶51 200。流式细胞分析显示,AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明,AHSV NS1蛋白作为AHSV亚单位疫苗的组成成分具有一定应用前景。本试验实现了AHSV NS1蛋白在昆虫细胞中成功表达并验证其具有良好的抗原性,这为进一步研究AHSV NS1蛋白的生物学功能和亚单位疫苗开发奠定了基础。

关键词：非洲马瘟病毒 AHSV NS1蛋白昆虫细胞表达抗原性

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布鲁菌导致流产的风险因素与作用机制

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中国兽医科学 2025年第4期55卷 512-519页

作者：刘梦瑶魏东焦磊李彩玉刘东慧权衡周继章陈启伟宫晓炜中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术检定方法及其标准化重点实验室北京102629 兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 新突发传染病新型疫苗研发全国重点实验室北京100024

布鲁菌对胎盘和妊娠子宫具有明显的趋向性,已发现,该病原体能够在滋养层细胞和蜕膜细胞中复制,通过提高内质网应激而诱导细胞凋亡,触发流产。从布鲁菌感染导致流产的风险因素、布鲁菌在滋养层细胞中的生物学过程进行综述,以期为布鲁菌... 详细信息

布鲁菌对胎盘和妊娠子宫具有明显的趋向性,已发现,该病原体能够在滋养层细胞和蜕膜细胞中复制,通过提高内质网应激而诱导细胞凋亡,触发流产。从布鲁菌感染导致流产的风险因素、布鲁菌在滋养层细胞中的生物学过程进行综述,以期为布鲁菌病的临床诊疗评估及控制该病的风险传播提供科学理论依据。

关键词：布鲁菌风险因素胎盘滋养层炎症反应

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L929细胞无血清悬浮驯化及其在流产衣原体灭活疫苗中的应用研究

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中国兽药杂志 2024年第4期58卷 1-13页

作者：刘东慧李兆才梁林谭书敏闫海全白天俊王淑芳闫文军周继章中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础科学研究中心兰州730046 天祝县动物疫病预防控制中心甘肃武威733000

为通过悬浮细胞培养方法规模化生产流产衣原体抗原,采用逐步降血清悬浮驯化法使贴壁L929细胞逐步适应悬浮培养环境,最终获得了一株可无血清悬浮培养的L929细胞株。将流产衣原体接种于L929悬浮细胞上,研究不同的促感染试剂以提高收菌量,... 详细信息

为通过悬浮细胞培养方法规模化生产流产衣原体抗原,采用逐步降血清悬浮驯化法使贴壁L929细胞逐步适应悬浮培养环境,最终获得了一株可无血清悬浮培养的L929细胞株。将流产衣原体接种于L929悬浮细胞上,研究不同的促感染试剂以提高收菌量,并选择出最佳的培养方法制备流产衣原体灭活疫苗。以25μL、50μL、100μL的剂量免疫Balb/c小鼠,攻毒后检测其免疫保护效果。结果显示,当该L929悬浮细胞初始接种密度为5×10^(5)/mL时,培养72 h后细胞浓度可达到约7×10^(6)/mL,细胞活力在95%以上;在细胞密度为6×10^(6)/mL,接菌量为5.5×10^(4) IFU/mL,加入脂质体2000的量为1.7μL/mL、放线菌酮浓度为0.4μg/mL时,菌量增殖倍数最大,48 h内约扩增了52倍。经流产衣原体悬浮培养细胞灭活疫苗免疫后,小鼠产生的抗体水平随免疫剂量的增加而提升;接种50μL、100μL疫苗组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平、IFN-γ、IL-2的含量远高于接种25μL疫苗和注射PBS组的小鼠;对免疫后的小鼠进行攻毒,接种疫苗组小鼠的脾脏、十二指肠、子宫中的流产衣原体基因组含量远低于未接种疫苗组小鼠。注射PBS组及接种25μL疫苗组的小鼠子宫出现了不同程度的坏死及炎症,而其余两组小鼠的子宫无异常变化。结果表明,本试验成功驯化出1株L929悬浮培养细胞株,并且通过悬浮培养工艺制备的流产衣原体灭活疫苗免疫效果良好,接种50μL、100μL该灭活疫苗可以有效抑制流产衣原体的感染,该L929细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化生产提供了技术支持。

关键词： L929贴壁细胞悬浮培养驯化流产衣原体灭活疫苗免疫评价

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多房棘球蚴感染小鼠肝转录组分析及肝纤维化关键基因的筛选与验证

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1157-1168页

作者：孙慧李立闫鸿斌李秀荣吴耀东何兴殷宏付宝权贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃省动物寄生虫病重点实验室国家动物包虫病专业实验室甘肃兰州730046 中国人民解放军海军军医大学上海200433 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为探究多房棘球蚴感染引起宿主肝纤维化的关键基因变化,通过建立多房棘球蚴感染小鼠模型,利用高通量测序技术获得感染小鼠肝不同时间点差异m RNA表达谱,结合DisGeNET、GeneGards等数据库中已收录的肝纤维化相关基因集,挖掘感染进程中影... 详细信息

为探究多房棘球蚴感染引起宿主肝纤维化的关键基因变化,通过建立多房棘球蚴感染小鼠模型,利用高通量测序技术获得感染小鼠肝不同时间点差异m RNA表达谱,结合DisGeNET、GeneGards等数据库中已收录的肝纤维化相关基因集,挖掘感染进程中影响肝纤维化的重要基因。结果显示,多房棘球蚴感染小鼠肝出现胶原纤维沉积;通过转录组测序数据结合vlookup函数检索,发现2943个肝纤维化相关基因在感染后不同时间出现差异表达,其中显著上调的基因主要富集在PI3K-Akt等通路上,实时荧光定量PCR验证结果与高通量测序结果一致,通路中神经生长因子(Ngf)、肌腱蛋白C(Tnc)基因在肝星状细胞中表达量显著高于肝实质细胞、肝窦内皮细胞和枯否细胞,在小鼠原代肝星状细胞中敲低Ngf基因影响胶原基因Col1α1及Timp1的表达,推测这些通路和基因可能参与多房棘球蚴感染后致小鼠肝组织纤维化的过程。

关键词：多房棘球蚴转录组测序生物信息学纤维化神经生长因子

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