检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2023年第4期53卷 476-484页

作者：于永峰陈启伟权衡刘东慧李彩玉宫晓炜储岳峰中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

全基因组测序及生物信息学分析表明,鸭疫里默氏杆菌RA-LZ01株中存在1对新的双组分调控系统(two-component regulatory systems,TCS)RiaR/RiaS,且在黄杆菌目中高度保守。为探讨RiaR/RiaS在鸭疫里默氏杆菌中的作用,采用同源重组和结合转... 详细信息

全基因组测序及生物信息学分析表明,鸭疫里默氏杆菌RA-LZ01株中存在1对新的双组分调控系统(two-component regulatory systems,TCS)RiaR/RiaS,且在黄杆菌目中高度保守。为探讨RiaR/RiaS在鸭疫里默氏杆菌中的作用,采用同源重组和结合转移的方法构建反应调节器RiaR的基因缺失株RA^(ΔRiaR)和回补株RAcΔRia R,并比较了它们与亲本株RA-LZ01在生长、抗生素敏感性和毒力方面的生物学特性差异;通过RA-LZ01和RA^(ΔRiaR)的原核转录组测序,进一步分析RiaR所发挥的生物学功能。结果显示,与亲本株相比,RA^(ΔRiaR)在其生长、抗生素敏感性和毒力方面并无明显差异。转录组分析表明,从RA^(ΔRiaR)中筛选到203个差异基因[lb(FC)值的差异倍数≥2且P<0.05]均为显著上调的基因,提示RiaR/RiaS是1对负调控下游基因表达的TCS。COG分析结果显示,富集程度最高的差异基因为功能未知的基因(50个,19%),其次为氨基酸运输和代谢相关基因(29个,11%)。KEGG的分析结果显示,差异基因主要富集于代谢相关的通路(116个,77.8%),包括氨基酸代谢(29个,19.4%)、核苷酸代谢(14个,9.3%)、碳水化合物代谢(23个,15.4%)等14个代谢相关的子通路。因此,验证了鸭疫里默氏杆菌中RiaR基因的生物学功能,为深入探究该TCS参与鸭疫里默氏杆菌的代谢调控提供依据。

关键词：鸭疫里默氏杆菌 RiaR 转录组代谢调控

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CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2-E^(rns)融合蛋白及免疫原性分析

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中国兽医科学 2023年第10期53卷 1207-1215页

作者：李亚军郝荣增茹毅龚真莉刘艳红郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

本研究旨在利用CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2-E^(rns)融合蛋白,并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建融合表达BVDV E2和E^(rns)蛋白的真核重组表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2-... 详细信息

本研究旨在利用CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2-E^(rns)融合蛋白,并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建融合表达BVDV E2和E^(rns)蛋白的真核重组表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2-E^(rns),转染CHO细胞,进行上清分泌表达;离心收集细胞培养上清进行亲和层析纯化,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白的免疫反应性;使用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔,通过细胞免疫荧光(IFA)试验和间接ELISA试验鉴定E2-E^(rns)融合蛋白免疫家兔血清的抗体反应性和抗体效价。结果,通过CHO细胞表达系统,成功制备了纯化的BVDV E2-E^(rns)融合蛋白,Western-blot鉴定结果显示,His标签单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的融合蛋白发生特异性免疫反应。间接ELISA和IFA试验结果显示,一免后第7天血清抗体呈阳性,并持续至免疫后第28天,血清抗体效价水平可达1∶512000,且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV发生特异性免疫反应。上述结果表明,本研究成功利用CHO细胞表达系统制备并纯化了BVDV E2-E^(rns)融合蛋白,并通过体内和体外试验证明该融合蛋白具有良好的免疫原性,为BVD的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。

关键词：牛病毒行腹泻病毒 E2-E^(rns)融合蛋白真核表达 CHO培养免疫原性

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2018-2023年四川开江县口蹄疫、猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体监测与分析

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动物医学进展 2024年第11期45卷 76-82页

作者：潘琴欧云文任绍科张洋邓书明翟佳佳开江县动物疫病预防控制中心四川达州636250 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

为准确掌握2018-2023年四川开江县猪群中口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的免疫效果,从辖区359个场(点)随机采集猪血清3420份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行FMD、CSF和PRRS免疫抗体检测。结果显示,FMD、CSF和PRRS... 详细信息

为准确掌握2018-2023年四川开江县猪群中口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的免疫效果,从辖区359个场(点)随机采集猪血清3420份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行FMD、CSF和PRRS免疫抗体检测。结果显示,FMD、CSF和PRRS场(点)阳性率分别为79.94%、89.97%和67.41%,样品阳性率分别为83.92%、91.96%和76.05%,FMD和CSF免疫抗体阳性率逐年呈波浪式整体上升趋势,PRRS呈逐年下降趋势;在不同区域方面,所有乡镇的FMD和CSF样品阳性率均达到农业农村部规定标准,其中淙城街道的FMD和CSF场(点)阳性率、样品阳性率均最高,灵岩镇PRRS样品阳性率未达到农业农村部规定标准;在场点类型方面,屠宰环节的场(点)阳性率显著低于养殖环节(P<0.05),规模场(存栏量≥500头)的场(点)阳性率、样品阳性率均高于适度规模场(存栏量<500头)和散养户;从不同生长阶段来看,种畜样品阳性率均最高,分别为91.82%、95.33%和87.15%;在不同季节方面,FMD和CSF样品阳性率最高为夏季,分别为90.36%和96.70%,最低为春季。监测结果表明,开江县猪群中FMD、CSF和PRRS的整体免疫效果较好,建立了有效的免疫保护屏障,结果为进一步做好3种主要病毒性疫病的科学防控提供了参考依据。

关键词：口蹄疫猪瘟猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体监测与分析

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产气荚膜梭菌ε毒素蛋白的原核表达及其抗体间接ELISA方法的建立

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中国兽医科学 2023年第4期53卷 426-433页

作者：王武斌崔洁文曹小安高鹏程马清龙李学瑞储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

为建立绵羊产气荚膜梭菌ε毒素抗体间接ELISA检测方法,对D型产气荚膜梭菌(C60-1株)的ε毒素基因进行扩增,构建pET-32a-ε重组质粒,转入BL21(DE3)PlysS诱导蛋白表达,经Ni柱纯化后获得可溶性ε毒素重组蛋白。以纯化的重组蛋白作为包被抗原... 详细信息

为建立绵羊产气荚膜梭菌ε毒素抗体间接ELISA检测方法,对D型产气荚膜梭菌(C60-1株)的ε毒素基因进行扩增,构建pET-32a-ε重组质粒,转入BL21(DE3)PlysS诱导蛋白表达,经Ni柱纯化后获得可溶性ε毒素重组蛋白。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,对ELISA反应条件进行优化,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和临床检测中的应用进行验证。结果显示,重组蛋白包被浓度为0.5μg/m L,封闭液为1%BSA,待检绵羊血清1∶100稀释,家兔抗山羊HRP酶标二抗1∶5000稀释,显色液避光显色20 min为最佳反应条件。测定45份阴性血清,计算其平均值(X)和标准差(SD),确定所建立的ε毒素抗体间接ELISA方法的阴阳性临界值(X+3SD)为0.254。检测阳性血清敏感度为1∶3200,批间和批内重复率显示,变异系数均小于10%,特异性试验显示,检测羊痘病毒(SPV)、蓝舌病病毒(BTV)、羊布鲁氏菌、沙门菌和绵羊肺炎支原体均没有特异性反应。检测90份临床羊血清样品,该间接ELISA方法与商品化试剂盒之间的阳性符合率为82.9%,阴性符合率为95%,总符合率为85.6%。结果表明,本试验建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可初步用于绵羊产气荚膜梭菌ε毒素抗体的检测。

关键词：产气荚膜梭菌 ε毒素原核表达间接ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GS15株NSP2蛋白多位点缺失病毒的拯救与体外生长特性分析

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微生物学报 2024年第7期64卷 2307-2322页

作者：张兴民张婧孙普李娇阳崔占鼎李国秀王健李平花袁红李坤曹轶梅付元芳李冬赵志荀曾巧英卢曾军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

【目的】本实验室前期在高致病性毒株PRRSV/GSWW/2015的感染性克隆上,拯救获得了非结构蛋白(non-structural protein 2,NSP2)第519-565位和第628-747位氨基酸双缺失的工程病毒(r GS15-?2)。本研究旨在在双缺失病毒的感染性克隆上,构建... 详细信息

【目的】本实验室前期在高致病性毒株PRRSV/GSWW/2015的感染性克隆上,拯救获得了非结构蛋白(non-structural protein 2,NSP2)第519-565位和第628-747位氨基酸双缺失的工程病毒(r GS15-?2)。本研究旨在在双缺失病毒的感染性克隆上,构建拯救获得NSP2三个位点缺失的工程病毒。【方法】在前期双缺失病毒感染性克隆的基础上,利用融合PCR方法分别构建缺失NSP2第323-364位和第372-433位优势抗原表位的两个3个位点缺失的重组质粒。经脂质体介导,转染Marc-145细胞拯救病毒,通过电子显微镜观察、免疫荧光实验、测定病毒滴度、绘制生长曲线等方法对缺失病毒的生长特性进行分析。【结果】成功获得拯救病毒r GS15-?3-1和r GS15-?3-2。电子显微镜下可以观察到直径大小为50-80 nm的病毒粒子;免疫荧光实验检测表明,拯救病毒与亲本病毒GS15一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达;缺失区域RT-PCR扩增鉴定,拯救病毒传至40代缺失标记稳定存在;r GS15-△3-1与r GS15-△3-2病毒滴度分别为2.00×10^(6.0)TCID_(50)/m L和2.25×10^(5.8)TCID50/m L,与亲本病毒相比病毒滴度差异显著(P<0.05);生长曲线分析表明拯救病毒复制水平低于亲本病毒达到最高滴度的培养时间比亲本病毒延迟24 h。【结论】本研究通过对PRRSV基因2型非结构蛋白NSP2多位点缺失病毒的体外生长特性分析,为研制新型PRRSV标记疫苗奠定了基础,也为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供新的策略。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆非结构蛋白2(NSP2) 缺失标记生长特性

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荆州市三株猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及其进化分析

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中国兽医科学 2024年第11期54卷 1502-1509页

作者：吕熙王运航邱实郭慧琛孙世琪杨丰利白满元长江大学动物科学技术学院湖北荆州434000 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

为了解我国湖北省荆州市猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPV)的流行状况、遗传变异和演化方向,本研究采集荆州市4例疑似FPV病死猫肠道样本、1例FPV阳性粪便样本。经PCR检测后将FPV阳性样品接种F81细胞,连续盲传至出... 详细信息

为了解我国湖北省荆州市猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPV)的流行状况、遗传变异和演化方向,本研究采集荆州市4例疑似FPV病死猫肠道样本、1例FPV阳性粪便样本。经PCR检测后将FPV阳性样品接种F81细胞,连续盲传至出现显著细胞病变(cytopathic effect,CPE),利用PCR、间接免疫荧光实验(IFA)、电子显微镜等技术对其进行鉴定。经鉴定,共分离出3株FPV,分别命名为FPV-JZ202201、FPV-JZ202202和FPV-JZ202203。然后进行VP2基因测序并构建进化树。结果显示,此3株FPV的VP2序列与国内外参考毒株的核苷酸同源性为97.9%~99.9%,氨基酸序列同源性为97.6%~99.9%;其中FPV-JZ202203与2023年河北省保定市分离毒株OR727316处于同一分支,与国内疫苗株的距离较远,处于不同的拓朴亚群,FPV-JZ202201和FPV-JZ202202与国内当前流行的其他FPV毒株以及现有的疫苗株在遗传上表现出较高的相似性,且它们均归属于同一遗传拓扑群。本研究结果对于了解FPV的流行病学特征具有重要意义。它不仅增加了我们对FPV流行毒株遗传背景的认识,还为未来猫泛白细胞减少症(FPL)疫苗的研发和优化提供了宝贵的基础数据。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒 VP2 分离鉴定序列分析

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猪流行性腹泻疫苗研究进展

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中国畜牧兽医 2024年第11期51卷 5004-5013页

作者：张洋欧云文马春霞任绍科潘琴邓书明翟佳佳杨山山开江县动物疫病预防控制中心达州636250 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730046 达州中医药职业学院达州635000

近年来,随着中国养猪事业的高速发展,猪流行性腹泻(PED)已成为猪群的重要传染病,PED是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的,以腹泻、呕吐、脱水为特征的急性病毒性传染病。PED主要通过呼吸道和消化道传播,哺乳仔猪最易感,死亡率可高达100%,... 详细信息

近年来,随着中国养猪事业的高速发展,猪流行性腹泻(PED)已成为猪群的重要传染病,PED是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的,以腹泻、呕吐、脱水为特征的急性病毒性传染病。PED主要通过呼吸道和消化道传播,哺乳仔猪最易感,死亡率可高达100%,给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV是单股正链RNA病毒,具有4个主要结构蛋白、16个非结构蛋白和1个辅助蛋白ORF3。自2010年以来,该病毒变异株传播范围不断扩大,流行趋势日益复杂,经典毒株(CV777)相关疫苗已无法提供有效保护。因此,开发更加安全、有效的疫苗已迫在眉睫。灭活疫苗安全性高,但需多次接种且保护效果不佳;弱毒疫苗免疫原性良好,但存在毒力返祖风险;亚单位疫苗不携带病毒其他蛋白结构,使用安全、价格便宜,但其免疫原性差;重组病毒活载体疫苗可诱导产生特异性免疫反应,但安全性不足;重组细菌活载体疫苗能口服刺激机体黏膜免疫,并且载体具有佐剂作用,但其免疫效率不高;转基因植物疫苗安全稳定,但表达量低且研发周期长;核酸疫苗研发周期短、灵活性高,但安全性不高、外源基因易与宿主基因重组。随着相关研究的深入,各类疫苗研究已取得重要研究成果。笔者就PED灭活疫苗、弱毒疫苗、亚单位疫苗、重组病毒活载体疫苗、重组细菌活载体疫苗、转基因植物疫苗、核酸疫苗进行综述,以期为PED的防治和新型疫苗研发提供参考。

关键词：猪流行性腹泻猪流行性腹泻病毒(PEDV) 流行特点疫苗

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使用优化的信号肽和密码子在Expi293F细胞中高表达重链抗体可变区抗体

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生物工程学报 2024年第11期40卷 4219-4227页

作者：谭书桢董虎潘颂佳穆素雨陈永杰张韵孙世琪郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

重链抗体可变区抗体(variable domain of heavy-chain antibody,VHH)已被广泛用于药物治疗、诊断和研究。大肠杆菌是生产VHH最常用的表达系统,但可能会导致VHH的生物活性降低。哺乳动物细胞是目前最理想的VHH表达宿主之一。本研究通过优... 详细信息

重链抗体可变区抗体(variable domain of heavy-chain antibody,VHH)已被广泛用于药物治疗、诊断和研究。大肠杆菌是生产VHH最常用的表达系统,但可能会导致VHH的生物活性降低。哺乳动物细胞是目前最理想的VHH表达宿主之一。本研究通过优化VHH的信号肽(signal peptide,SP)和密码子,以期提高VHH在Expi293F细胞中的产量。VHH1-Fc被用于筛选SP,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)筛选出的SP IFN-α2分泌效果最佳;通过提高基因的GC3和GC含量,VHH1的产量提高了约1倍,且对VHH1与A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的结合活性无明显影响;其他5种重组VHHs分别连接SP IFN-α2并进行密码子优化,其平均产量大于191.6mg/L。此外,这些VHHs在培养上清中具有高纯度和高回收率的优点。本研究证实SP IFN-α2和密码子优化可以在Expi293F细胞高效表达VHH,为VHH的大规模生产提供了参考。

关键词：重链抗体可变区抗体信号肽密码子优化表达

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CpG和poly I:C增强口蹄疫病毒样颗粒疫苗免疫效果的研究

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中国兽医科学 2024年第7期54卷 859-865,I0001页

作者：任丽华罗新董虎谭书桢郭慧琛孙世琪魏彦明滕志东甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

本研究旨在评估CpG和poly I:C对口蹄疫(FMD)病毒样颗粒(VLPs)疫苗的免疫增强效果。以纯化的O型FMDVLPs抗原为基础,使用VLPs-CpG和VLPs-poly I:C刺激小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC),通过流式细胞术分析CD40和CD86在BMDC中的表达水平。进... 详细信息

本研究旨在评估CpG和poly I:C对口蹄疫(FMD)病毒样颗粒(VLPs)疫苗的免疫增强效果。以纯化的O型FMDVLPs抗原为基础,使用VLPs-CpG和VLPs-poly I:C刺激小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC),通过流式细胞术分析CD40和CD86在BMDC中的表达水平。进一步将VLPs、VLPs-CpG和VLPs-poly I:C分别与ISA206乳化制备疫苗,并免疫豚鼠,通过检测特异性抗体、中和抗体、脾淋巴细胞增殖以及攻毒试验评估CpG和poly I:C对VLPs疫苗免疫效果的影响。结果显示,VLPs-CpG组和VLPs-poly I:C组的CD86表达水平高于VLPs组,ISA206佐剂联合poly I:C、CpG均能提高攻毒保护率,而且ISA206联合CpG可以加速特异性抗体及中和抗体反应,提高脾淋巴细胞增殖水平。本研究结果表明,CpG和poly I:C均能增强FMDVLPs疫苗的免疫效果,具有潜在的开发应用价值。

关键词：口蹄疫病毒样颗粒 CpG poly I:C 免疫效果

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多糖修饰脂质纳米颗粒递药系统的研究进展

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生物工程学报 2024年第12期40卷 4339-4350页

作者：麻玉清柳海云王晓强孙世琪郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 兰州交通大学化学化工学院甘肃兰州730070 兰州交通大学生物与制药工程学院甘肃兰州730070

脂质纳米颗粒递送系统是目前最具有应用前景的药物载体之一,其生物相容性好、无免疫原性且载药效率高。然而,未修饰的脂质纳米颗粒仍存在稳定性差、易水解和易被快速清除的问题。为了克服上述缺点,研究人员对脂质纳米颗粒进行了一系列... 详细信息

脂质纳米颗粒递送系统是目前最具有应用前景的药物载体之一,其生物相容性好、无免疫原性且载药效率高。然而,未修饰的脂质纳米颗粒仍存在稳定性差、易水解和易被快速清除的问题。为了克服上述缺点,研究人员对脂质纳米颗粒进行了一系列的修饰,包括多肽修饰、抗体修饰、配体修饰、核酸适配体修饰、多糖修饰等。其中,多糖作为一类天然聚合物,修饰脂质纳米颗粒后表现出良好的生物相容性,而且还具有靶向目标器官和低毒性等优势。多糖修饰后的脂质纳米颗粒具有在临床治疗中发挥重要作用的潜力。本文综述了多糖修饰脂质纳米颗粒的制备及应用,为进一步研究与开发新型脂质纳米颗粒提供了参考。

关键词：递药系统脂质纳米颗粒多糖修饰脂质纳米颗粒制备多糖应用

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