检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2012年第12期28卷 1185-1190页

作者：王光祥尚佑军吕占禄张克山田宏刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的利用软件预测羊口疮病毒(ORFV)F1L蛋白的二级结构和细胞表位。方法利用SOPMA服务器预测ORFV F1L蛋白的二级结构,以DNAStar软件单参数(二级结构、亲水性、可及性、柔韧性及抗原性)预测结果为基础,通过二级结构预测初步筛选,并以ABCp... 详细信息

目的利用软件预测羊口疮病毒(ORFV)F1L蛋白的二级结构和细胞表位。方法利用SOPMA服务器预测ORFV F1L蛋白的二级结构,以DNAStar软件单参数(二级结构、亲水性、可及性、柔韧性及抗原性)预测结果为基础,通过二级结构预测初步筛选,并以ABCpred方案作为最终验证,预测羊口疮病毒(ORFV)F1L蛋白的B细胞表位;运用神经网络+量化矩阵法(ANNs+QM法)预测ORFV F1L蛋白的CTL细胞表位;使用MHC-II类分子结合肽在线程序预测ORFV F1L蛋白的Th细胞表位。结果 ORFV F1L蛋白含有α-螺旋34.71%、β-片层18.82%、β-转角5.88%、无规则卷曲40.59%;没有信号肽,可能存在7个B细胞表位,2个CTL表位,3个Th细胞表位。结论该研究结果将为建立ORFV诊断方法、制备单克隆抗体及合成肽疫苗提供理论依据。

关键词：羊口疮病毒 F1L基因二级结构细胞表位预测

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口蹄疫病毒非结构蛋白对豚鼠CD8^+T细胞应答的免疫增强作用

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中国兽医科学 2012年第10期42卷 1024-1030页

作者：孙英军郑海学张艳靳野杨帆张志东刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了整体评价口蹄疫病毒非结构蛋白和前导蛋白对免疫应答的影响,选用反向遗传操作技术构建的与野生型毒株(Mya98/BY/2010)P1基因相同而非结构蛋白和前导蛋白不同的重组病毒(分别被命名为Re-Mya98/BY/2010)和Mya98/BY/2010)作为抗原,经BE... 详细信息

为了整体评价口蹄疫病毒非结构蛋白和前导蛋白对免疫应答的影响,选用反向遗传操作技术构建的与野生型毒株(Mya98/BY/2010)P1基因相同而非结构蛋白和前导蛋白不同的重组病毒(分别被命名为Re-Mya98/BY/2010)和Mya98/BY/2010)作为抗原,经BEI灭活后与4种佐剂乳化,制备不同的疫苗作为免疫原。然后免疫豚鼠,利用流式细胞仪检测免疫豚鼠CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群的含量,ELISA方法检测免疫豚鼠血清中抗体应答。免疫后第28天进行攻毒试验。结果,抗原剂量相同的条件下,重组Re-Mya98/BY/2010疫苗比Mya98/BY/2010疫苗更能有效诱导CD8+亚群,每个时间点都含有较高的含量。ELISA结果显示,Mya98/BY/2010和Re-Mya98/BY/2010抗原都能诱导抗体应答,早期Re-Mya98/BY/2010诱导更高的抗体应答。豚鼠攻毒后,免疫Re-Mya98/BY/2010疫苗的保护率分别达到100%、83.33%、100%和50%,而免疫Mya98/BY/2010疫苗的保护率仅为20%、0、17%和25%,两者具有明显的统计学差异。结果表明,口蹄疫非结构蛋白在诱导免疫应答方面具有显著的诱导CD8+T淋巴细胞应答和提高免疫保护率的作用。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白细胞免疫

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猪圆环病毒2型两种重组多表位蛋白免疫效果的评价

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中国兽医科学 2012年第10期42卷 1031-1036页

作者：田晓婷李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

Cap蛋白和Rep蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2)的2个主要蛋白,其中含有很多表位。本研究合成了由3个Cap蛋白表位和1个Rep蛋白表位组成的2个表位串联体,利用NcoⅠ、SpeⅠ和SalⅠ位点,将Hsp65基因与表位串联体依次克隆到pE... 详细信息

Cap蛋白和Rep蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2)的2个主要蛋白,其中含有很多表位。本研究合成了由3个Cap蛋白表位和1个Rep蛋白表位组成的2个表位串联体,利用NcoⅠ、SpeⅠ和SalⅠ位点,将Hsp65基因与表位串联体依次克隆到pET30a,把构建的重组表达质粒PHE转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,诱导重组蛋白的表达。将表达的两种重组蛋白HSP-e-1和HSP-e-2纯化复性后分别免疫小鼠,结果被免疫的小鼠产生特异性抗体,其中HSP-e-2产生的抗体水平较高,而HSP-e-1的淋巴细胞增殖结果要优于HSP-e-2。结果表明,牛型分枝杆菌Hsp65能够作为多表位肽的载体,而融合蛋白HSP-e-1和HSP-e-2可作为PCV2新型疫苗的候选物。

关键词：猪圆环病毒2型热休克蛋白65 抗原表位免疫应答

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串联亲和纯化中应用不同标签组合的研究进展

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中国兽医科学 2012年第9期42卷 987-990页

作者：魏衍全孙世琪孙德惠郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

综述了原始串联亲和纯化方法的原理及其存在的缺陷和各种最新构建的串联亲和纯化标签组合及其从哺乳动物细胞中纯化蛋白复合物时的蛋白得率。与单步纯化方法相比,串联亲和纯化方法显著地减少了非特异性背景,可分离到高纯度的蛋白复合物... 详细信息

综述了原始串联亲和纯化方法的原理及其存在的缺陷和各种最新构建的串联亲和纯化标签组合及其从哺乳动物细胞中纯化蛋白复合物时的蛋白得率。与单步纯化方法相比,串联亲和纯化方法显著地减少了非特异性背景,可分离到高纯度的蛋白复合物。这一优势极大地简化了蛋白质鉴定及其相互作用关系的验证工作。

关键词：串联亲和纯化亲和标签蛋白复合体高蛋白得率

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羊口疮病毒B2L蛋白二级结构及其细胞表位的预测

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中国兽医科学 2012年第11期42卷 1133-1138页

作者：王光祥尚佑军吕占禄田宏张克山刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的... 详细信息

采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的细胞毒性T细胞和辅助T细胞的抗原表位。结果显示,羊口疮病毒B2L蛋白的整个结构中α-螺旋区域和无规则卷曲区域出现得较多,其中α-螺旋占30.42%,β-片层占24.34%,β-转角占5.56%,无规则卷曲占39.68%;有6个优势B细胞表位,3个细胞毒性T细胞表位和2个辅助T细胞表位。本研究为ORFV诊断方法的建立、单克隆抗体的制备及表位疫苗的研制提供了理论依据。

关键词：羊口疮病毒 B2L基因二级结构 B细胞表位 T细胞表位预测

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口蹄疫病毒牛源整联蛋白受体β_3、β_8亚基基因的克隆及分子特征分析

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畜牧兽医学报 2012年第7期43卷 1143-1149页

作者：杜平尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

本研究旨在从分子角度阐明口蹄疫病毒(FMDV)牛源整联蛋白受体β3和β8基因的结构特征,并为研究病毒遗传变异与宿主范围改变奠定基础。采用RT-PCR技术在国内首次从牛肾组织获得β3和β8基因,并用生物软件对它们的分子特征进行了分析。结... 详细信息

本研究旨在从分子角度阐明口蹄疫病毒(FMDV)牛源整联蛋白受体β3和β8基因的结构特征,并为研究病毒遗传变异与宿主范围改变奠定基础。采用RT-PCR技术在国内首次从牛肾组织获得β3和β8基因,并用生物软件对它们的分子特征进行了分析。结果显示:β3亚基基因全长2 355bp,编码784个氨基酸,其中信号肽由22个氨基酸组成,胞外区由692个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞质区由41个氨基酸组成,氨基酸同源性与羊最高,与易感FMDV的牛、骆驼、猪和羊的β3亚基位于同一进化分支,各功能区的保守性为胞质区>跨膜区>配体结合区>胞外区>信号肽,但半胱氨酸富集区的突变率仅次于信号肽。牛源β8亚基基因全长2 304bp,编码767个氨基酸,包括42个氨基酸的信号肽,637个氨基酸的胞外区,29个氨基酸的跨膜区及59个氨基酸的胞质区,氨基酸同源性与马最高,进化分析发现与猪的β8亚基不在同一分支,各功能区的保守性排序为跨膜区>配体结合区>胞质区>胞外区>信号肽。将β3亚基与β8亚基比较发现,β8亚基的配体结合区比β3亚基更为保守,β3亚基的胞质区存在NPLY基序,而β8亚基无此基序,且β8亚基胞质区可变性更高。本研究提示FMDV对ανβ8的利用率高于ανβ3可能与β8亚基配体结合区更为保守有关。

关键词：口蹄疫病毒 β3亚基 β8亚基分子特征

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细菌的CRISPR/cas免疫及免疫识别

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 657-660页

作者：马延滨常惠芸中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

综述了40%真细菌以及几乎所有古细菌基因组内存在的CRISPR位点以及细菌的CRISPR/cas免疫机制。主要从CRISPR/cas免疫的抗感染机制、特异性间隔序列的获取、crRNA的成熟以及免疫识别等方面展开论述,阐述了成簇存在的、被短的重复回文序... 详细信息

综述了40%真细菌以及几乎所有古细菌基因组内存在的CRISPR位点以及细菌的CRISPR/cas免疫机制。主要从CRISPR/cas免疫的抗感染机制、特异性间隔序列的获取、crRNA的成熟以及免疫识别等方面展开论述,阐述了成簇存在的、被短的重复回文序列所分割的非自身基因(CRISPR位点)以及通过类RNA干扰(RNAi)机制特异性地抵抗噬菌体及侵袭性质粒的二次感染。提出此技术在临床上用来抑制抗生素抗性质粒以及毒力因子在病原菌中传播的应用前景。

关键词： CRISPR/cas 免疫机制免疫识别

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AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因结构预测及亚细胞定位

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1669-1673页

作者：张克山尚佑军郭建宏郑海学田宏靳野刘永杰刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用PCR方法扩增到VP1基因,序列测定后利用Mega4.0、swiss-model、GOR4和RasMol软件预测了VP1基因的二、三级结构。将VP1基因融合EGFP基因后定向克隆入PcDNA3.1(+)真核表达载体,构建正确的重组质粒命名为PVP1E,在脂质体介导下将PVP1E质... 详细信息

利用PCR方法扩增到VP1基因,序列测定后利用Mega4.0、swiss-model、GOR4和RasMol软件预测了VP1基因的二、三级结构。将VP1基因融合EGFP基因后定向克隆入PcDNA3.1(+)真核表达载体,构建正确的重组质粒命名为PVP1E,在脂质体介导下将PVP1E质粒转染BHK-21细胞,Western Blotting试验证实VP1基因成功表达,经DAPI细胞核染色后在共聚焦显微镜下观察VP1亚细胞定位。结果表明本研究预测了VP1基因的二、三级结构,其在BHK-21细胞中呈现以细胞核为主的弥散性分布,VP1基因亚细胞定位及结构预测为进一步深入探究AsiaⅠ型FMDV VP1结构和功能提供丰富的资料。

关键词： AsiaⅠ型FMDV VP1基因结构预测亚细胞定位

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口蹄疫疫苗库的发展

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中国预防兽医学报 2012年第11期34卷 929-932页

作者：郎一飞高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所、国家口蹄疫参考实验室、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的烈性传染病，患病动物的口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水泡，水泡破溃后形成烂斑。由于该病传染性强，造成的经济损失严重，世界动物卫生组织（OIE）将该... 详细信息

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的烈性传染病，患病动物的口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水泡，水泡破溃后形成烂斑。由于该病传染性强，造成的经济损失严重，世界动物卫生组织（OIE）将该病列为实时通报的传染病之一。

关键词：口蹄疫世界动物卫生组织烈性传染病苗库偶蹄动物 FMD病毒经济损失传染性

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牛α-IFN及FMDV P12A3C双表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达

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生物技术通报 2012年第2期28卷 80-84页

作者：杨彬兰喜李宝玉殷相平李学瑞柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从口蹄疫病毒Asia I/Jiangsu毒株的细胞毒中提取总RNA,通过RT-PCR方法分别获得FMDV的P12A及3C基因;同时以pMD18-T-α-IFN质粒为模板,PCR扩增得到α-IFN基因。将α-IFN基因及FMDV P12A及3C基因连接至双启动子表达载体pBudCE4.1上,构建成... 详细信息

从口蹄疫病毒Asia I/Jiangsu毒株的细胞毒中提取总RNA,通过RT-PCR方法分别获得FMDV的P12A及3C基因;同时以pMD18-T-α-IFN质粒为模板,PCR扩增得到α-IFN基因。将α-IFN基因及FMDV P12A及3C基因连接至双启动子表达载体pBudCE4.1上,构建成双效表达质粒pBudCE4.1-α-IFN-P12A3C,经电泳、PCR、双酶切和DNA测序鉴定表明双效质粒载体构建成功。用此重组质粒转染BHK-21细胞后并对其表达情况进行检测,表明该双表达质粒在BHK-21细胞中能够成功表达。以此重组质粒免疫乳鼠后12 h,按100 TCID50/0.1 mL的量进行攻毒,结果发现该质粒能够抑制病毒的增殖,对乳鼠有一定的保护作用。结果表明成功构建了牛α-IFN及FMDV P12A3C组合基因双表达载体,为进一步研究口蹄疫基因疫苗提供前期基础。

关键词：口蹄疫病毒 P12A基因 3C基因 α-干扰素 pBudCE4.1载体

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