检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2013年第11期43卷 1101-1108页

作者：韩成昊李平花白兴文包慧芳卢曾军孙普曹轶梅刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为探寻口蹄疫病毒(FMDV)非编码区对病毒生命周期乃至生物学特性的影响,以O/HN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,利用融合PCR分别构建了含持续感染毒株O/CHN/Mya98/33-P 3′非编码区、5′非编码区及3′非编码区和5′非编码区嵌合的3株全... 详细信息

为探寻口蹄疫病毒(FMDV)非编码区对病毒生命周期乃至生物学特性的影响,以O/HN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,利用融合PCR分别构建了含持续感染毒株O/CHN/Mya98/33-P 3′非编码区、5′非编码区及3′非编码区和5′非编码区嵌合的3株全长cDNA克隆。3个全长克隆经线性化后分别在脂质体介导下转染表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞,转染后第60小时均出现明显的致细胞病变效应。对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光分析,结果表明成功拯救到3个嵌合的FMDV。拯救的病毒对乳鼠致病力和细胞感染力的比较分析结果显示,发现分别替换两端非编码区会导致病毒细胞感染力和乳鼠致病力下降,而同时替换非编码区的病毒则无明显变化。这些嵌合病毒的成功拯救为进一步阐述非编码区的功能奠定了基础。

关键词：型内嵌合非编码区口蹄疫病毒生物学特性

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Al(OH)_3、ISA206及Poly(I:C)免疫佐剂对灭活口蹄疫140S抗原免疫效果的影响

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免疫学杂志 2013年第11期29卷 927-932页

作者：周春雪魏巍李冬韩成昊李艳丽刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

目的选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力。方法以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄... 详细信息

目的选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力。方法以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄疫完整病毒粒子抗原。在蔗糖密度梯度定量后分别与Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂配合制作口蹄疫灭活疫苗。疫苗经肌肉注射免疫Balb/c小鼠,通过检测抗体效价评价机体产生的体液免疫反应。通过检测体外刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后产生的细胞因子以及淋巴细胞增殖实验评价机体产生的细胞免疫反应。结果 ISA206口蹄疫灭活苗和Poly(I:C)口蹄疫灭活苗诱导小鼠产生的抗体效价较高;通过体外刺激实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在抗原刺激后,产生的IFN-γ和IL-4含量最高;通过淋巴细胞增殖实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力最强(P<0.05)。结论ISA206佐剂在配合灭活口蹄疫140S完整病毒粒子进行免疫时所表现的免疫效力最高。

关键词： Poly(I C) Al(OH)3 ISA206 口蹄疫

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Dpl蛋白和PrP蛋白与Flotillins蛋白相互作用的酵母双杂交技术分析

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中国兽医科学 2013年第3期43卷 233-237页

作者：马俊俊刘永生丁耀忠周建华高宗良陈豪泰马丽娜张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了确定Dpl蛋白和PrP是否与Flotillins蛋白相互作用,采用RT-PCR方法从牛睾丸组织中扩增出Dpl基因,从牛脑组织中扩增出PrP、Flotillins基因,应用酵母双杂交技术构建诱饵载体pGBKT7-Flo-tillins,捕获载体pGADT7-Dpl、pGADT7-PrP,然后验证... 详细信息

为了确定Dpl蛋白和PrP是否与Flotillins蛋白相互作用,采用RT-PCR方法从牛睾丸组织中扩增出Dpl基因,从牛脑组织中扩增出PrP、Flotillins基因,应用酵母双杂交技术构建诱饵载体pGBKT7-Flo-tillins,捕获载体pGADT7-Dpl、pGADT7-PrP,然后验证Dpl蛋白和PrP蛋白是否与Flotillins蛋白相互作用。结果显示,成功构建了Flotillins蛋白的诱饵载体,Dpl和PrP蛋白的捕获载体;诱饵载体和捕获载体对报告基因无自激活作用,对酵母细胞无毒性。证明PrP与Flotillins在酵母水平有相互作用;Dpl与Flotil-lins在酵母水平没有相互作用。

关键词：疯牛病 Flotillins蛋白 Dpl蛋白酵母双杂交

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商品化口蹄疫疫苗与猪瘟疫苗对小鼠免疫效力的研究

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 572-577页

作者：周春雪刘艳红李冬刘在新祁淑云中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过研究口蹄疫疫苗和猪瘟疫苗在小鼠模型上免疫后的免疫效力变化,以便探讨共免疫两种疫苗与单独免疫其中一种疫苗对小鼠免疫应答作用的差异。将小鼠分成以下几个免疫组进行接种或注射:①口蹄疫疫苗单免组;②猪瘟疫苗单免组;③口蹄疫疫... 详细信息

通过研究口蹄疫疫苗和猪瘟疫苗在小鼠模型上免疫后的免疫效力变化,以便探讨共免疫两种疫苗与单独免疫其中一种疫苗对小鼠免疫应答作用的差异。将小鼠分成以下几个免疫组进行接种或注射:①口蹄疫疫苗单免组;②猪瘟疫苗单免组;③口蹄疫疫苗与猪瘟疫苗共免组;④PBS注射组。二免后第7天采集血液,分离血清,检测抗体效价及血清中IFN-γ、IL-4的质量浓度;二免后第7天分离小鼠脾淋巴细胞,分别进行淋巴细胞增殖试验及对脾淋巴细胞CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞亚群分化进行检测。结果,共免疫两种疫苗的小鼠产生的口蹄疫抗体效价比单独免疫口蹄疫疫苗的要低,但是产生的猪瘟抗体效价比单独免疫猪瘟疫苗的要高很多;共免组产生的INF-γ比单免口蹄疫疫苗组的要低,但是比单免猪瘟疫苗组的要高。淋巴细胞增殖试验及流式细胞仪检测的结果表明,共免疫口蹄疫疫苗和猪瘟疫苗对小鼠脾淋巴细胞再次识别特定抗原的应答能力及T细胞亚群分化均具有重要影响。结果表明,共免疫这两种疫苗对小鼠体液免疫反应影响较小,甚至有促进作用,但是细胞免疫应答受到了抑制。

关键词：共免疫口蹄疫猪瘟小鼠

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新型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株全长cDNA克隆的构建与分析

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中国兽医科学 2013年第5期43卷 458-465页

作者：王松豪郑海学杨帆曹伟军刘芳张艳刘华南郭建宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒株的全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株(EF635006)和经典CH-1a株(AY032626)全基因组序列设计并合成特异引物,进而用RT-PCR分6段扩增了H... 详细信息

为了获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒株的全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株(EF635006)和经典CH-1a株(AY032626)全基因组序列设计并合成特异引物,进而用RT-PCR分6段扩增了HP-PRRSV弱毒株的全基因组。将扩增的各个cDNA重叠片段分别克隆到pMD20-T载体中,建立了PRRSV弱毒株的初级cDNA克隆,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择特异的酶切位点,将各个亚克隆产物逐段亚克隆入经过改造的低拷贝pOK12载体中,通过引入MluⅠ和EcoRⅠ酶切位点将聚合酶Ⅱ、Ⅰ和T7启动子序列及榔头锤酶基因置于病毒基因组的5′端,引入NotⅠ和FseⅠ将聚合酶Ⅱ、Ⅰ终止子序列及戊型肝炎病毒核酶基因置于病毒基因组的3′端,结果得到了病毒基因组全长cDNA克隆ppAPRRSVOK12。测序结果表明,该毒株基因组全长15 319bp[不包括poly(A)尾];全基因序列比对结果显示,该毒株属于北美洲型毒株,与HuN4的同源性高达99.5%。测序及酶切鉴定结果证实,HP-PRRSV弱毒株基因组全长cDNA克隆已构建成功。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组全长cDNA克隆感染性分子克隆序列分析

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三株重组VP1基因的泛亚1系口蹄疫病毒的蚀斑特性

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中国兽医科学 2013年第8期43卷 795-799页

作者：魏蔚白兴文包慧芳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用反向遗传学技术,以PCR和盒式替换方法构建了3株含泛亚1系病毒的VP1基因序列的感染性克隆,转染BHK-21细胞,拯救3株口蹄疫病毒,进行蚀斑形成试验,并比较三者之间的差异。结果显示,在BHK-21细胞上,被拯救的病毒r-HK和r-ZheJ形成大斑,... 详细信息

利用反向遗传学技术,以PCR和盒式替换方法构建了3株含泛亚1系病毒的VP1基因序列的感染性克隆,转染BHK-21细胞,拯救3株口蹄疫病毒,进行蚀斑形成试验,并比较三者之间的差异。结果显示,在BHK-21细胞上,被拯救的病毒r-HK和r-ZheJ形成大斑,而被拯救的病毒r-NX则形成大小斑兼有的混合斑;在CHO-K1细胞上,r-HK和r-ZheJ不能形成蚀斑,而r-NX却能形成蚀斑。证实r-NX可以利用HS受体,而r-HK和r-ZheJ则不能利用HS受体,推测r-NX在BHK-21细胞上形成的小斑可能与病毒利用二类受体HS有关。

关键词：口蹄疫病毒 VP1蛋白蚀斑硫酸乙酰肝素

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羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达

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中国人兽共患病学报 2013年第10期29卷 951-954页

作者：张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21)... 详细信息

目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过间接免疫荧光试验(IFA)验证B2L基因表达。结果扩增出目的片段经序列测定和分析证明为ORFV B2L基因,经双酶切鉴定和序列测定分析证明了pVAX1-B2L质粒的正确性,IFA证实目的基因在BHK-21细胞中能够瞬时表达。结论为进一步研制基于羊口疮病毒B2L基因的DNA疫苗奠定了基础。

关键词：羊口疮病毒 B2L基因真核表达 DNA疫苗

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TLR-7／8激动剂作为疫苗佐剂的最新研究进展

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免疫学杂志 2013年第6期29卷 527-530页

作者：周春雪李冬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

小分子TLR-7和TLR-8激动剂(agonist)具有很强的抗病毒与抗肿瘤性能,引起了科研人员的极大关注。最为重要的当属咪唑喹啉衍生物家族(imidazoquinoline),包括咪喹莫特(imiquimod),瑞喹莫特(resiquimod)等。通过对不同种类的咪唑喹啉衍生... 详细信息

小分子TLR-7和TLR-8激动剂(agonist)具有很强的抗病毒与抗肿瘤性能,引起了科研人员的极大关注。最为重要的当属咪唑喹啉衍生物家族(imidazoquinoline),包括咪喹莫特(imiquimod),瑞喹莫特(resiquimod)等。通过对不同种类的咪唑喹啉衍生物的研究,TLR-7和TLR-8的多种新功能被揭示了出来。TLR-7/8介导对中心转录因子的调节,可以诱发炎性细胞因子和其他调节成分的产生,从而在抗病毒与抗肿瘤的免疫反应中起到重要作用。试验证实,咪唑喹啉衍生物与蛋白质疫苗、多肽疫苗和DNA疫苗协同作用后,诱发的免疫反应倾向Th1,同时产生大量的细胞因子及趋化因子,这使得其有可能成为一种新型的疫苗佐剂。越来越多的咪唑喹啉衍生物(imidazoquinoline)被研发出来,并且应用于试验及临床当中,为寻找一种新的、简单而安全的疫苗佐剂开辟了新思路。

关键词：咪唑喹啉衍生物咪喹莫特瑞奎莫特佐剂

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牛狂犬病病毒的鉴定及N基因序列分析

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畜牧兽医学报 2013年第4期44卷 598-601页

为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征,本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象,运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定,使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗... 详细信息

为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征,本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象,运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定,使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗传进化关系。内基氏小体检测、荧光抗体试验、乳鼠脑内接种试验和特异性目的基因扩增结果显示狂犬病毒阳性,建立了基于狂犬病毒N基因的遗传进化关系树。结合临床症状确诊该病例为牛狂犬病,遗传进化分析表明本研究鉴定的狂犬病毒和2006年及2007年国内狗源狂犬病毒(DQ666306、DQ866121)、猪源狂犬病毒(DQ496219)及人源狂犬病毒(EF556197)的遗传关系较近。本文为研究牛狂犬病毒分子流行病学积累了资料。

关键词：牛狂犬病毒分离鉴定分子特征分析

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绵羊伪狂犬病病毒的鉴定及序列分析

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中国兽医科学 2013年第3期43卷 221-224页

作者：张克山刘永杰孔汉金尚佑军逯忠新田宏尹双辉刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为确诊疑似绵羊伪狂犬病、分析其病原gC基因序列特征,以山东某羊场疑似伪狂犬病病料为对象,经负染后进行电镜观察,PCR扩增特异性gC基因并对其进行序列测定及遗传进化关系分析。电镜下观察可见病毒样粒子,病料中扩增出特异性目的基因片段... 详细信息

为确诊疑似绵羊伪狂犬病、分析其病原gC基因序列特征,以山东某羊场疑似伪狂犬病病料为对象,经负染后进行电镜观察,PCR扩增特异性gC基因并对其进行序列测定及遗传进化关系分析。电镜下观察可见病毒样粒子,病料中扩增出特异性目的基因片段,序列测定结果显示扩增的目的基因为伪狂犬病病毒(PRV)gC基因片段。遗传进化分析表明该病毒和1998年分离于南美洲阿根廷的猪伪狂犬病病毒遗传关系最近,同属于一个进化分支。流行病学及临床症状和实验室检测结果表明该病例为绵羊伪狂犬病病毒引起,为国内进行羊PRV分子流行病学研究积累了资料。

关键词：绵羊伪狂犬病病毒鉴定序列分析

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