检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2011年第5期27卷 418-422页

作者：张奕强刘文倩刘永生王印姚学萍张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046 四川农业大学动物医学院动物检疫实验室雅安625014

目的观察猪链球菌(Streptococcus suis)感染小鼠后的临床、病理变化,为将小鼠作为实验室研究猪链球菌的实验动物提供依据。方法用猪链球菌活菌经腹腔注射感染小白鼠,并做阴性对照,观察其临床症状,剖解病死小鼠,制作病理切片观察病理变... 详细信息

目的观察猪链球菌(Streptococcus suis)感染小鼠后的临床、病理变化,为将小鼠作为实验室研究猪链球菌的实验动物提供依据。方法用猪链球菌活菌经腹腔注射感染小白鼠,并做阴性对照,观察其临床症状,剖解病死小鼠,制作病理切片观察病理变化。并对病死小鼠做病原分离,通过培养特性鉴定、生化试验以及PCR鉴定确定其为猪链球菌。结果小鼠确由感染猪链球菌而致死,体内各组织、器官均产生典型的败血症病变。结论小鼠对猪链球菌易感,能够作为实验室研究猪链球菌良好的实验动物。

关键词：猪链球菌 BALB/c小鼠模型病理变化

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猪瘟病毒复合多表位抗原基因的克隆表达及其免疫学特性

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中国兽医科学 2011年第11期41卷 1144-1149页

作者：侯相民田宏吴锦艳陈妍尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 兰州交通大学化学与生物工程学院甘肃兰州730070

为研究猪瘟病毒多表位疫苗,参照GenBank及文献中已发表的猪瘟病毒抗原表位,结合计算机分析软件进行优化和组合。将重组的多表位基因BT23人工合成克隆至pMD18-T质粒中,利用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切并回收BT23基因,将BT23基因片段亚克隆插入p... 详细信息

为研究猪瘟病毒多表位疫苗,参照GenBank及文献中已发表的猪瘟病毒抗原表位,结合计算机分析软件进行优化和组合。将重组的多表位基因BT23人工合成克隆至pMD18-T质粒中,利用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切并回收BT23基因,将BT23基因片段亚克隆插入pGEX-6P-1表达载体中,构建了猪瘟病毒复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT23,经酶切和测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3),并进行了IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,以终浓度为0.9mmol/L的IPTG进行诱导,8h后表达量最高,表达产物为融合蛋白,并且以包涵体形式存在,分子质量约36ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western-blot检测结果表明,表达的融合蛋白能与猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应,说明表达产物具有良好的反应原性。免疫攻毒试验结果表明,复合多表位融合蛋白具有免疫保护作用,这为应用该融合蛋白制备猪瘟病毒免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗的研究奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒复合多表位抗原基因融合表达活性分析

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重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因

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生物技术通报 2011年第7期27卷 186-190页

作者：张念章储岳峰赵萍高鹏程贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown。通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到... 详细信息

利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown。通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到Hup-kan-Hdown的量最多。将此外源打靶基因的两端引入PstI和SacI酶切位点,克隆至具有迁移作用的自杀质粒pDS132,构建了可在大肠杆菌***10-λpir中稳定遗传的打靶载体,为下一步建立副猪嗜血杆菌的高效基因打靶系统奠定基础。

关键词：副猪嗜血杆菌重叠PCR 外源打靶基因

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绵羊痘病毒RPO30基因的克隆及序列分析

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中国农学通报 2011年第7期27卷 304-308页

作者：赵志荀吴国华颜新敏李健朱海霞孙晓林张强甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

选择羊痘病毒RNA聚合酶RPO30进行分析,为进行RNAi羊痘病毒研究,进行目的基因的初步筛选。PCR扩增RPO30基因,连入pMD18-T simple载体并转化DH5a大肠杆菌。经蓝白斑筛选挑选白斑制备质粒,经双酶切、PCR及测序鉴定。结果成功克隆了RPO30基... 详细信息

选择羊痘病毒RNA聚合酶RPO30进行分析,为进行RNAi羊痘病毒研究,进行目的基因的初步筛选。PCR扩增RPO30基因,连入pMD18-T simple载体并转化DH5a大肠杆菌。经蓝白斑筛选挑选白斑制备质粒,经双酶切、PCR及测序鉴定。结果成功克隆了RPO30基因,克隆的SSPV RPO30基因ORF为585bp,编码193个氨基酸,阅读框内有一个HindIII酶切位点,测序结果与Gen Bank数据库中不同痘病毒毒株之间同源性存在着明显区别。进一步经过生物学软件分析表明RPO30蛋白质氨基酸4—12、18—26、50—61、68—92,176—190位之间区域形成活性中心的可能性较大,选择这些区域进行作用可能会造成该基因产物酶的失活,从而高效抑制病毒的复制。

关键词：绵羊痘病毒 RPO30基因序列分析生物信息学

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Asia 1型口蹄疫病毒前导蛋白(L^(pro))亚细胞定位

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中国兽医学报 2011年第5期31卷 687-691页

作者：刘永杰张克山尚佑军杨顺利卢国栋刘湘涛吴润甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染B... 详细信息

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染BHK-21细胞,用荧光显微镜观察和Western blotting方法检测目的基因的表达,经碘化丙啶(PI)染色后在激光共聚焦显微镜下观察Lpro的亚细胞定位。结果表明,成功构建重组表达质粒pEGFP-L;FMDV L基因在BHK-21细胞中得到表达;Western blotting证实表达的Lpro具有反应活性;激光共聚焦显微镜观察发现Lpro在BHK-21细胞中呈弥散性分布。

关键词： Asia1型口蹄疫病毒前导蛋白亚细胞定位

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狂犬病毒CVS株G基因和N基因共表达重组腺病毒载体的构建

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浙江农业学报 2011年第3期23卷 489-494页

作者：李江涛殷相平张金卫丁农柳纪省湖州市农业科学研究院浙江湖州313000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

通过引入内部核糖体进入位点序列,构建狂犬病毒G基因和N基因共表达的腺病毒载体。通过RT-PCR方法扩增得到RVG基因、N基因。N基因先亚克隆入pIRES质粒;G基因经KpnI和M luI,pIRES-N质粒经M luI、NotI双酶切,回收目的基因后与经KpnI和NotI... 详细信息

通过引入内部核糖体进入位点序列,构建狂犬病毒G基因和N基因共表达的腺病毒载体。通过RT-PCR方法扩增得到RVG基因、N基因。N基因先亚克隆入pIRES质粒;G基因经KpnI和M luI,pIRES-N质粒经M luI、NotI双酶切,回收目的基因后与经KpnI和NotI双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在B J5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒,RT-PCR法检测狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段。该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法可检测到糖蛋白和核蛋白基因片段。试验成功构建了G和N双基因共表达重组腺病毒载体,为狂犬病活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：狂犬病病毒G基因 N基因内部核糖体进入位点序列重组腺病毒

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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化

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湖北农业科学 2011年第15期50卷 3116-3119页

作者：郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药重点开放实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,... 详细信息

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。

关键词：猪戊型肝炎病毒衣壳蛋白 CP239片段原核表达

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沙门菌载体重组疫苗的研究进展

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中国兽医杂志 2011年第6期47卷 54-56页

作者：马延滨高闪电丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

目前,大多数疫苗都采用皮下或肌肉注射,可以诱导有效的血清免疫,但通常无法诱导黏膜抗体（sIgA）的产生。皮下或肌肉注射导致动物产生较大的应激反应,采食量下降,影响动物生长繁殖。实际生产中的不规范免疫操作可能导致病原微生物在个... 详细信息

目前,大多数疫苗都采用皮下或肌肉注射,可以诱导有效的血清免疫,但通常无法诱导黏膜抗体（sIgA）的产生。皮下或肌肉注射导致动物产生较大的应激反应,采食量下降,影响动物生长繁殖。实际生产中的不规范免疫操作可能导致病原微生物在个体问的人为传播而引发疾病。

关键词：重组疫苗沙门菌载体肌肉注射免疫操作病原微生物应激反应生长繁殖

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PRRSV-GSLZ-1/2009细胞毒和组织毒致病特征的比较

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微生物学通报 2011年第1期38卷 63-69页

作者：杜平尚佑军刘学荣董文教贺延玉黄银君牟克斌中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室围家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学研究测试中心甘肃兰州730070

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)野毒株在细胞适应中的遗传变异与其致病性的关系。在进行遗传变异分析后,将GSLZ-1/2009细胞适应毒和组织毒同时接种36日龄健康仔猪,对感染... 详细信息

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)野毒株在细胞适应中的遗传变异与其致病性的关系。在进行遗传变异分析后,将GSLZ-1/2009细胞适应毒和组织毒同时接种36日龄健康仔猪,对感染后的临床症状、体征变化、抗体及炎性因子水平进行了实时监测和动力学分析,并对组织病变进行了显微观察。结果显示:在细胞适应过程中致病相关基因并未发生任何突变,但细胞适应株所诱发的抗体及炎症因子反应均明显较组织毒弱,且所造成的病理损伤也比较轻微。表明PRRSV野毒株在细胞适应过程中毒力会减弱,而毒株的弱化可能由遗传变异之外的因素决定。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒特性致病特征

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牛叠朊编码基因缺失突变体的构建及在大肠杆菌中的表达

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中国兽医学报 2011年第10期31卷 1442-1448页

作者：杨生海殷宏刘永生马艳平丁耀忠孙彩琴丁小丽张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

本实验室已制备出多株针对牛叠朊的单克隆抗体,为充分鉴定这些单克隆抗体针对的抗原表位,通过基因克隆表达的策略获取牛叠朊基因缺失突变体的重组蛋白,以期为单克隆抗体的表位鉴定提供物质材料。经过对牛成熟叠朊编码基因及预测蛋白结... 详细信息

本实验室已制备出多株针对牛叠朊的单克隆抗体,为充分鉴定这些单克隆抗体针对的抗原表位,通过基因克隆表达的策略获取牛叠朊基因缺失突变体的重组蛋白,以期为单克隆抗体的表位鉴定提供物质材料。经过对牛成熟叠朊编码基因及预测蛋白结构特征的分析,设计表达9个缺失突变体的引物。以PCR扩增出叠朊基因的缺失突变体,与pET-30a(+)表达载体连接后转入*** DH5α中,经双酶切和测序鉴定后将重组质粒转入***109和*** BL21表达宿主菌中,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达产物的相对分子质量、相对表达量和反应原性。结果表明,成功构建了9个牛叠朊编码基因的缺失突变体,通过IPTG的诱导表达,其中有6个缺失突变体被大肠杆菌高效表达,并且具有较好的反应原性,这为其单克隆抗体表位的进一步鉴定奠定了物质基础。

关键词：牛叠朊缺失突变体免疫印迹酶联免疫吸附分析

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