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壳聚糖微球作为鼻黏膜免疫载体的研究进展

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中国人兽共患病学报 2010年第12期26卷 1163-1166页

作者：王吉玮潘丽张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

黏膜免疫是动物机体防御传染病的第一道屏障,而鼻黏膜是许多病原微生物进入机体的必经之路。鼻黏膜免疫与局部或全身性免疫相比,有许多优点,例如鼻黏膜免疫无刺激、无痛感、为非侵入性,且不需要严格的无菌处理。[第一段]

关键词：鼻黏膜免疫壳聚糖微球免疫载体机体防御病原微生物全身性免疫非侵入性无菌处理

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1—2月龄荷斯坦奶牛不同组织中FMDV受体亚基αv、β3、β6 mRNA转录水平的相对定量研究

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中国农业科学 2010年第3期43卷 605-611页

作者：独军政常惠芸薛霜高闪电丛国正邵军军林彤包慧芳才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室

【目的】建立检测牛口蹄疫病毒(FMDV)受体亚基αv、β3、β6 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析受体αvβ3和αvβ6在不同器官组织中的转录水平。【方法】在对牛FMDV受体基因克隆和测序的基础上,设计实时定量PCR引物,以GAPDH为内... 详细信息

【目的】建立检测牛口蹄疫病毒(FMDV)受体亚基αv、β3、β6 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析受体αvβ3和αvβ6在不同器官组织中的转录水平。【方法】在对牛FMDV受体基因克隆和测序的基础上,设计实时定量PCR引物,以GAPDH为内参基因,采用△△Ct相对定量PCR方法检测分析FMDV受体亚基αv、β3、β6 mRNA在1—2月龄荷斯坦奶牛体内不同器官组织中的转录表达谱。【结果】αvβ3在荷斯坦奶牛24种组织中均有不同程度的转录表达;αvβ6在甲状腺、硬腭、鼻内皮、喉头、肺、食管、肾、后蹄冠状带等组织表达量较高,在唇、舌皮、软腭、气管、心脏、瘤胃、直肠、前蹄冠状带等组织转录表达量适中,在唾液腺、下颌淋巴结、肝、脾、肌肉等组织未检测到表达;αvβ6在牛体内的表达分布与FMDV组织嗜性基本一致,αvβ6受体可能是决定FMDV组织嗜性的主要功能受体,αvβ3的组织分布似乎与FMDV组织嗜性无关,但不能排除αvβ3在病毒感染过程中的作用。【结论】建立了检测FMDV受体亚基mRNA在不同器官组织中表达水平的相对实时定量PCR方法。

关键词： FMDV受体 mRNA转录水平 SYBR Green I 荷斯坦奶牛

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口蹄疫病毒O型与A型编码基因的密码子使用

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中国人兽共患病学报 2010年第5期26卷 442-446页

作者：周建华刘永生陈豪泰马丽娜张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

对于54个编码口蹄疫病毒O型和A型多聚蛋白质编码序列密码子使用的方差分析表明,这两种血清型多聚蛋白质的密码子(GCC、GCG、AGA、CGG、GGC、GGU、CAC、CAU、AUA、AUU、CUG、CCC、AGC、UCU、ACA、ACC、ACG、ACU)使用偏性有显著区别。然而... 详细信息

对于54个编码口蹄疫病毒O型和A型多聚蛋白质编码序列密码子使用的方差分析表明,这两种血清型多聚蛋白质的密码子(GCC、GCG、AGA、CGG、GGC、GGU、CAC、CAU、AUA、AUU、CUG、CCC、AGC、UCU、ACA、ACC、ACG、ACU)使用偏性有显著区别。然而,通过对氨基酸使用偏性的分析,我们只是找出Ala、Arg、Leu、Phe、Ser在O和A型多聚蛋白质中的使用偏性有显著差异。由此我们发现,密码子的使用偏性比氨基酸使用偏性能提供更多的信息。通过对A型和O型的密码子使用整体性分析,两者密码子使用偏性的相似性可能与tRNA丰度相关的。这些密码子使用偏性的内在联系表明口蹄疫病毒A型和O型的基因组变异所涉及到同义密码子的选择上可能存在着某种选择机制。

关键词：口蹄疫病毒密码子使用密码子相对使用概率氨基酸使用相对概率方差分析

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RDD基序对口蹄疫Asia1型毒株感染力的影响

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科学通报 2010年第14期55卷 1370-1375页

作者：郑海学郭建宏靳野尚佑军田宏杨亚民刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

不同型口蹄疫病毒1D蛋白的βG和βH链之间都含有一个高度保守的RGD基序,其结合细胞受体,起始病毒感染.但本文通过对Asia1型FMDV的1D序列分析证实,田间毒株含有RGD和RDD基序(RGD中的G突变为D)的两种类型毒株.通过反向遗传技术制备了分别... 详细信息

不同型口蹄疫病毒1D蛋白的βG和βH链之间都含有一个高度保守的RGD基序,其结合细胞受体,起始病毒感染.但本文通过对Asia1型FMDV的1D序列分析证实,田间毒株含有RGD和RDD基序(RGD中的G突变为D)的两种类型毒株.通过反向遗传技术制备了分别含有RGD和RDD基序的两种病毒,测定其生物学特性,并通过细胞感染力和乳鼠致病力比较这两种病毒感染力的差别.结果表明,含有RGD和RDD的毒株都具有感染性,含有RDD毒株的细胞感染力和乳鼠致病力比含RGD的高10倍左右,为进一步阐明RDD基序Asia1毒株的感染机制的分子基础奠定必要的基础.

关键词：口蹄疫病毒 RGD 整联蛋白细胞结合位点反向遗传学

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口蹄疫病毒3D聚合酶多克隆抗体的制备与特性分析

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中国人兽共患病学报 2010年第1期26卷 6-9页

作者：张昱王永录张永光方玉珍潘丽蒋守田吕建亮刘力宽张中旺张淑刚李正丰杜进鑫中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的表达口蹄疫病毒3D聚合酶,并制备兔抗3D多克隆抗体。方法采用PCR方法扩增口蹄疫病毒(FM-DV)3D聚合酶基因,经BamHⅠ和NdeⅠ双酶切后插入pET-30a(+)原核表达载体,构建的pET-3D重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SD... 详细信息

目的表达口蹄疫病毒3D聚合酶,并制备兔抗3D多克隆抗体。方法采用PCR方法扩增口蹄疫病毒(FM-DV)3D聚合酶基因,经BamHⅠ和NdeⅠ双酶切后插入pET-30a(+)原核表达载体,构建的pET-3D重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化蛋白免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,以Western blot鉴定抗体特异性,并以间接ELISA方法测定其效价。结果SDS-PAGE电泳分析显示,表达的目的蛋白约为46ku,与预期结果相符,制备的多克隆抗体效价达1∶8000以上,且具有较高的特异性。结论制备了具有高亲和性和特异性的3D聚合酶多克隆抗体,为3D聚合酶的生物学功能和抗原表位研究奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 3D聚合酶多克隆抗体

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猪膜联蛋白A2多克隆抗体的制备、亲和纯化与鉴定

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畜牧兽医学报 2010年第11期41卷 1502-1509页

作者：陈江涛王光祥吉艳红尚佑军刘艳红刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

本研究旨在制备并亲和纯化兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。通过PCR从质粒pA2-EGFP中将编码猪膜联蛋白A2与增强型绿色荧光蛋白融合基因(Annex A2-EGFP)亚克隆到pET-30a(+),构建了原核表达质粒p30a/AE,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导... 详细信息

本研究旨在制备并亲和纯化兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。通过PCR从质粒pA2-EGFP中将编码猪膜联蛋白A2与增强型绿色荧光蛋白融合基因(Annex A2-EGFP)亚克隆到pET-30a(+),构建了原核表达质粒p30a/AE,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导以包涵体形式表达了猪ANNXA2-EGFP融合蛋白,用Ni-Resin HP树脂对表达的目的蛋白进行亲和纯化。用纯化的ANNXA2-EGFP融合蛋白免疫兔,制备兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。将以前纯化的猪可溶性GST-ANNXA2融合蛋白偶联NHS活化琼脂糖凝胶FF,亲和纯化多克隆抗体。用GST-ANNXA2亲和纯化的多抗效价达到1∶12800,Western blot和免疫组化结果证实具有高特异性。制备的高效价和高特异性兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体,为进一步研究膜联蛋白A2在病毒感染中的作用奠定了基础。

关键词：猪膜联蛋白A2 多克隆抗体亲和纯化

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羊痘病毒3个结构蛋白的克隆与抗原性分析

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 889-891页

作者：颜新敏吴国华李健朱海霞朱彩珠张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表... 详细信息

为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表达产物经western blot分析,羊痘病毒特异性血清只能识别融合蛋白ORF57和ORF95,不能识别ORF117。本研究为重组诊断抗原的筛选和亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词： ORF57 ORF95 ORF117 原核表达抗原性分析

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羊痘病毒G蛋白偶联趋化因子受体基因序列分析及其在鉴别病毒种属上的作用

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中国预防兽医学报 2010年第2期32卷 154-156页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

为明确G蛋白偶联趋化因子受体(GpCR)基因在羊痘病毒种属鉴别中的作用,本实验对3株绵羊痘病毒(SPV)和2株山羊痘病毒(GPV)弱毒疫苗株的GpCR进行了克隆测序,并与GenBank中登录的21个羊痘病毒属成员相关序列进行了比对。核酸同源性分析表明... 详细信息

为明确G蛋白偶联趋化因子受体(GpCR)基因在羊痘病毒种属鉴别中的作用,本实验对3株绵羊痘病毒(SPV)和2株山羊痘病毒(GPV)弱毒疫苗株的GpCR进行了克隆测序,并与GenBank中登录的21个羊痘病毒属成员相关序列进行了比对。核酸同源性分析表明SPV不同毒株之间同源性达到99.5%～99.8%;GPV之间同源性达到98.8%～99.8%;GenBank上公布的疙瘩皮肤病病毒(LSDV)之间同源性达到100%。而GPV、SPV和皮肤疙瘩病毒两两比对的同源性仅达到94.2%～95.9%。对GpCR的系统进化树分析可以看出GPV、SPV和LSDV分别位于不同的进化分枝上,而GPV与LSDV具有更近的亲缘关系。GpCR基因在鉴别GPV属和流行病学分析中具有重要价值。

关键词：羊痘病毒 G蛋白偶联趋化因子受体序列分析种属鉴别

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重组PrP102-242在COS-1中的表达及表达产物的检测

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中国人兽共患病学报 2010年第12期26卷 1097-1100页

作者：丁耀忠刘永生陈浩泰刘文倩张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

目的重组的PrP102-242在COS-1细胞中的稳定表达以及表达产物的检测。方法重组表达载体pCI-PrP102-242转染COS-1细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot检测目的蛋白的表达。结果... 详细信息

目的重组的PrP102-242在COS-1细胞中的稳定表达以及表达产物的检测。方法重组表达载体pCI-PrP102-242转染COS-1细胞后,经不同浓度的G418筛选后获得稳定的细胞系,然后用间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot检测目的蛋白的表达。结果间接免疫荧光、间接ELISA和Western blot检测到目的蛋白在COS-1细胞中的表达。结论目的蛋白PrP102-242在COS-1细胞中的成功表达为下一步研究PrPc的结构和功能奠定了基础。

关键词：朊蛋白 COS-1细胞间接免疫荧光检测技术

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口蹄疫核酸疫苗研究进展

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中国人兽共患病学报 2010年第9期26卷 874-878页

作者：王刚潘丽张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫(Foot-and-mouth-disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth-disease virus,FMDV)引起的危害严重的家畜传染病之一。由于传统疫苗的安全性、免疫保护期短、多次免疫、血清型间无交叉保护效应,感染与免疫难以区分等缺点。因而,[... 详细信息

口蹄疫(Foot-and-mouth-disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth-disease virus,FMDV)引起的危害严重的家畜传染病之一。由于传统疫苗的安全性、免疫保护期短、多次免疫、血清型间无交叉保护效应,感染与免疫难以区分等缺点。因而,[第一段]

关键词：口蹄疫病毒核酸疫苗免疫保护传统疫苗保护效应传染病安全性血清型

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