检索结果-内蒙古大学图书馆

华北农学报 2009年第B12期24卷 225-228页

作者：田宏吴锦艳尹双辉尚佑军郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

鉴于猪瘟病毒不能使家兔发病,但能使之产生免疫原性,而且猪瘟兔化弱度苗能在兔体的定型热反应。本研究选用家兔为试验模型,将自制的亚单位疫苗用弗氏佐剂乳化后免疫家兔,持续一定的免疫周期后,用猪瘟活疫苗(II)攻击免疫及对照试验家兔... 详细信息

鉴于猪瘟病毒不能使家兔发病,但能使之产生免疫原性,而且猪瘟兔化弱度苗能在兔体的定型热反应。本研究选用家兔为试验模型,将自制的亚单位疫苗用弗氏佐剂乳化后免疫家兔,持续一定的免疫周期后,用猪瘟活疫苗(II)攻击免疫及对照试验家兔。根据T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及攻毒保护试验对所制备的抗原进行了全面的评价。结果表明,该免疫原具有良好的免疫原性,而且能保护免疫家兔为4/4。可以进行下一步的开发和利用价值。以期该疫苗能为猪瘟的防治做出贡献。

关键词：猪瘟病毒亚单位疫苗 E2蛋白免疫试验

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PLGA纳米/微球作为核酸载体的研究进展

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微生物学通报 2009年第12期36卷 1901-1908页

作者：王刚潘丽张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

生物可降解材料[poly(lactide-co-glycolide acid),PLGA]颗粒在持续释放和定位递送各种药剂包括核酸有很大的研究和应用价值。本文综述了PLGA作为核酸载体的制备及其用于基因载体和疫苗佐剂的研究。

关键词： PLGA DNA 基因治疗疫苗佐剂

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口蹄疫病毒单链抗体基因的构建及其推导蛋白三维结构的分子模拟

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中国兽医科学 2009年第12期39卷 1035-1040页

作者：刘涛周广青马军武林密祁淑芸冯霞马明仁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性... 详细信息

用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性最高分别可达81.0%和93.0%,且在序列中有连接VH及VL的柔性接头(Gly4Ser)3。用EXPASY软件包预测了推导蛋白的特性。运用Swiss-pdb viewer软件的SWISS-Model处理器对构建的单链抗体基因推导的蛋白序列进行了三维结构的分子模拟。拉马钱德兰图证明,所模拟的单链抗体的三维结构较为合理。

关键词：口蹄疫病毒单链抗体重叠聚合酶链反应序列分析三维结构分子模拟

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FMDV Asia1/HeB病毒株结构蛋白基因的克隆测序及B细胞抗原表位预测

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华北农学报 2009年第4期24卷 57-63页

作者：张中旺张永光王永录潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮周鹏张昱张淑刚杜进鑫李正丰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

对口蹄疫病毒Asia1/HeB株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。采用DNAStar Protean软件对P1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行分析,综合预测其B细胞表位分布。结果表明,FMDV Asia I/HeB株P1基因... 详细信息

对口蹄疫病毒Asia1/HeB株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。采用DNAStar Protean软件对P1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行分析,综合预测其B细胞表位分布。结果表明,FMDV Asia I/HeB株P1基因长2199 bp,包含完整的开放阅读框,编码733个氨基酸,其中VP1长633 bp,编码211个氨基酸,VP2长654 bp,编码218个氨基酸,VP3长657 bp,编码219个氨基酸,VP4长255 bp,编码85个氨基酸。P1结构蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的β片层结构和转角结构,VP1、VP2和VP3上均有多个区域为B细胞优势表位,VP4上也有少量的潜在B细胞表位。与已鉴定的B细胞表位相比较,该方法预测的结果有较高的准确度。为试验确定FMDV AsiaI/HeB株P1结构蛋白的B细胞表位和反向疫苗学设计提供了理论基础。

关键词：口蹄疫病毒结构蛋白测序 B细胞表位

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Asia1型口蹄疫病毒分离株P1基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国人兽共患病学报 2009年第10期25卷 973-976页

作者：张中旺张永光王永录潘丽张昱中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,... 详细信息

目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。抗体效价及特异性检测分别用间接ELISA和Westernblot法鉴定。结果在大肠杆菌中成功表达了分子量约为80.475kDa的P1蛋白。ELISA法检测抗血清的效价可达到1∶25600,Westernblot分析抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合。结论在大肠杆菌中成功表达了口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体,并制备了P1衣壳蛋白前体的抗血清,为进一步研究P1区结构蛋白的结构、功能以及抗原表位的确定奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1 原核表达多克隆抗体

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生物传感器及其在兽医临床检测中的应用

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 183-187页

作者：张昱王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

生物传感器技术是现代科技的前沿技术,是一种集现代生物技术与电子技术为一体的高科技产品,因其具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、成本低、能在复杂环境中进行在线连续监测,特别是高度自动化、微型化与集成化等特点,从而获得蓬勃而... 详细信息

生物传感器技术是现代科技的前沿技术,是一种集现代生物技术与电子技术为一体的高科技产品,因其具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、成本低、能在复杂环境中进行在线连续监测,特别是高度自动化、微型化与集成化等特点,从而获得蓬勃而迅速的发展,并在国民经济的各个领域如临床检测、生物医学、环境监测、食品、制药等方面得以广泛的应用。生物传感器的研究开发,[第一段]

关键词：生物传感器临床检测兽医现代生物技术环境监测传感器技术高科技产品现代科技

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O型口蹄疫病毒蛋白酶编码序列及氨基酸序列变化的分析

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中国人兽共患病学报 2009年第7期25卷 645-649页

作者：周建华丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

目的与方法从GenBank中下载了19株O型口蹄疫病毒的Lab、3C、3D基因,结合本实验室收录的FMDVOA/58Lab、3C、3D的序列信息,分析比较了三种FMDV蛋白酶(Lpro,3Cpro,3Dpol)的编码序列和氨基酸序列。结果这FMDV具有的蛋白酶的编码序列在突变... 详细信息

目的与方法从GenBank中下载了19株O型口蹄疫病毒的Lab、3C、3D基因,结合本实验室收录的FMDVOA/58Lab、3C、3D的序列信息,分析比较了三种FMDV蛋白酶(Lpro,3Cpro,3Dpol)的编码序列和氨基酸序列。结果这FMDV具有的蛋白酶的编码序列在突变上没有显著差异(P>0.05),而在氨基酸序列的突变上存在着显著差异(P<0.01)。通过多重比较发现Lpro与3Cpro和3Dpol在氨基酸突变上存在差异(P<0.05),而3Cpro和3Dpol之间突变差异不显著。结论利用Swiss-pdbViewer蛋白质分析软件模拟三种蛋白酶中各个突变热点氨基酸残基的替换,发现突变热点不影响三种蛋白酶的空间结构。这表明病毒基因组在复制过程中的突变只是FMDV变异的原始动力,而FMDV变异的方向性进化动力是感染FMDV的宿主细胞对病毒蛋白酶功能造成的选择压力。

关键词：口蹄疫病毒病毒蛋白酶突变

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含RGD受体结合位点口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株的拯救及初步鉴定

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微生物学报 2009年第7期49卷 943-948页

作者：李平花白兴文曹伟军卢曾军孙普殷宏刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

【目的】构建含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)受体结合位点口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株的全长感染性cDNA克隆。【方法】采用定点突变方法,构建Asia1型FMDV含有预期突变的全长cDNA克隆pFMDV-RGD。pFMDV-RGD重组质粒经NotI线... 详细信息

【目的】构建含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)受体结合位点口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株的全长感染性cDNA克隆。【方法】采用定点突变方法,构建Asia1型FMDV含有预期突变的全长cDNA克隆pFMDV-RGD。pFMDV-RGD重组质粒经NotI线化后,与表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,进行FMDV-RGD病毒拯救。【结果】序列测定结果表明成功构建了FMDV含有RGD受体位点的Asia1/JS/China/2005全长cDNA克隆。共转染试验获得拯救病毒,对拯救的病毒分别进行序列测定、间接免疫荧光、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析,表明成功拯救了含有RGD受体结合位点的Asia1/JS/China/2005株FMDV。【结论】该试验为进一步研究含有RGD和RDD受体结合位点2个拯救病毒生物学特性的差异奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 RGD受体结合位点感染性cDNA克隆病毒拯救

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持续感染黄牛体内口蹄疫病毒抗原性和血清中和特性分析

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畜牧兽医学报 2009年第5期40卷 697-705页

作者：沈小燕丛国正刘湘涛常惠芸林彤邵军军尚佑军谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

以口蹄疫病毒O/Akesu/58毒株感染黄牛获得口蹄疫病毒持续带毒动物,定期分离黄牛食道/咽喉部黏性液体(O/P液)和血清,研究病毒分离毒株抗原基因变异及其血清中和特性,从基因水平和血清学方面研究口蹄疫病毒持续感染分离株的抗原变异性。用... 详细信息

以口蹄疫病毒O/Akesu/58毒株感染黄牛获得口蹄疫病毒持续带毒动物,定期分离黄牛食道/咽喉部黏性液体(O/P液)和血清,研究病毒分离毒株抗原基因变异及其血清中和特性,从基因水平和血清学方面研究口蹄疫病毒持续感染分离株的抗原变异性。用RT-PCR扩增分离株抗原基因VP1,分析VP1基因变异情况;用微量血清中和试验检测了口蹄疫病毒持续感染血清与对应动物分离毒株的中和特性,并用液相阻断ELISA方法检测了口蹄疫病毒持续感染血清的抗体水平变化,并对其相关性进行了分析。结果发现所有持续感染分离毒株的VP1基因核苷酸和氨基酸同源性都在98%以上,没有碱基缺失或插入现象;与O/Akesu/58的核苷酸同源性仅为85%左右,氨基酸同源性也仅为90%。持续感染分离株VP1基因有多处位点发生突变,其中有16个核苷酸位点发生一致突变,但只有2个位点造成氨基酸突变(I 56→T、A 210→E);而持续感染分离毒株有4个核苷酸位点和3个氨基酸位点发生了颠换突变;同时证实不同时间分离株与对应血清都能相互中和,且中和作用能力随着时间延续呈下降趋势,最低为1∶80,具有较强的中和能力,这与LPB-ELISA检测结果基本一致。这说明口蹄疫病毒持续感染分离株抗原变异不显著,没有变异到动物自身血清不能识别的程度,而且分离毒株与自身动物血清具有较强的中和特性;在持续感染过程中,动物血清保持高水平抗体滴度,且持续感染毒株的分离与否与抗体水平没有显著相关性。

关键词：口蹄疫病毒抗原性持续感染血清抗体

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猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定

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畜牧兽医学报 2009年第2期40卷 213-220页

作者：常艳燕郑海学靳野王光祥尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 广东省农业科学院兽医研究所广州510640

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带... 详细信息

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠcDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pPⅠ-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定。结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾。其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段。将pPⅠFMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应。利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒。

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA克隆 Poly(C) 反向遗传学

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