检索结果-内蒙古大学图书馆

猪生殖与呼吸综合征病毒宁夏分离株ORF5基因的克隆表达及其表达产物的活性分析

中国兽医科学 2009年第9期39卷 774-778页

作者：陈妍田宏尹双辉尚佑军孙靖刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 吉林大学吉林长春130062

参考已发表的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因序列,设计合成了1对覆盖完整ORF5基因区段的引物,克隆了PRRSV NX/HY株的ORF5基因(登录号为EU600287),并进行了序列比较。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了融合表达质粒p... 详细信息

参考已发表的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因序列,设计合成了1对覆盖完整ORF5基因区段的引物,克隆了PRRSV NX/HY株的ORF5基因(登录号为EU600287),并进行了序列比较。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了融合表达质粒pGEX-6P-1-5并转化BL21,对表达蛋白进行Western-blot分析。结果表明,NX/HY分离株ORF5基因与PRRSV JX1、CH-1a株的核苷酸序列同源性分别为99.2%和95.2%,推导的氨基酸序列的同源性分别为98.5%和92.5%;层析扫描分析显示,目的蛋白的含量约占菌体总蛋白的30%,且具有良好的反应原性。GP5蛋白的表达为建立相应的血清学诊断方法奠定了基础。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白原核表达

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猪繁殖与呼吸综合症GP5蛋白的纯化与免疫活性分析

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安徽农业科学 2009年第21期37卷 9982-9983,9994页

作者：陈妍田宏尹双辉尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[目的]对猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)的GPS蛋白进行纯化与免疫活性分析,为建立相应的血清学诊断方法奠定基础。[方法]用构建好的重组表达质粒pGEX-6P-5转化BL21后经IPTG诱导表达。对表达产物进行可溶性分析,再将重组目的蛋白纯化后进行SDS... 详细信息

[目的]对猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)的GPS蛋白进行纯化与免疫活性分析,为建立相应的血清学诊断方法奠定基础。[方法]用构建好的重组表达质粒pGEX-6P-5转化BL21后经IPTG诱导表达。对表达产物进行可溶性分析,再将重组目的蛋白纯化后进行SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析,最后用重组抗原进行豚鼠免疫试验。[结果]经层析扫描分析目的蛋白含量占菌体蛋白总量30%左右,纯化后目的蛋白纯度可达80%。经Western-blot及豚鼠免疫试验对纯化蛋白进行分析后证明,表达的蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。[结论]该研究为深入研究PRRSVORFs基因及其编码蛋白功能提供了材料,同时也为生产猪繁殖与呼吸综合症病毒基因工程产品奠定了良好基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 表达纯化免疫实验

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用口蹄疫病毒非结构蛋白鉴别感染动物与疫苗免疫接种动物

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动物医学进展 2009年第10期30卷 101-104页

作者：吉艳红刘艳红中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的发生于偶蹄类动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行。疫苗接种是防控口蹄疫暴发的有效措施之一,而要控制口蹄疫的流行,首先要将病毒感染动物从疫苗接种群体中区分开来。以口蹄疫病毒非结... 详细信息

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的发生于偶蹄类动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行。疫苗接种是防控口蹄疫暴发的有效措施之一,而要控制口蹄疫的流行,首先要将病毒感染动物从疫苗接种群体中区分开来。以口蹄疫病毒非结构蛋白(NSPs)为抗原,分别利用口蹄疫病毒非结构蛋白2C、3B、3AB和3ABC作为鉴别诊断抗原,检测动物体内的NSPs抗体,可有效的区分感染动物与疫苗免疫接种动物。目前,许多实验室已展开此项工作的研究,这为防控口蹄疫打下了良好的基础。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白鉴别诊断

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羊痘病毒免疫学研究进展

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动物医学进展 2009年第12期30卷 67-70页

作者：颜新敏张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

羊痘病毒是在细胞浆中复制的DNA病毒,能引起羊和牛的皮肤病变。病毒编码一系列免疫调节基因和引起宿主细胞凋亡的基因来逃避宿主先天和后天的免疫反应。病毒感染机体后,主要引起宿主的细胞免疫。羊痘病毒能增强机体对其他免疫原的免疫... 详细信息

羊痘病毒是在细胞浆中复制的DNA病毒,能引起羊和牛的皮肤病变。病毒编码一系列免疫调节基因和引起宿主细胞凋亡的基因来逃避宿主先天和后天的免疫反应。病毒感染机体后,主要引起宿主的细胞免疫。羊痘病毒能增强机体对其他免疫原的免疫反应。

关键词：羊痘病毒免疫调节细胞凋亡细胞免疫

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病毒受体及其研究现状

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动物医学进展 2009年第7期30卷 95-100页

作者：赵清李冬中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

受体在宿主细胞与病毒的相互作用中起着极其重要的作用。病毒受体的特性与病毒的宿主范围、组织嗜性有密切关系,是病毒致病性的主要因素之一。病毒受体的研究方法有经典的研究方法,也有现代分子生物学方法。在病毒受体的研究中,通常以... 详细信息

受体在宿主细胞与病毒的相互作用中起着极其重要的作用。病毒受体的特性与病毒的宿主范围、组织嗜性有密切关系,是病毒致病性的主要因素之一。病毒受体的研究方法有经典的研究方法,也有现代分子生物学方法。在病毒受体的研究中,通常以分离纯化的细胞膜代替活体细胞来研究病毒受体。通过对病毒与细胞受体相互作用的深入研究,人们已经发现很多受体阻断剂例如植物凝集素和肝素等物质可以阻断病毒与受体的结合,从而为病毒病的防控提供繁殖一些有效的新方法。

关键词：病毒受体阻断剂

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C型口蹄疫病毒型特异性抗原的表达与鉴定

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安徽农业科学 2009年第35期37卷 17520-17522页

作者：高闪电独军政常惠芸丛国正邵军军林彤宋帅谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[目的]为C型FMDV型特异性多克隆抗体、单克隆抗体的制备及FMDV定型提供理论依据。[方法]以含有C型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因VP1的重组质粒pGEM-CP1为模板,设计特异性表达引物,扩增VP1及其C端编码区。对C型口蹄疫病毒VP1及其C端进行... 详细信息

[目的]为C型FMDV型特异性多克隆抗体、单克隆抗体的制备及FMDV定型提供理论依据。[方法]以含有C型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因VP1的重组质粒pGEM-CP1为模板,设计特异性表达引物,扩增VP1及其C端编码区。对C型口蹄疫病毒VP1及其C端进行原核表达,并测定反应原性。利用纯化的C型VP1及其C端融合蛋白建立间接ELISA,分别对O、A、C、Asia 1 4型豚鼠阳性血清进行检测,确定C型VP1及其C端与其他3型FMDV抗体的型间交叉反应性。[结果]构建了pPRO-CVP1、pPRO-CVP1c重组原核表达质粒,实现了C型口蹄疫病毒VP1及其C端的高效表达,目的蛋白的分子量大小分别为33和20 kD。Western blot显示,VP1及其C端融合蛋白均可与对应血清型的豚鼠阳性血清反应。C型VP1及其C端与其他血清型的FMDV阳性血清均未发生交叉反应,且以VP1C端的型特异性最好。[结论]获得了C型FMDV特异性抗原。

关键词： C型口蹄疫病毒血清学交叉反应血清分型

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不同类型消毒剂对口蹄疫病毒杀灭效果的试验

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畜牧与兽医 2009年第4期41卷 107-108页

作者：朱海霞张强李健颜新敏吴国华中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

1口蹄疫乳鼠组织毒的制备及稀释取本实验室保存新复壮的O型口蹄疫强毒(OPMF14,LD50=10-8·0),研磨制成1∶10的病毒悬液,加双抗置4℃浸毒24 h,3 000 r/m in离心10 m in,取上清液,用PBS做1∶500倍稀释,备用。2试验动物4日龄小白鼠由... 详细信息

1口蹄疫乳鼠组织毒的制备及稀释取本实验室保存新复壮的O型口蹄疫强毒(OPMF14,LD50=10-8·0),研磨制成1∶10的病毒悬液,加双抗置4℃浸毒24 h,3 000 r/m in离心10 m in,取上清液,用PBS做1∶500倍稀释,备用。2试验动物4日龄小白鼠由兰州兽医研究所动物场提供。3消毒剂毒性试验用去离子水将每种消毒剂分别做1∶50、1∶100、1∶200、1∶300和1∶400等不同倍数稀释,每个稀释度背部皮下注射4日龄乳鼠,每只乳鼠注射0·2 mL消毒剂稀释液,每组5只。并设阴性对照组(注射0·2 mL去离子水)和空白对照组各5只。在同一条件下观察72 h,重复试验1次。判定标准:阴性对照和空白对照组乳鼠全部健活,试验组乳鼠不死亡且接种部位无炎症或坏死等不良反应,判为该稀释度下消毒剂对试验动物安全。结果见表1。表1消毒剂毒性试验结果等消毒剂的开发和应用,在老药新用及药物协同消毒研究等方面有了较大的进展,但在实际应用中各具特色。含氯消毒剂因具有广谱、高效、低毒等特点,在兽医及生产实践中应用较广,其作用效果往往与有效氯含量有关,一般规律是浓度愈高效果愈好,但因剂型和主要成分的组成不同,对口蹄...

关键词：口蹄疫病毒杀灭效果消毒剂试验类型实验室上清液 PBS

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应用双重PCR方法检测羊支原体肺炎病原

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畜牧与兽医 2009年第12期41卷 23-26页

作者：储岳峰高鹏程赵萍贺英郭晗逯忠新赵海燕中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

通过对丝状支原体山羊亚种(*** ***,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(***,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp... 详细信息

通过对丝状支原体山羊亚种(*** ***,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(***,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp目的片段,但对其他病原菌不能扩增出任何条带,具有良好的特异性。敏感性试验表明,该方法能够分别检测出0.1ng的Mmc DNA和0.01 ng的Mo DNA,或同时检测出1ng Mmc和1ng Mo混合的DNA。用该双重PCR方法可对实验室保存的4株绵羊肺炎支原体和2株丝状支原体山羊亚种进行准确鉴定,并可从临床病料中检测出相应支原体,表明建立的双重PCR方法可用于Mmc和Mo的快速鉴定、实验室诊断和病原学调查。

关键词：丝状支原体山羊亚种绵羊肺炎支原体双重PCR 检测

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DNA干扰研究进展

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动物医学进展 2009年第1期30卷 71-75页

作者：陈启伟王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

DNA干扰(DNAi)即含有与体内某一基因的cDNA相同序列的DNA链,在没有启动子诱发其表达的情况下导致细胞内序列特异的基因表达被抑制。DNA干扰可参与真核生物的抗病毒侵染,阻断转座子的异常活动,调控基因表达等。随着RNA干扰技术缺陷的暴... 详细信息

DNA干扰(DNAi)即含有与体内某一基因的cDNA相同序列的DNA链,在没有启动子诱发其表达的情况下导致细胞内序列特异的基因表达被抑制。DNA干扰可参与真核生物的抗病毒侵染,阻断转座子的异常活动,调控基因表达等。随着RNA干扰技术缺陷的暴露以及人们对多种同源基因依赖性基因沉默的深入了解,DNAi有望成为最有潜力的基因干预治疗方法,并将在抵抗人类重大疾病和基因治疗方面发挥重要作用。

关键词： DNA干扰基因沉默基因阻滞

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免疫细胞和细胞因子在口蹄疫免疫应答中的作用

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中国人兽共患病学报 2009年第10期25卷 1017-1020页

作者：杜进鑫王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

口蹄疫是由小RNA病毒科口蹄疫病毒属的口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性、热性、高度接触性的传染病。已有一百多年的历史,至今尚未在全球范围得到消灭。[第一段]

关键词：口蹄疫病毒免疫应答细胞因子免疫细胞小RNA病毒科传染病接触性

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