检索结果-内蒙古大学图书馆

FMDV Asia1/HeB病毒株结构蛋白基因的克隆测序及B细胞抗原表位预测

华北农学报 2009年第4期24卷 57-63页

作者：张中旺张永光王永录潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮周鹏张昱张淑刚杜进鑫李正丰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

对口蹄疫病毒Asia1/HeB株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。采用DNAStar Protean软件对P1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行分析,综合预测其B细胞表位分布。结果表明,FMDV Asia I/HeB株P1基因... 详细信息

对口蹄疫病毒Asia1/HeB株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。采用DNAStar Protean软件对P1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行分析,综合预测其B细胞表位分布。结果表明,FMDV Asia I/HeB株P1基因长2199 bp,包含完整的开放阅读框,编码733个氨基酸,其中VP1长633 bp,编码211个氨基酸,VP2长654 bp,编码218个氨基酸,VP3长657 bp,编码219个氨基酸,VP4长255 bp,编码85个氨基酸。P1结构蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的β片层结构和转角结构,VP1、VP2和VP3上均有多个区域为B细胞优势表位,VP4上也有少量的潜在B细胞表位。与已鉴定的B细胞表位相比较,该方法预测的结果有较高的准确度。为试验确定FMDV AsiaI/HeB株P1结构蛋白的B细胞表位和反向疫苗学设计提供了理论基础。

关键词：口蹄疫病毒结构蛋白测序 B细胞表位

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猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定

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畜牧兽医学报 2009年第2期40卷 213-220页

作者：常艳燕郑海学靳野王光祥尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 广东省农业科学院兽医研究所广州510640

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带... 详细信息

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠcDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pPⅠ-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定。结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾。其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段。将pPⅠFMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应。利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒。

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA克隆 Poly(C) 反向遗传学

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MHC四聚体技术研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2017年第9期 74-79页

作者：邓阳高顺平吴国华张强中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)-四聚体(tetramer)技术是模拟生物体内抗原提呈原理,将4分子的生物素化的MHC-抗原肽单聚体与1分子荧光标记的链霉亲合素连接成四聚体复合物,定向、定量对抗原特异性T细胞进... 详细信息

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)-四聚体(tetramer)技术是模拟生物体内抗原提呈原理,将4分子的生物素化的MHC-抗原肽单聚体与1分子荧光标记的链霉亲合素连接成四聚体复合物,定向、定量对抗原特异性T细胞进行分析及检测。该技术已被用于疾病诊断、疾病防控和相关科学研究,尤其在病毒、癌症、自身免疫疾病方面具有广阔的应用前景,是当今免疫学和分子生物学领域研究的热点之一。文章就MHC的分子结构基础,四聚体的制备、优化及其应用做一综述。

关键词： MHCⅠ类分子 MHCⅡ类分子抗原特异性T细胞抗原肽四聚体

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猪带绦虫六钩蚴TsO1基因的克隆、表达与结构预测

猪带绦虫六钩蚴TsO1基因的克隆、表达与结构预测

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：才学鹏景志忠窦永喜蒙学莲吴国华骆学农郑亚东中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点实验室

从猪带绦虫六钩蚴cDNA 表达文库中筛选、克隆的TSOl 基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建pGEX-GST-TSO1的融合表达的重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG 诱导表达后,经SDS-PAGE 和Western 蛋白分析,成功地高效表达了约40kD... 详细信息

从猪带绦虫六钩蚴cDNA 表达文库中筛选、克隆的TSOl 基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建pGEX-GST-TSO1的融合表达的重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG 诱导表达后,经SDS-PAGE 和Western 蛋白分析,成功地高效表达了约40kD 左右的融合蛋白质,与预测的分子量大小一致,表达量达达40%左右,具有免疫学活性,而且表达的产物呈可溶性,未形成包涵体,这与用蛋白质软件分析的TSO1编码蛋白水溶性相一致。

关键词：六钩蚴免疫筛选基因克隆融合表达结构预测

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基于FMDV IRES的双顺反子载体的构建及体外表达分析

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中国生物工程杂志 2007年第8期27卷 29-33页

作者：郑海学郭慧琛靳野刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重... 详细信息

利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重组质粒转染BHK-21细胞,培养20～48h,在紫外显微镜下观察,能够看到典型的绿色荧光,表明载体能够体能够利用FMDV的IRES能够介导非帽依赖性表达外源基因。并通过流式细胞仪,与同样是CMV启动转录egfp的pGFPN1质粒在细胞中的表达水平进行了比较。该载体的成功构建为体外表达双基因、双顺反子逆转录载体构建以及相关应用奠定基础,并有作为基因疫苗和标记定位基因治疗载体的潜力。

关键词：口蹄疫病毒 IRES 双顺反子双顺反子载体

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口蹄疫病毒OH株结构蛋白基因VP1的克隆与表达

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中国兽医科学 2006年第7期36卷 515-518页

作者：龚真莉刘湘涛尚佑军田宏吴锦艳尹双辉陈国栋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

采用RT-PCR方法扩增获得了O型口蹄疫病毒的主要免疫原VP1基因,将其插入pMD18-T载体进行序列分析,结果表明,所获得的基因片段含有完整的FMDV结构蛋白VP1编码区。根据表达载体pQE-Trisystem的克隆位点序列和该VPl基因片段的末端序列设计了... 详细信息

采用RT-PCR方法扩增获得了O型口蹄疫病毒的主要免疫原VP1基因,将其插入pMD18-T载体进行序列分析,结果表明,所获得的基因片段含有完整的FMDV结构蛋白VP1编码区。根据表达载体pQE-Trisystem的克隆位点序列和该VPl基因片段的末端序列设计了1对表达引物,以重组pMD-T-VP1阳性质粒为模板,扩增获得了VP1基因,通过酶切将其克隆至表达载体pQE-Trisystem上。经测序证实,重组表达质粒所含的外源基因VP1编码框正确无误。将重组表达质粒pQE-VP1转化至大肠埃希氏菌M15,通过IPTG诱导促使VP1基因高效表达,SDS- PAGE和Western-blot分析表明,表达产物大小与预期的结果(26 ku)一致,且具有良好的反应原性。以2 mmol／L IPTG诱导表达5 h时表达量最高,其中70％-80％的目的蛋白存在于菌体裂解后的上清中,表明外源基因VP1主要以可溶性方式表达。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因基因克隆表达

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口蹄疫表位疫苗的研究进展

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 570-573,591页

作者：张中旺张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

口蹄疫（Foot-and—Mouth Disease，FMD）是偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，被国际兽疫局列为头号A类传染病。该病传播途径多、传播速度快，曾多次在世界发生大流行。

关键词：口蹄疫表位疫苗国际兽疫局传播途径传播速度传染病接触性大流行

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猪水泡病病毒非结构蛋白编码区的克隆与序列分析

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中国兽医科技 2004年第7期34卷 13-18页

作者：冶贵生刘湘涛张彦明马玉花邓明俊洪海霞韩雪清中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构... 详细信息

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构蛋白编码区核苷酸长 4 0 0 2nt ,氨基酸长 1334aa ;与J1’73、H/ 3’76、SVDV(Seechrn等测株 )、NET/ 1/ 92的核苷酸同源性分别为 98.6 %、98.3%、98.3%、91.2 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 98.9%、99.1%、99.2 %和 97.2 %。

关键词：猪水泡病病毒非结构蛋白编码区序列分析同源性

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口蹄疫病毒亚洲I型YNBS/58株P12A-3C转基因植物双元表达载体的构建

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中国人兽共患病学报 2006年第11期22卷 1059-1061,1064页

作者：王炜张永光王永录方玉珍潘丽蒋守田刘力宽孙元吕建亮智晓莹黄振华中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的双元载体是目前转基因植物工程普遍应用的载体,本文将口蹄疫病毒P12A基因、3C基因串联,构建植物表达载体pBin-438P12A-3C。方法为便于实验操作,本试验采用先将基因片段P12A、3C构建到一个中间质粒pcDNA3.1(+)的策略,构建成pcDNA3.1(... 详细信息

目的双元载体是目前转基因植物工程普遍应用的载体,本文将口蹄疫病毒P12A基因、3C基因串联,构建植物表达载体pBin-438P12A-3C。方法为便于实验操作,本试验采用先将基因片段P12A、3C构建到一个中间质粒pcDNA3.1(+)的策略,构建成pcDNA3.1(+)-P12A-3C。结果通过对构建好的pBin438-P12A-3C(Mini-Ti)重组质粒进行PCR鉴定和序列测定,证明中间表达载体构建成功。结论通过三亲杂交法将重组质粒载体pBin438-P12A-3C导入到农杆菌GV3101,通过抗性筛选、PCR鉴定和序列测定,证明构建成功,与农杆菌中的help-Ti质粒共同组成植物双元表达载体,为以后的植物转化奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒转基因植物表达载体农杆菌

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双重PCR快速鉴别羊痘病毒和羊口疮病毒

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中国人兽共患病学报 2008年第10期24卷 945-948页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞朱彩珠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

根据羊痘病毒的P32基因和羊口疮病毒H2L基因序列设计合成两对引物,建立了一种快速鉴别诊断羊痘病毒和羊口疮病毒的双重PCR方法。该方法可对羊痘病毒和羊口疮病毒分别扩增出969bp和507bp的特异性片段,对痘苗病毒等其它病原和健康羊皮肤... 详细信息

根据羊痘病毒的P32基因和羊口疮病毒H2L基因序列设计合成两对引物,建立了一种快速鉴别诊断羊痘病毒和羊口疮病毒的双重PCR方法。该方法可对羊痘病毒和羊口疮病毒分别扩增出969bp和507bp的特异性片段,对痘苗病毒等其它病原和健康羊皮肤组织不能扩增出任何片段。敏感性试验表明该方法可分别扩增出101.66TCID50山羊痘病毒和102.33TCID50羊口疮病毒。对从甘肃境内采集的11份临床病料进行检测,其中8份可扩增出969bp的羊痘病毒特异性片段,3份可扩增出507bp的羊口疮病毒特异性片段,与病毒分离鉴定结果一致。

关键词：双重PCR 鉴别诊断羊痘病毒羊口疮病毒

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