检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2011年第12期41卷 1248-1252页

作者：卢国栋张克山刘永杰尚佑军郭建宏郑海学田宏刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

分别从BHK-21细胞处理方法、样品上样量、聚丙烯酰胺凝胶浓度和染色方法4个方面优化了BHK-21细胞蛋白双向凝胶电泳的技术条件,以为口蹄疫病毒感染细胞比较蛋白质组学研究奠定基础。结果表明,处理细胞时,采用超声破碎方法优于反复冻融方... 详细信息

分别从BHK-21细胞处理方法、样品上样量、聚丙烯酰胺凝胶浓度和染色方法4个方面优化了BHK-21细胞蛋白双向凝胶电泳的技术条件,以为口蹄疫病毒感染细胞比较蛋白质组学研究奠定基础。结果表明,处理细胞时,采用超声破碎方法优于反复冻融方法;用考马斯亮蓝染色时,7cm胶条上样量为100μg时图谱的蛋白点较多且分离清晰;浓度为10%的聚丙烯酰胺凝胶所得的蛋白点较多;通过2种染色方法的比较,硝酸银染色方法优于考马斯亮蓝染色方法。优化后的双向凝胶电泳技术得到的图谱,蛋白点多且清晰,重复性好,拖尾现象减少,符合软件分析的要求,可用于口蹄疫病毒感染BHK-21细胞蛋白质组学研究。

关键词： BHK-21细胞口蹄疫病毒双向凝胶电泳条件优化

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口蹄疫病毒3C基因与增强型绿色荧光蛋白基因的真核共表达

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中国兽医科学 2011年第5期41卷 479-483页

作者：魏衍全田宏吴锦艳陈妍尚佑军窦永喜刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为验证siRNAs对口蹄疫病毒(FMDV)复制的抑制效果,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Asia 1型口蹄疫病毒Jiangsu/China/2005株的3C基因,克隆入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-N1中,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒... 详细信息

为验证siRNAs对口蹄疫病毒(FMDV)复制的抑制效果,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Asia 1型口蹄疫病毒Jiangsu/China/2005株的3C基因,克隆入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-N1中,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染PK-15细胞,检测EGFP的表达和3C基因转录水平。结果显示,经PCR及双酶切鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与Jiangsu/China/2005株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内有EGFP表达,实时荧光定量PCR检测到细胞内有3C基因的转录。证实,成功构建了FMDV 3C基因与EGFP共表达质粒并在PK-15细胞中获得了表达。

关键词：口蹄疫病毒 3C基因增强型绿色荧光蛋白真核共表达

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酶联免疫吸附试验在口蹄疫诊断中的研究进展

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中国农学通报 2011年第29期27卷 27-32页

作者：厍大亮李冬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046

防治口蹄疫的关键是做出及时、准确的诊断。酶联免疫吸附试验(ELISA)有诸多优点,因此不论在实验室还是在田间,都是常用的口蹄疫诊断方法。介绍了传统ELISA和新型ELISA方法的原理、特点及最新研究进展。传统ELISA包括液相阻断ELISA、间接... 详细信息

防治口蹄疫的关键是做出及时、准确的诊断。酶联免疫吸附试验(ELISA)有诸多优点,因此不论在实验室还是在田间,都是常用的口蹄疫诊断方法。介绍了传统ELISA和新型ELISA方法的原理、特点及最新研究进展。传统ELISA包括液相阻断ELISA、间接ELISA、固相竞争ELISA、间接夹心ELISA。新型ELISA包括单克隆抗体ELISA、PCR-ELISA、生物素-亲和素ELISA及Dot-ELISA。ELISA的发展方向应当是既灵敏稳定,又操作方便、易于实现自动化。随着技术的进步,ELISA在临床诊断和流行病学调查中将会有更加广泛的应用。

关键词：口蹄疫诊断方法酶联免疫吸附试验

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PCV2衣壳蛋白肽段的表达及其血清抗体间接ELISA检测方法

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西北农业学报 2011年第1期20卷 1-7页

作者：杨顺利尹双辉尚佑军沈小燕刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

利用可溶性重组PCV2-Cap蛋白肽段为抗原,建立PCV2血清抗体间接ELISA诊断方法(rhcap-ELISA)。将PCV2cap基因中含主要表位的片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,转化***,降低诱导温度至18℃诱导,获得大小为34 ku的可溶性融合蛋白。Western blo... 详细信息

利用可溶性重组PCV2-Cap蛋白肽段为抗原,建立PCV2血清抗体间接ELISA诊断方法(rhcap-ELISA)。将PCV2cap基因中含主要表位的片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,转化***,降低诱导温度至18℃诱导,获得大小为34 ku的可溶性融合蛋白。Western blotting试验证实该融合蛋白具有很强的免疫学活性,通过亲和层析柱对可溶性蛋白进行纯化。用融合表达的可溶性蛋白肽段作为抗原,建立猪圆环病毒(PCV2)血清抗体间接ELISA诊断方法。该方法的交叉反应结果表明,重组抗原与PRRSV、CSF、PPV和PRV阳性血清之间不存在交叉反应;用rhcap-ELISA和商品化的同类试剂盒(PCV2-Ab-Kit)检测137送检血清样品,2种试剂盒的阳性检测率分别为79.56%和83.21%。因此,rhcap-ELISA猪圆环病毒抗体检测试剂盒具有良好的敏感性和特异性,适合于在大规模的PCV2血清抗体的检测工作中使用。

关键词：圆环病毒2型可溶性表达 ELISA 抗体检测

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副猪嗜血杆菌S-核糖基高半胱氨酸酶基因序列分析与推导蛋白三维结构的分子模拟

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中国兽医学报 2011年第1期31卷 40-44页

作者：马艳平张杰陈豪泰马丽娜赵娜丁耀忠刘文倩王猛刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046 广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640

利用PCR方法获得副猪嗜血杆菌S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因全长DNA,将PCR纯化产物与pMD18-T载体连接并转化*** DH5α菌株,重组阳性质粒测序并采用生物信息学软件对所推导的氨基酸序列进行三维结构分析。结果表明,该基因全长510bp,并... 详细信息

利用PCR方法获得副猪嗜血杆菌S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因全长DNA,将PCR纯化产物与pMD18-T载体连接并转化*** DH5α菌株,重组阳性质粒测序并采用生物信息学软件对所推导的氨基酸序列进行三维结构分析。结果表明,该基因全长510bp,并与GenBank中登录的其他5株菌株luxS基因完整参考序列进行比较,同源性均在70%以上。用ExPAsy软件包预测了推导蛋白的特性,运用Swiss-PDB viewer软件的SWISS-Model处理器,并利用同源建模的思想建立HPS-luxS的三维结构。拉马钱德兰图证明,构建的luxS蛋白的空间结构是合理的。

关键词：副猪嗜血杆菌 S-核糖基高半胱氨酸酶序列分析分子模拟

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反向遗传技术在猪繁殖与呼吸综合征研究中的应用

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中国农学通报 2011年第7期27卷 364-368页

作者：谷元兴王猛刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起,严重危害全世界养猪业。PRRSV与宿主细胞的相互作用、致病机理,其基因组及蛋白质对致病性的影响等仍是未解之谜。反向遗传技术为研究PRRSV提供了技术支撑。现基于病毒拯... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起,严重危害全世界养猪业。PRRSV与宿主细胞的相互作用、致病机理,其基因组及蛋白质对致病性的影响等仍是未解之谜。反向遗传技术为研究PRRSV提供了技术支撑。现基于病毒拯救、疫苗研制、分子病原学诊断等方面的内容,对反向遗传技术在PRRS研究中的应用作一综述。

关键词：反向遗传技术病毒拯救 RNA病毒猪繁殖与呼吸综合征应用

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RNA编辑功能和RNA干扰

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生物技术通报 2011年第5期27卷 21-25页

作者：代鹏沈辉马军武刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

RNA编辑被认为是生命体一种新的基因加工与修饰现象,是指DNA转录成RNA后除RNA剪切外的其他加工过程,以核苷酸的删除、插入或替换等方式改变遗传信息,揭示生物进化过程中基因修饰和调控的另一个重要途径,是对中心法则的重要补充。而RNAi... 详细信息

RNA编辑被认为是生命体一种新的基因加工与修饰现象,是指DNA转录成RNA后除RNA剪切外的其他加工过程,以核苷酸的删除、插入或替换等方式改变遗传信息,揭示生物进化过程中基因修饰和调控的另一个重要途径,是对中心法则的重要补充。而RNAi是一种由dsRNA介导的,在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因表达的基因调节途径。着重介绍RNA编辑功能、RNA编辑与RNA干扰关系。

关键词： RNA编辑功能插入/删除替换 RNA干扰

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磁小体研究进展

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中国农学通报 2011年第24期27卷 8-12页

作者：高宗良谷元兴赵峰刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

趋磁细菌(magnetotactic bacteria,MTB)能够在细胞内合成由生物膜包裹的纳米级磁铁矿粒子——磁小体(magetosome)。磁小体的合成过程,尤其是铁离子的反应途径及吸收转运受到严格的生物调控。磁小体完美的晶体结构使其在医学成像、磁介... 详细信息

趋磁细菌(magnetotactic bacteria,MTB)能够在细胞内合成由生物膜包裹的纳米级磁铁矿粒子——磁小体(magetosome)。磁小体的合成过程,尤其是铁离子的反应途径及吸收转运受到严格的生物调控。磁小体完美的晶体结构使其在医学成像、磁介导热疗、药物输送等众多领域都有良好的应用价值。主要综述了磁小体矿化过程中铁的反应途径和吸收转运系统,以及磁小体在各方面的应用,并对未来的研究方向做了展望。

关键词：磁小体铁反应途径吸收转运应用

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山羊传染性胸膜肺炎病原的检测

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湖北农业科学 2011年第2期50卷 340-341页

作者：赵萍郭晗储岳峰贺英高鹏程张念章逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

湖北某地羊场发生严重呼吸道疾病,经初步诊断为疑似山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)。将患病山羊肺组织提取基因组DNA,以此为模板根据OIE推荐的PCR-REA方法和Mccp-specificPCR方法进行检测,结果这两种方法都得到了预期的片段。说明送检山羊肺... 详细信息

湖北某地羊场发生严重呼吸道疾病,经初步诊断为疑似山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)。将患病山羊肺组织提取基因组DNA,以此为模板根据OIE推荐的PCR-REA方法和Mccp-specificPCR方法进行检测,结果这两种方法都得到了预期的片段。说明送检山羊肺组织中存在山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),也证实了国内Mccp的流行。

关键词：山羊传染性胸膜肺炎山羊支原体山羊肺炎亚种 PCR

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重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因

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生物技术通报 2011年第7期27卷 186-190页

作者：张念章储岳峰赵萍高鹏程贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown。通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到... 详细信息

利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown。通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到Hup-kan-Hdown的量最多。将此外源打靶基因的两端引入PstI和SacI酶切位点,克隆至具有迁移作用的自杀质粒pDS132,构建了可在大肠杆菌***10-λpir中稳定遗传的打靶载体,为下一步建立副猪嗜血杆菌的高效基因打靶系统奠定基础。

关键词：副猪嗜血杆菌重叠PCR 外源打靶基因

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