检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒学 2006年第5期21卷 454-457页

作者：龚真莉刘湘涛田宏吴锦艳代兴国尚佑军陈国栋中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

本研究将已构建好的、包含口蹄疫病毒P1+2A基因的重组表达质粒pQE-Tri/P1+2A经质脂体2000转染哺乳动物细胞BHK-21,转染后一定时间进行检测。通过SDS-PAGE、Western-blotting、荧光抗体染色、ELISA等检测方法表明,FMDVP1+2A基因片段在BHK... 详细信息

本研究将已构建好的、包含口蹄疫病毒P1+2A基因的重组表达质粒pQE-Tri/P1+2A经质脂体2000转染哺乳动物细胞BHK-21,转染后一定时间进行检测。通过SDS-PAGE、Western-blotting、荧光抗体染色、ELISA等检测方法表明,FMDVP1+2A基因片段在BHK-21细胞中成功表达,表达的蛋白能被口蹄疫阳性血清所识别而且具有良好的生物学活性。这一结果的取得,为进一步研制新型口蹄疫基因工疫苗及其配套诊断试剂奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 P1+2A基因表达载体pQE-Trisystem BHK-21细胞转染

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猪瘟病毒结构蛋白E^(rns)在***中的高效表达及纯化

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中国病毒学 2006年第1期21卷 75-77页

作者：尹双辉刘湘涛韩雪清尚佑军孙士琪中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

The Erns gene was amplified by RT-nPCR from C-strain of Classical swine fever virus(CSFV).Then the Erns gene was cloned into pGEX6P-1 *** expression products were analysed by SDS-PAGE and Western blotting *** inclusion bodies were recovered from bacterial lysate by centrifugation and washed with buffer,and then dissolved in denaturing *** protein was refolded by dilution *** protein reacted strongly with the positive serum of CSFV,which indicated that the protein has immunogenic.

关键词：猪瘟病毒 E^ms gene 蛋白表达

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用原位RT-PCR对BHK-21细胞中的FMDV检测和定位

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中国人兽共患病杂志 2005年第12期21卷 1086-1088页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

目的为了明确FMDV在BHK-21细胞中的复制和增殖部位,建立原位检测FMDV的方法。方法以地高辛标记的寡核苷酸作为探针,用间接原位RT-PCR技术对实验接种FMDV的BHK-21细胞中的FMDV RNA进行检测和定位。结果在接毒细胞的细胞质中有大量强阳性... 详细信息

目的为了明确FMDV在BHK-21细胞中的复制和增殖部位,建立原位检测FMDV的方法。方法以地高辛标记的寡核苷酸作为探针,用间接原位RT-PCR技术对实验接种FMDV的BHK-21细胞中的FMDV RNA进行检测和定位。结果在接毒细胞的细胞质中有大量强阳性蓝染颗粒,阴性对照细胞中没有蓝染颗粒出现,也没有明显的背景染色。结论结果表明FMDV RNA在细胞的细胞质中进行复制和增殖,同时也表明原位RT-PCR是检测细胞内病毒的一种敏感、特异的方法。

关键词：原位RT-PCR FMDV BHK-21细胞原位杂交

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荧光光谱法和分子模拟技术研究考马斯亮蓝G-250与牛血清白蛋白的相互作用

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光谱学与光谱分析 2017年第8期37卷 2474-2479页

作者：王永刚杨光瑞马雪青冷非凡马建忠王晓力兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050

采用多种光谱技术结合圆二色谱技术研究了考马斯亮蓝G-250(CBBG-250)相互作用于牛血清白蛋白(BSA),探究了两者之间的作用机理。荧光光谱结果表明BSA与CBBG-250结合形式是静态猝灭,随CBBG-250浓度增加,其形成常数随温度逐渐减小,结合比为... 详细信息

采用多种光谱技术结合圆二色谱技术研究了考马斯亮蓝G-250(CBBG-250)相互作用于牛血清白蛋白(BSA),探究了两者之间的作用机理。荧光光谱结果表明BSA与CBBG-250结合形式是静态猝灭,随CBBG-250浓度增加,其形成常数随温度逐渐减小,结合比为1∶1,根据Stern-Volmer曲线计算焓变值(ΔH)和熵变值(ΔS)分别为-4.38kJ·mol^(-1)和-6.16J·mol^(-1)·K^(-1),均小于零,证明该过程是一个自发过程。傅里叶红外光谱测定结果表明CBBG-250的加入引起BSA结构的变化,随着CBBG-250溶液浓度的增加,BSA中色氨酸微环境极性被改变,在1 600~1 700cm^(-1)(酰胺带Ⅰ)和1 600~1 500cm^(-1)(酰胺带Ⅱ)处的特征吸收带蓝移。其中1 650cm^(-1)移动至1 710cm^(-1),1 544cm^(-1)移动到1 573cm^(-1),显示BSAα-螺旋(1 650~1 658cm^(-1))和β-折叠(1 620~1 640cm^(-1),1 675cm^(-1))结构发生变化,且α-螺旋含量比结合前有所降低。圆二色谱分析结果表明,两者间通过氢键和范德华力为主的作用力使得BSA二级结构发生变化,α-螺旋含量由42.15%下降至1.27%,该结果进一步被分子建模对接技术证明。

关键词：光谱法分子模拟考马斯亮蓝G-250 牛血清白蛋白相互作用

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Asia1型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

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生物工程学报 2009年第5期25卷 767-772页

作者：林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulos... 详细信息

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带。经条件优化,组装成检测Asia1型口蹄疫的诊断试纸条。用该试纸条分别对A、O、C和Asia1型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、O、C型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好。用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10?4。该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%。初步实验确定该试纸条在4oC下可保存3个月、37oC和室温下大概可保存1周左右。该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值。

关键词： Asia1型FMDV 单克隆抗体胶体金免疫层析法

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猪瘟野毒E2基因同源性比较

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中国兽医科技 2003年第2期33卷 13-16页

作者：郭慧琛邱昌庆周继章孙世琪高双娣程淑敏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

以人工感染发病猪的脾为材料提取总RNA ,根据已报道的猪瘟病毒基因组序列 ,设计合成了 2对引物 ,以总RNA为模板 ,利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)、套组聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术 ,对流行于我国甘肃省、陕西省、宁夏和广西自... 详细信息

以人工感染发病猪的脾为材料提取总RNA ,根据已报道的猪瘟病毒基因组序列 ,设计合成了 2对引物 ,以总RNA为模板 ,利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)、套组聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术 ,对流行于我国甘肃省、陕西省、宁夏和广西自治区的 5株野毒株的主要外膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定 ,用DNAstar软件比较分析了 5株野毒之间及其与猪瘟兔化弱毒株 (C ST株 )E2基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性。结果发现 ,5株野毒与C ST株核苷酸序列的同源性为 81.7%～ 83.1% ,氨基酸同源性为 87.3%～ 88.6 % ,表明它们之间存在较大的差异 ;但 5株野毒之间核苷酸序列的同源性高达 98.8%～ 99.3% ,氨基酸同源性为96 .6 %～ 99.2 % 。

关键词：猪瘟猪瘟病毒 E2基因序列分析同源性

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达康灭毒灵消毒性能的试验观察

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中国兽医科技 2003年第8期33卷 37-39页

作者：康健张永兴靳野尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

为了解达康灭毒灵的消毒效果、稳定性、腐蚀性与毒性 ,进行了悬液法定量杀菌 (毒 )试验、热稳定性试验、金属腐蚀性试验以及动物毒性试验。结果 ,在室温 (2 0℃左右 )下 ,以其含有效氯 10 0mg/L溶液对悬液中金黄色葡萄球菌作用 2 0min ... 详细信息

为了解达康灭毒灵的消毒效果、稳定性、腐蚀性与毒性 ,进行了悬液法定量杀菌 (毒 )试验、热稳定性试验、金属腐蚀性试验以及动物毒性试验。结果 ,在室温 (2 0℃左右 )下 ,以其含有效氯 10 0mg/L溶液对悬液中金黄色葡萄球菌作用 2 0min ,对口蹄疫病毒 (OY80MF15鼠化毒 )作用2 0min ,杀灭率均达 10 0 % ;其粉剂于 5 4℃密封存放 14d ,有效氯含量下降率为 2 .1% ;含有效氯2 5 0 0mg/L的达康灭毒灵溶液对铝、碳钢、铜、不锈钢的腐蚀速率分别为 1.2 4 2、1.35 6、0 .4 6 4和 0mm/a ;其水溶液经口服途径对成年小鼠的LD50 为 2 5 48mg/kg ,经皮下途径对乳鼠的LD50 为1186mg/kg,对兔皮肤刺激反应积分为 0。试验表明 ,达康灭毒灵具有良好的杀灭微生物效果与稳定性 ,毒性小。

关键词：达康灭毒灵消毒性能热稳定性试验金属腐蚀性试验动物毒性试验悬液法定量杀菌试验消毒剂

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用3′RACE方法扩增并克隆口蹄疫病毒基因组3′末端序列

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中国兽医学报 2003年第6期23卷 524-526页

作者：刘光清刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

应用 3′RACE方法扩增并克隆了口蹄疫病毒 ( FMDV) OH99株基因组 3′端真实序列。测序结果表明 ,所扩增的目的基因片段长 15 0 0 nt,包括 3D基因部分序列、3′端非编码区 ( Non- Coding Region,NCR)和 Poly( A)尾巴 ,其中 3′NCR位于终... 详细信息

应用 3′RACE方法扩增并克隆了口蹄疫病毒 ( FMDV) OH99株基因组 3′端真实序列。测序结果表明 ,所扩增的目的基因片段长 15 0 0 nt,包括 3D基因部分序列、3′端非编码区 ( Non- Coding Region,NCR)和 Poly( A)尾巴 ,其中 3′NCR位于终止密码子 TAA之后 ,长 93nt,Poly( A)尾序列至少含有 5 6个 A。与参考毒株进行序列比较 ,结果显示 ,OH99株与 OTY TW/ 97株的核苷酸同源性较高 ,为 91.4 % ,而与 O1K、CHINA99、A12等毒株的核苷酸同源性较低 ,其同源性分别为 6 8.1%、71.0 %、70 .2 %。 3′NCR的末端存在保守性较高的基序 :CCCTCAGATG,TTTTCCC-CGCTTCCT。本研究为进一步研究 FMDV基因组的功能、构建 OH99株的反向遗传操作系统奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 3’端非编码区序列分析 3’RACE方法基因克隆同源性 3’末端序列

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疯牛病与新型克-雅病研究进展

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基础医学与临床 2005年第12期25卷 1090-1094页

作者：陈豪泰张杰刘永生吴润刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

朊病毒是一种不含核酸的感染性蛋白颗粒,能导致哺乳动物中枢神经系统组织的病变,其繁殖是通过构象变构由正常型(PrPC)转变为致病型(PrPSc)而完成的。这两种结构异型体来源于同一基因,具有相同的氨基酸序列,但其二级和三级结构不同。作... 详细信息

朊病毒是一种不含核酸的感染性蛋白颗粒,能导致哺乳动物中枢神经系统组织的病变,其繁殖是通过构象变构由正常型(PrPC)转变为致病型(PrPSc)而完成的。这两种结构异型体来源于同一基因,具有相同的氨基酸序列,但其二级和三级结构不同。作者就疯牛病和新型克-雅病的病原、结构特征、诊断与防治作此综述。

关键词：朊病毒疯牛病新型克-雅病结构

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T7 RNA聚合酶表达系统的真核化及其偶联表达系统的建立

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生物工程学报 2007年第5期23卷 947-952页

作者：郑海学靳野尹双辉郭慧琛尚佑军白兴文刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院研究生院北京100081

为了使T7RNA聚合酶(T7RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系。然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型... 详细信息

为了使T7RNA聚合酶(T7RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系。然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定向克隆进原核载体pET-40a-c(+)的T7启动子下游,得到的重组质粒pIERS-EGFP-E。用该质粒分别转染上述两种细胞,在紫外显微镜下都能够观察到绿色荧光,表明真核化的T7RNAP偶联表达系统建立。并利用流式细胞仪对偶联表达水平进行了分析。这为利用该系统真核高效表达外源蛋白奠定了坚实的基础。用实验证明了FMDV5′端含有IERS具有介导非帽依赖性的翻译的功能,为以IERS为基础的双顺反子表达系统的建立及深入研究IERS与相关蛋白的功能奠定了基础。T7RNAP偶联表达体系是一种良好的外源基因表达体系。

关键词：口蹄疫病毒 IERS T7RNA聚合酶表达系统偶联表达系统

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